【摘要】：喹乙醇和卡巴氧是喹VA琳藥物的重要成員,可以抗菌和提高瘦肉率,常用于水產(chǎn)品和豬等飼料添加劑,在動物體內(nèi)對應(yīng)代謝產(chǎn)物為3-甲基-喹VA啉-2-羧酸(3-methylquinoxaline-2-carboxylic acid,MQCA)和喹VA啉-2-羧酸(quinoxaline-2-carboxylic acid,QCA)。MQCA和QCA具有致癌、致畸和致突變,同時對人體長壽細胞具有毒害作用,對食品安全造成威脅,需要建立靈敏和有效的檢測方法監(jiān)控食品中MQCA和QCA含量。本研究旨在建立靈敏和快速的同時檢測MQCA和QCA的化學發(fā)光競爭間接酶聯(lián)免疫方法(chemiluminescent competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay,CL-ciELISA)和背景熒光定量膠體金免疫層析方法(background fluorescence quenching immunochromatographic assay,bFQICA),同時利用免疫磁珠對樣本中待測藥物進行提取和富集,為動物組織中MQCA和QCA的殘留檢測提供技術(shù)支持。本研究化學合成半抗原MQCA-NH_2,與載體蛋白BSA(bovine serum albumin,BSA)和KLH(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶聯(lián)制備免疫原MQCA-NH_2-BSA和MQCA-NH_2-KLH,與載體蛋白OVA(ovalbumin,OVA)偶聯(lián)制備包被原MQCA-NH_2-OVA。通過單克隆抗體制備技術(shù)制備MQCA抗體,經(jīng)蛋白A親和層析柱純化后抗體的濃度為4 mg/mL,經(jīng)測定抗體的IC_(50)(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))為0.20μg/L,與QCA交叉反應(yīng)率為40%。建立基于免疫磁珠提取和富集同時檢測動物組織中MQCA和QCA的CL-ciELISA檢測方法,MQCA標準曲線IC_(50)為0.020μg/L,線性范圍為0.008-1.00μg/L,與QCA藥物的交叉反應(yīng)率為40%。1 mg鏈霉親和素磁珠和30μg生物素化MQCA抗體偶聯(lián)制備免疫磁珠;魚肉、蝦肉、雞肉和豬肉(2 g)均質(zhì)后加入2 mLPBS提取,取800μL樣本提取液加入0.3 mg免疫磁珠室溫下孵育10 min,磁場作用下與樣本基質(zhì)分離;85℃加熱洗脫5 min,洗脫液為100μLPBS;樣本處理耗時30 min,MQCA和QCA藥物濃縮4倍。魚肉、蝦肉、豬肉和雞肉樣本中MQCA的檢測限分別為0.050、0.043、0.048、0.053μg/kg,QCA的檢測限分別為0.090、0.100、0.130、0.180μg/kg。以0.5-2.0μg/kg(MQCA)和1.25-5.0μg/kg(QCA)的濃度添加樣本,回收為77.0-117.0%,變異系數(shù)為4.5-11.5%,40份實際樣本檢測值與LC-MS/MS檢測結(jié)果吻合度較高,表明基于免疫磁珠提取和富集的CL-ciELISA能同時檢測動物組織中MQCA和QCA。建立基于免疫磁珠提取和富集同時檢測動物組織中MQCA和QCA的bFQICA,MQCA標準曲線的IC_(50)為0.34μg/L,與QCA交叉反應(yīng)率為40%。魚肉、蝦肉、豬肉和雞肉中MQCA的檢測限分別為0.35、0.40、0.45、0.40μg/kg,QCA的檢測限為0.85、1.10、1.20、1.00μg/kg。以0.50、1.00、2.00μg/kg三個梯度添加MQCA和以1.25、2.50、5.00μg/kg三個梯度添加QCA,回收率為72.0%-118.0%,變異系數(shù)為5.2%-11.5%。40份實際樣本的檢測值與LC-MS/MS的相關(guān)性較好。bFQICA相比傳統(tǒng)膠體金,可以進行靈敏的定量檢測;與傳統(tǒng)ELISA定量方法比較,bFQICA可進行現(xiàn)場檢測。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：O657.3;TS207.5
【圖文】：

