近年來,人們對研究藥物小分子與蛋白質大分子之間的相互作用越來越重視。本論文分別以頭孢吡肟、頭孢哌酮鈉、頭孢尼西鈉、硫酸頭孢匹羅四種藥物和木瓜蛋白酶為研究主體,利用熒光光譜法和同步熒光光譜法對藥物-木瓜蛋白酶體系進行了研究。研究內容共分以下幾部分:第一章:綜述了木瓜蛋白酶的性質和用途,并對熒光光譜法和同步熒光光譜法結合藥物-蛋白質體系進行了闡述與說明。第二章:采用熒光猝滅法和同步熒光法研究了頭孢吡肟(CEF)與木瓜蛋白酶(PAPA)在不同溫度下的相互作用。結果表明,CEF能夠有效猝滅PAPA的內源熒光,該猝滅過程為靜態(tài)猝滅過程。靜電相互作用力是CEF與PAPA間結合的主要作用力,結合常數在10~4數量級,其結合比為1:1且該結合表現為零協(xié)同作用。兩種方法所得結論一致。同步熒光法研究表明PAPA的色氨酸(Trp)殘基和酪氨酸(Tyr)殘基都參與了CEF與PAPA的結合反應,由激發(fā)波長280 nm數據得到了該結合反應的結合率及結合模型。同時在318 K下,體系熒光強度與CEF濃度在6.0×10~(-6)~7.0×10~-55 mol/L范圍內呈現良好的線性關系,檢出限為3.78×10~-66 mol/L(n=10)。表明利用CEF對PAPA的熒光猝滅反應,可以實現對實際藥品中CEF含量的快速測定。第三章:以PAPA為檢測對象,采用熒光光譜法和同步熒光光譜法分別研究了三個溫度下頭孢哌酮鈉(CFZ)與PAPA間的結合行為。結果表明:CFZ對PAPA的熒光及CFZ對PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光都是以靜態(tài)猝滅的方式猝滅;同時得到了它們之間的結合常數(K_a)、結合位點(n)、熱力學參數、結合力類型、Hill系數等參數。同步熒光光譜還表明,CFZ與PAPA的結合能夠改變PAPA的構象,同時PAPA的Trp和Tyr殘基均參與了該結合反應,通過計算得到了PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光猝滅比率份數。此外,由激發(fā)波長295 nm數據求得了該結合反應的結合率及結合模型。在293 K時體系熒光強度與CFZ濃度在4.0×10~(-6)~1.0×10~-44 mol/L范圍內有良好的線性關系,方法的檢出限為2.43×10~-66 mol/L(n=10)。表明可以利用該反應實現實際藥品中CFZ含量的快速測定。第四章:利用熒光光譜法和同步熒光光譜法研究頭孢尼西鈉(CFS)與PAPA的相互作用。結果表明:CFS使PAPA的熒光發(fā)生猝滅,其猝滅機制為靜態(tài)猝滅;CFS與PAPA的結合位點為1,該結合具有零協(xié)同作用,CFS與PAPA之間為靜電引力作用等,熒光猝滅法和同步熒光法得的結論相同。同步熒光光譜研究表明,CFS與PAPA的結合能夠改變PAPA的構象,同時PAPA的Trp和Tyr殘基均參與了該結合反應,通過計算得到了PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光猝滅比率份數和該結合反應的結合率及結合模型。同時在293 K時體系熒光強度與CFS濃度在6.0×10~(-6)~1.0×10~-44 mol/L范圍內有良好的線性關系,方法的檢出限為3.05×10~-66 mol/L(n=10)。表明利用該反應能夠實現對實際藥品中CFS含量的快速測定。第五章:以PAPA為檢測對象,通過熒光猝滅光譜和同步熒光光譜研究硫酸頭孢匹羅(CPS)與PAPA的相互作用。計算得到了不同溫度下CPS與PAPA及CPS與PAPA的Trp和Tyr殘基的結合常數、結合位點數、猝滅類型、作用力及協(xié)同性等參數,兩種方法所得結論相同。同時同步熒光光譜表明,CPS與PAPA的結合將改變PAPA的構象,PAPA的Trp和Tyr殘基均參與了該結合反應,求得了PAPA的Trp和Tyr殘基的熒光猝滅比率份數及該反應的結合率及結合模型。該研究對于臨床用藥具有一定的指導意義。
【學位單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：O657.3;TQ460.1
【部分圖文】：

簡稱 CEF)分子結構式見圖 2-1，是第四代頭菌和革蘭陰性菌，包括金銅綠假單胞菌、綠膿桿菌等。疾病，如酒精性肺炎，發(fā)熱性中性粒細胞減少癥，皮究 CEF 與 PAPA 的相互作用尚未進行。由于 PAPA 在CEF 與 PAPA 之間的相互作用是值得進行的。它將深，為更好地理解藥物與 PAPA 結合的機理提供必要的光光譜可以研究不同溫度條件下藥物與蛋白之間的相數、結合位點的數量、結合力的性質以及藥物-蛋白質[39]。藥物與蛋白結合率、結合模型、Trp 及 Tyr 殘基的了解藥物的藥效學和藥代動力學行為以及設計具有有的意義。

圖 2-2 CEF-PAPA 的熒光發(fā)射光譜 (T=293 K, λex=280 nm). 2-2 Fluorescence emission spectra of CEF-PAPA(T=293 K, λex=280-6mol/L, 1~12: CCEF= (0, 0.4, 0.6, 2.0, 3.0, 4.0, 6.0, 7.0, 8.0, 10, 14, Stern-Volmer 方程[42](2-2)處理：1[]1[]1[]00IIKLKLKLqsvD (2-2)別表示不存在和存在猝滅劑(CEF)時的穩(wěn)態(tài)熒光強度，tern-Volmer 靜態(tài)猝滅常數，KD是動態(tài)猝滅常數，τ0為不命[43](約為 10-8s)，[L]是猝滅劑的濃度。利用公式(2-2)，回歸來確定 Ksv，計算出的 Ksv和 Kq值列于表 2-1 中。由Kq值均遠大于最大散射碰撞猝滅常數(2.0×1010L·mol-1·s-1光猝滅是一個靜態(tài)猝滅過程；另外，表 2-1 數據顯示 K，進一步表明 CEF-PAPA 結合反應的猝滅機理是生成了

河北大學理學碩士學位論文加入不同濃度的CEF，PAPA的Tyr和Trp殘基的同步熒光光譜如圖2-3所示。從圖中可以得出，CEF的添加導致PAPA的Tyr和Trp殘基的熒光強度有規(guī)律地降低，不同的是，Δλ=15 nm的峰位發(fā)生了明顯的紅移現象，Δλ=60 nm沒有發(fā)生紅移現象。表明Tyr殘基附近的極性增加，疏水性減小，最終使得肽鏈變松散，改變了PAPA的構象。
【參考文獻】

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本文編號：2844169