【摘要】：傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)存在靈敏度相對較低、操作復(fù)雜費(fèi)時、不能多目標(biāo)物同時檢測等缺點(diǎn),是其在臨床診斷生物標(biāo)志物檢測的應(yīng)用方面所面臨的一些挑戰(zhàn)。近幾年來,以毛細(xì)管為載體開發(fā)的免疫傳感器技術(shù),在臨床診斷、生物醫(yī)療等分析領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用,顯示了其操作簡便、試劑消耗量低、快速靈敏檢測等優(yōu)點(diǎn),如何進(jìn)一步提高毛細(xì)管免疫傳感器的檢測靈敏度一直是這一領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究內(nèi)容。多孔層開管柱(Porous layer open tubular,PLOT)具有三維均勻多孔結(jié)構(gòu),其大比表面積可以提高目標(biāo)分子的固載量,同時降低了傳質(zhì)距離,縮短了分析時間。本論文主要圍繞PLOT毛細(xì)管免疫傳感器展開以下研究工作:1.首次發(fā)展了PLOT毛細(xì)管-多目標(biāo)分析檢測的新型熒光型免疫傳感器,并成功應(yīng)用于人血清多目標(biāo)腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白(AFP)和癌胚蛋白(CEA)的同時測定�；谠灰徊椒▋上喾磻�(yīng),成功制備了三維均勻多孔結(jié)構(gòu)PLOT毛細(xì)管,實(shí)驗(yàn)分別將兩種包被抗體通過戊二醛化學(xué)鍵橋連鍵合在PLOT毛細(xì)管內(nèi)表面,兩個毛細(xì)管傳感探針通過連接接口串聯(lián),結(jié)合雙抗體夾心法和激光誘導(dǎo)熒光(LIF)檢測,實(shí)現(xiàn)了兩種腫瘤標(biāo)志物的同時在線檢測。由于多孔層結(jié)構(gòu)具有較大的比表面積,可以增大結(jié)合抗體量,識別更多的目標(biāo)分子,從而使靈敏度大大提高。與傳統(tǒng)的ELISA法相比,該傳感器的靈敏度提高了50和70倍,分析時間縮短為1h內(nèi)。此外,我們也分別研究了AFP和CEA的批內(nèi)檢測系數(shù)和批間檢測系數(shù)均小于6.0%,說明實(shí)驗(yàn)具有良好的重現(xiàn)性。實(shí)驗(yàn)分別測定了單一樣品的回收率分別在84.6%-113.4%和85.7%-110.8%之間。將該傳感器用于人血清樣品中AFP和CEA的含量測定,所得的結(jié)果和臨床檢測結(jié)果進(jìn)行對比,相關(guān)系數(shù)均為0.9,說明具有良好的一致性。基于多孔層開管毛細(xì)管開發(fā)的免疫傳感器,在臨床標(biāo)志物的檢測、疾病診斷的應(yīng)用和生化分析中具有良好的應(yīng)用前景。2.建立了基于PLOT毛細(xì)管的新型化學(xué)發(fā)光型降鈣素原(PCT)免疫傳感器。實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心法將包被抗體、目標(biāo)分析物、酶標(biāo)記的檢測抗體化學(xué)共價結(jié)合在多孔層開管毛細(xì)管內(nèi)表面,通過辣根過氧化物酶(HRP)和底物魯米諾(Luminol)、過氧化氫(H_2O_2)即時反應(yīng)輻射的化學(xué)發(fā)光,對分析物進(jìn)行實(shí)時在線定量檢測,并成功應(yīng)用于臨床上人血清實(shí)際樣品中降鈣素原含量的測定。方法操作簡便,實(shí)時在線檢測,特異性結(jié)合強(qiáng),分析靈敏度高。在最優(yōu)條件下,PLOT毛細(xì)管免疫傳感器的多孔層結(jié)構(gòu)修飾,使其靈敏度增強(qiáng)了約6.7倍。該免疫傳感器有望進(jìn)一步應(yīng)用于其他臨床生物標(biāo)記物的檢測,對疾病診斷具有良好的應(yīng)用前景。
【圖文】：

illustration the detection of CRP using IFN-based test s米球測試帶檢測 CRP 示意圖[79]。i 等人開發(fā)一種基于羧酸鹽多壁碳納米管(CMWC納米結(jié)構(gòu)免疫傳感器檢測心肌肌鈣蛋白 I(cTnI)[81]（體和過氧化氫 H2O2反應(yīng)產(chǎn)生的電流響應(yīng)信號由循感器對于健康人群臨床診斷 cTnI 顯示出良好的重用前景。

1-6 Basic concept of capillary-based ELISA(B) as compared with microplate at(A)[88].-6 基于毛細(xì)管和微孔板的 ELISA 概況圖[88]。Yuan-Cheng Cao 也使用毛細(xì)管作為固定化試劑的載體進(jìn)行多組分目標(biāo)物的免。如圖 1-7，實(shí)驗(yàn)將三種 IgG 作為探針，編碼并固定化在毛細(xì)管不同的位置上合相對應(yīng)的抗原目標(biāo)物，以 HRP 標(biāo)記的 IgG 作為檢測抗體，，形成抗體-抗原夾復(fù)合物，最后實(shí)時在線虹吸底物進(jìn)入毛細(xì)管，進(jìn)行顯色反應(yīng)，用商業(yè)化的 C進(jìn)行輸出信號。
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：O657.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2648626