本文關(guān)鍵詞：氨基酸柱前衍生化HPLC方法發(fā)展及應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：氨基酸是蛋白質(zhì)的基本單元，，是人體完成生理功能的必須物質(zhì)。發(fā)展普適性廣、靈敏度高、分離效能好、重復性優(yōu)良的HPLC分析方法，一直是分析化學領(lǐng)域探索的重要課題。 分別以鄰苯二甲醛(OPA)及2，4-二硝基氟苯(DNFB)為衍生化試劑，發(fā)展氨基酸的柱前衍生HPLC分析方法�？疾炝酥鶞�、衍生試劑用量、反應時間及流動相pH值等因素對分析結(jié)果的影響。結(jié)果表明，柱溫對分離選擇性的影響很大，改變柱溫甚至可能影響到氨基酸DNFB衍生產(chǎn)物(DNP-AA)的出峰順序；衍生反應時間對OPA衍生氨基酸的定量分析影響顯著。 為彌補單一色譜填料分離選擇性的不足，通過對DNP-AA在6種不同C18填料上分離行為的考察，發(fā)展了“串聯(lián)”和“混裝”的色譜柱模式。采用C18-B與C18-SA串聯(lián)的操作模式，可以使DNP-AA的分離選擇性得到較大改善。而以C18-B和C18-SA填料混合裝填色譜柱進行DNP-AA的分離，所得峰形、柱效等更佳。 基于發(fā)展的新方法，測定了啤酒、冬蟲夏草等實際樣品中的氨基酸，并對樣品的預處理方法加以改進。結(jié)果表明，方法具有很好的普適性。
【關(guān)鍵詞】：氨基酸 柱前衍生化 鄰苯二甲醛 2 4-二硝基氟苯 新型HPLC柱
【學位授予單位】：南京理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：O657.72
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 緒論9-21
• 1.1 氨基酸9-12
• 1.1.1 氨基酸的定義9
• 1.1.2 氨基酸的分類9-11
• 1.1.2.1 基本氨基酸9-10
• 1.1.2.2 根據(jù)旋光性分類10-11
• 1.1.2.3 根據(jù)酸堿性分類11
• 1.1.2.4 從營養(yǎng)學角度分類11
• 1.1.3 氨基酸的應用11-12
• 1.1.3.1 臨床、醫(yī)學方面的應用11
• 1.1.3.2 農(nóng)業(yè)方面的應用11
• 1.1.3.3 食品方面的應用11
• 1.1.3.4 其它方面11-12
• 1.2 氨基酸HPLC分析12-19
• 1.2.1 氨基酸分析的發(fā)展12
• 1.2.2 氨基酸HPLC分析方法的分類12-13
• 1.2.2.1 直接分析法12
• 1.2.2.2 衍生化間接分析法12-13
• 1.2.3 氨基酸柱前衍生試劑13-19
• 1.2.3.1 柱前衍生試劑的一般要求13
• 1.2.3.2 主要柱前衍生試劑13-19
• 1.3 本論文的主要工作19-21
• 2 鄰苯二甲醛(OPA)衍生氨基酸HPLC方法發(fā)展21-38
• 2.1 實驗部分21-23
• 2.1.1 儀器21
• 2.1.2 試劑21
• 2.1.3 溶液的配制21-22
• 2.1.3.1 pH9.5硼酸緩沖溶液21-22
• 2.1.3.2 鄰苯二甲醛(OPA)衍生化溶液22
• 2.1.3.3 氨基酸標準溶液22
• 2.1.3.4 0.1mol／L磷酸二氫鉀溶液22
• 2.1.3.5 梯度洗脫溶液22
• 2.1.4 衍生方法22
• 2.1.5 色譜分析條件22-23
• 2.2 結(jié)果與討論23-36
• 2.2.1 19種氨基酸的典型分離譜圖23-25
• 2.2.2 分析系統(tǒng)重復性考察25-26
• 2.2.3 色譜柱溫度對分析的影響26-28
• 2.2.3.1 色譜柱溫度對保留時間的影響26-27
• 2.2.3.2 色譜柱溫度對分離度的影響27-28
• 2.2.4 流動相pH值對分析的影響28-30
• 2.2.4.1 不同pH值對保留時間的影響28-29
• 2.2.4.2 不同pH值對分離度的影響29-30
• 2.2.4.3 不同pH值對峰面積的影響30
• 2.2.5 衍生物比例對分析的影響30-32
• 2.2.6 衍生反應時間對定量分析的影響32-33
• 2.2.7 紫外檢測33-35
• 2.2.8 檢測池中氣泡對熒光檢測的影響35
• 2.2.9 色譜柱的選擇35-36
• 2.3 小結(jié)36-38
• 3 2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生氨基酸HPLC方法發(fā)展38-56
• 3.1 實驗部分38-40
• 3.1.1 儀器38
• 3.1.2 試劑38
• 3.1.3 溶液的配制38-39
• 3.1.3.1 2,4-二硝基氟苯衍生化溶液38
• 3.1.3.2 pH9.0硼酸緩沖溶液38-39
• 3.1.3.3 氨基酸標準品溶液39
• 3.1.3.4 pH7.0磷酸緩沖溶液39
• 3.1.3.5 梯度洗脫溶液39
• 3.1.4 衍生方法39
• 3.1.5 色譜分析條件39-40
• 3.2 結(jié)果與討論40-55
• 3.2.1 20種氨基酸的典型分離譜圖40-42
• 3.2.2 分析系統(tǒng)重復性考察42-43
• 3.2.3 衍生產(chǎn)物的穩(wěn)定性43-45
• 3.2.4 衍生物比例對定量分析的影響45-46
• 3.2.5 衍生試劑的穩(wěn)定性46-48
• 3.2.6 色譜柱溫度對分析的影響48-50
• 3.3.6.1 色譜柱溫度對各組分保留時間的影響48-49
• 3.2.6.2 色譜柱溫度對各組分間分離度的影響49-50
• 3.2.7 流動相pH值的影響50-51
• 3.2.7.1 流動相pH值對各組分保留時間的影響50
• 3.2.7.2 流動相pH值對各種氨基酸面積的影響50-51
• 3.2.8 檢測靈敏度、檢測限與線性范圍51-53
• 3.2.8.1 基線噪聲51-52
• 3.2.8.2 靈敏度52
• 3.2.8.3 檢測限52
• 3.2.8.4 線性范圍52-53
• 3.2.9 定量回歸曲線53-54
• 3.2.10 保護柱的影響54-55
• 3.3 小結(jié)55-56
• 4 新型HPLC柱的制備及氨基酸分析方法發(fā)展56-67
• 4.1 實驗部分56-57
• 4.1.1 儀器與試劑56
• 4.1.1.1 儀器56
• 4.1.1.2 試劑56
• 4.1.2 實驗方法56-57
• 4.1.2.1 氨基酸標準品的衍生化56
• 4.1.2.2 不同C18填料對氨基酸衍生產(chǎn)物選擇性的考察56-57
• 4.1.2.3 串聯(lián)色譜柱的連接及應用57
• 4.1.2.4 混裝色譜柱的裝填及應用57
• 4.2 結(jié)果與討論57-66
• 4.2.1 6種不同品牌C18填料對DNP-AA的選擇性57-61
• 4.2.2 串聯(lián)色譜柱氨基酸分析方法發(fā)展61-63
• 4.2.2.1 填料選擇依據(jù)61
• 4.2.2.2 串聯(lián)色譜柱61
• 4.2.2.3 串聯(lián)色譜柱分析氨基酸61-63
• 4.2.3 混裝色譜柱氨基酸分析方法發(fā)展63-66
• 4.2.3.1 混裝色譜柱63
• 4.2.3.2 混裝色譜柱應用于常規(guī)分析63-64
• 4.2.3.3 混裝色譜柱分析氨基酸64-66
• 4.3 小結(jié)66-67
• 5 應用67-75
• 5.1 游離氨基酸的測定67-70
• 5.1.1 啤酒中氨基酸的測定67-70
• 5.2 水解氨基酸的測定70-74
• 5.2.1 發(fā)酵蟲草菌粉中氨基酸的測定70-72
• 5.2.2 奶粉中氨基酸的測定72-74
• 5.3 小結(jié)74-75
• 6 結(jié)論75-76
• 致謝76-77
• 參考文獻77-85