圖 1-2 MQCA 和 QCA 的化學結(jié)構(gòu)式Figure 1-2 Chemical structures of MQCA and QCA我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定：2018 年起，禁止喹乙醇用于食品動物[11]。世界衛(wèi)生組織和世界糧農(nóng)織規(guī)定豬肝和豬肌肉組織中 MQCA 的最高殘留限量為 20 和 4 μg/kg[21]，豬肝和豬肌肉組織QCA 的最高殘留限量為 30 和 5 μg/kg[22]。喹乙醇和卡巴氧代謝物殘留檢測方法喹乙醇和卡巴氧代謝物殘留儀器檢測方法在獸藥殘留檢測領(lǐng)域，已經(jīng)有較多的方法檢測在動物組織中 MQCA 和 QCA 的殘留，器檢測方法是公認的最可靠地的檢測方法，具有靈敏度高、特異性好、精確度高和假陽性低等特點，包括液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，表 1-1 匯總了部喹VA琳類藥物代謝殘留的儀器檢測方法。.2.4.2.4.1

免疫原和包被抗原的合成路線圖

【參考文獻】

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1 徐艷清;施遠國;羅燕;譚磊;;喹乙醇代謝殘留標識物3-甲基喹惡啉-2-羧酸檢測方法的優(yōu)化[J];國外畜牧學(豬與禽);2015年08期

2 肖勤;林金明;;化學發(fā)光免疫分析方法的應(yīng)用研究進展[J];分析化學;2015年06期

3 戴盡波;徐振林;劉鳳銀;楊金易;孫遠明;王弘;雷紅濤;沈玉棟;;化學發(fā)光酶免疫分析測定魚肉中呋喃它酮代謝物方法研究[J];分析化學;2015年06期

4 李燕;王小寒;馬躍崗;周洪滿;;HPLC測定水產(chǎn)品中喹乙醇代謝物殘留量的方法探討[J];南方農(nóng)業(yè);2014年34期

5 樊淑華;王永立;;膠體金免疫層析技術(shù)應(yīng)用研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2014年10期

6 黃艷梅;劉道峰;賴衛(wèi)華;熊勇華;楊萬春;劉坤;王樹穎;;集成免疫磁珠富集和免疫層析的黃曲霉毒素M_1快速檢測法[J];分析化學;2014年05期

7 孫興權(quán);董振霖;李一塵;代弟;蘇明明;曹際娟;;動物源食品中獸藥殘留高通量快速分析檢測技術(shù)[J];農(nóng)業(yè)工程學報;2014年08期

8 霍如林;朱愛榮;張林;高峰;周光宏;;膠體金免疫層析法快速定量檢測豬肝中喹乙醇殘留[J];食品工業(yè)科技;2014年09期

9 謝芳;賴衛(wèi)華;史愛武;鄧省亮;熊勇華;余揚帆;;免疫磁珠富集結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附法檢測醬油中黃曲霉毒素B_1[J];食品科學;2013年18期

10 姜金慶;楊雪峰;王自良;鄧瑞廣;王選年;張改平;;克倫特羅和萊克多巴胺多殘留膠體金免疫層析試紙條的研制[J];畜牧獸醫(yī)學報;2013年01期

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1 陳立本;金涌;韓博;;抗生素人工抗原偶聯(lián)比測定的新方法：MALDI-TOF MS[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2008年學術(shù)年會暨第六屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術(shù)研討會論文集[C];2008年

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1 張西亞;玉米中四種真菌毒素的免疫分析檢測技術(shù)研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2017年

2 陶曉奇;動物性食品中酰胺醇類殘留化學發(fā)光檢測技術(shù)研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2014年

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1 孫雪珂;孔雀石綠膠體金免疫層析試紙條研制及在水產(chǎn)品中的應(yīng)用[D];集美大學;2015年

2 徐金亭;免疫磁珠的制備及其富集、分離單增李斯特菌的研究[D];暨南大學;2011年

3 黃曉明;萊克多巴胺膠體金試紙條生產(chǎn)工藝研究[D];暨南大學;2011年

本文編號：2740359