建立了基于聚（乙二醇-ran-丙二醇）單丁基醚（聚合物）與磷酸鹽、氯化鈉的雙水相體系對乳清分離蛋白（WPI）中的α-乳白蛋白（α-LA）和β-乳球蛋白（β-LG）進行分離,并對其分離條件進行了優(yōu)化。系統(tǒng)地研究了雙水相體系p H值、聚合物與KH₂PO₄溶液體積比、Na Cl添加量和WPI濃度對α-LA和β-LG的分離效果的影響,采用液相色譜法對α-LA和β-LG的分離效果進行評價。結(jié)果表明,聚合物/KH2PO4雙水相體系p H=4.0,40%（m/m）聚合物與15.5%（m/m）KH2PO4的體積比為4 m L∶4 m L,Na Cl添加量為0.40 g/10 m L,WPI濃度為1 mg/m L時,α-LA和β-LG分離效果最好,上相中α-LA的萃取率為98.2%,下相中β-LG的萃取率為96.6%。 

【文章來源】：分析化學. 2016,44(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

聚合物與磷酸鹽體系的相圖

!1125kJ/mol，具有較高電荷的陰離子(HPO2!4)鹽析能力更高，并與水結(jié)合得更好，具有更強的成相能力，這一點在圖1中也得到證實，聚合物與K2HPO4形成的雙水相具有更小的單相區(qū)，更容易形成雙水相。3．2WPI中α-LA和β-LG含量測定配制0．1～2．5mg/mL的α-LA標準品溶液和0．2～5．0mg/mL的β-LG標準品溶液，進行液相色譜圖2α-乳白蛋白標準品，β乳球蛋白標準品和乳清分離蛋白的液相色譜圖Fig．2Liquidchromatogramsofα-lactalbumin(α-LA)standard，β-lactoglobulin(β-LG)standardandwheyproteinisolate(WPI)檢測，繪制標準曲線。其液相色譜圖如圖2所示。表1聚合物與磷酸鹽體系的相圖參數(shù)Table1Phasediagramparametersofpolymerandphosphatesystem雙水相體系A(chǔ)queoustwo-phasesystem(ATPS)abcＲ2聚合物-磷酸二氫鉀Polymer-KH2PO4680．6172!1．67303．293×10!30．9940聚合物-磷酸氫二鉀Polymer-K2HPO4146．3499!0．96196．672×10!30．9789聚合物-磷酸二氫鉀/磷酸氫二鉀Polymer-KH2PO4/K2HPO48．25650．57388．853×10!30．9980a，b，c和Ｒ2分別為可調(diào)參數(shù)和系數(shù)，用來描述實驗的雙結(jié)點數(shù)據(jù)。a，b，candＲ2wereadjustableparametersandcoefficients，whichwereusedtodescribetheexperimentalbinodaldata．以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，α-LA在0．1～2．5mg/mL、β-LG在0．2～5．0mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，α-LA和β-LG線性方程分別為y=1414．2x－129．86(Ｒ2=0．9998)和y=473．47x+16．008(Ｒ2=0．9989)。將WPI進行液相色譜分析所得到的α-LA和β-LG的含量分別為19%和73%，與市售WPI中α-LA和β-LG標注含量基本一致。

n離心20min，使兩相充分分離。4℃［12］下貯藏12～16h，適當稀釋后進行液相色譜檢測。檢測條件:AgilentC8柱(150mm×4．6mm，5μm);流動相A:0．1%三氟乙酸(TFA)溶液;流動相B:0．1%TFA-乙腈溶液;流速:1．00mL/min;檢測波長:280nm;梯度洗脫:流動相B在5min內(nèi)從30%升到35%，在20min內(nèi)從35%升到55%。按式(3)～(5)［13］計算分離參數(shù):Ｒ=Vup/Vdown(3)Kp=Cup/Vdown(4)Y(%)=CV/C0V0·x×100%(5)其中，Ｒ為相比;Kp為分配系數(shù);Y為萃取率;C為雙水相中α-LA和β-LG的濃度;V為上/下相體積;圖1聚合物與磷酸鹽體系的相圖Fig．1PhasediagramofpolymerandphosphatesystemC0為加入雙水相中WPI濃度;V0為加入雙水相中WPI體積;x為WPI中α-LA和β-LG所占質(zhì)量百分比。3結(jié)果與討論3．1聚合物/磷酸鹽相圖KH2PO4，K2HPO4和KH2PO4-K2HPO4與聚合物形成的雙水相體系繪制的相圖如圖1。根據(jù)Merchuk公式y(tǒng)=aexp(bx0．5－cx3)［11］，用Matlab軟件對雙水相相圖進行擬合，結(jié)果如表1所示，其中a，b，c和Ｒ2分別為可調(diào)參數(shù)和系數(shù)，用來描述實驗的雙結(jié)點數(shù)據(jù)。鹽離子和水化合的摩爾熵是形成兩相的驅(qū)動力［14］，雖然相同濃度的KH2PO4和K2HPO4都含有陽離子K+，但陰離子不同，兩種陰離子的吉布斯自由能ΔGhyd(H2PO4!)=!465kJ/mol，ΔGhyd(HPO2!4)=第5期張鶴等:聚合物/磷酸鹽雙水相分離乳清分離蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白條件的優(yōu)化755


本文編號：3000147