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 田志偉;高揚;丁亞凌;龍嶺;張良;倪永碧;;RF-HPLC測定人免疫球蛋白中甘氨酸含量方法的建立[J];中國輸血雜志;2012年09期

2 沈祥森;闞建全;馮鑠涵;李帥;謝德芳;曾凡玉;;傳統(tǒng)毛霉型豆豉中苯甲酸形成機理的研究[J];食品科學;2013年01期

3 王敏;張敬書;趙艷麗;張兵;王云山;郭懷忠;蘇志國;;HPLC法測定玉米漿中游離氨基酸的含量[J];中國釀造;2010年05期

4 王冠蕾;謝輝;;賴氨酸高產(chǎn)短小芽孢桿菌誘變選育及關(guān)鍵酶基因的分析[J];中國調(diào)味品;2013年02期

5 耿濤華;李巧玲;邢健;王麗麗;;HPLC法測定丙酸菌發(fā)酵液中游離氨基酸的含量[J];中國食品添加劑;2013年02期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王震宇;芽孢桿菌高產(chǎn)賴氨酸突變株的選育及代謝途徑初步研究[D];哈爾濱工業(yè)大學;2010年

2 何君;葡萄酒中白藜蘆醇及其糖苷異構(gòu)體的HPLC方法發(fā)展[D];南京理工大學;2012年

3 沈祥森;傳統(tǒng)毛霉型豆豉中苯甲酸、丙酸形成機理的初步研究[D];西南大學;2012年

4 王敏;β-內(nèi)酰胺類抗生素發(fā)酵用玉米漿關(guān)鍵成分的分析[D];河北大學;2010年

5 于微;產(chǎn)蛋氨酸益生菌的篩選及應用研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2010年

6 駱超超;發(fā)酵谷物中產(chǎn)賴氨酸益生菌的篩選及其應用[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2010年

7 張婷;HPLC法測定轉(zhuǎn)化液中γ-氨基丁酸含量及轉(zhuǎn)化液的預處理研究[D];鄭州大學;2012年

8 彭立穎;賽拉嗪復合麻醉劑對山羊氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2012年

9 趙雅靜;微波衍生毛細管電泳法測定金銀花和奶粉中的氨基酸[D];吉林大學;2013年

10 趙亞麗;洱海表層沉積物可溶性有機氮特征及其生物有效性研究[D];中國環(huán)境科學研究院;2013年

  本文關(guān)鍵詞：氨基酸柱前衍生化HPLC方法發(fā)展及應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：286678