【摘要】：傳統(tǒng)的酶聯免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)存在靈敏度相對較低、操作復雜費時、不能多目標物同時檢測等缺點,是其在臨床診斷生物標志物檢測的應用方面所面臨的一些挑戰(zhàn)。近幾年來,以毛細管為載體開發(fā)的免疫傳感器技術,在臨床診斷、生物醫(yī)療等分析領域得到了廣泛的應用,顯示了其操作簡便、試劑消耗量低、快速靈敏檢測等優(yōu)點,如何進一步提高毛細管免疫傳感器的檢測靈敏度一直是這一領域的熱點研究內容。多孔層開管柱(Porous layer open tubular,PLOT)具有三維均勻多孔結構,其大比表面積可以提高目標分子的固載量,同時降低了傳質距離,縮短了分析時間。本論文主要圍繞PLOT毛細管免疫傳感器展開以下研究工作:1.首次發(fā)展了PLOT毛細管-多目標分析檢測的新型熒光型免疫傳感器,并成功應用于人血清多目標腫瘤標志物甲胎蛋白(AFP)和癌胚蛋白(CEA)的同時測定�；谠灰徊椒▋上喾磻�,成功制備了三維均勻多孔結構PLOT毛細管,實驗分別將兩種包被抗體通過戊二醛化學鍵橋連鍵合在PLOT毛細管內表面,兩個毛細管傳感探針通過連接接口串聯,結合雙抗體夾心法和激光誘導熒光(LIF)檢測,實現了兩種腫瘤標志物的同時在線檢測。由于多孔層結構具有較大的比表面積,可以增大結合抗體量,識別更多的目標分子,從而使靈敏度大大提高。與傳統(tǒng)的ELISA法相比,該傳感器的靈敏度提高了50和70倍,分析時間縮短為1h內。此外,我們也分別研究了AFP和CEA的批內檢測系數和批間檢測系數均小于6.0%,說明實驗具有良好的重現性。實驗分別測定了單一樣品的回收率分別在84.6%-113.4%和85.7%-110.8%之間。將該傳感器用于人血清樣品中AFP和CEA的含量測定,所得的結果和臨床檢測結果進行對比,相關系數均為0.9,說明具有良好的一致性�；诙嗫讓娱_管毛細管開發(fā)的免疫傳感器,在臨床標志物的檢測、疾病診斷的應用和生化分析中具有良好的應用前景。2.建立了基于PLOT毛細管的新型化學發(fā)光型降鈣素原(PCT)免疫傳感器。實驗采用雙抗體夾心法將包被抗體、目標分析物、酶標記的檢測抗體化學共價結合在多孔層開管毛細管內表面,通過辣根過氧化物酶(HRP)和底物魯米諾(Luminol)、過氧化氫(H_2O_2)即時反應輻射的化學發(fā)光,對分析物進行實時在線定量檢測,并成功應用于臨床上人血清實際樣品中降鈣素原含量的測定。方法操作簡便,實時在線檢測,特異性結合強,分析靈敏度高。在最優(yōu)條件下,PLOT毛細管免疫傳感器的多孔層結構修飾,使其靈敏度增強了約6.7倍。該免疫傳感器有望進一步應用于其他臨床生物標記物的檢測,對疾病診斷具有良好的應用前景。
【圖文】：

illustration the detection of CRP using IFN-based test s米球測試帶檢測 CRP 示意圖[79]。i 等人開發(fā)一種基于羧酸鹽多壁碳納米管(CMWC納米結構免疫傳感器檢測心肌肌鈣蛋白 I(cTnI)[81]（體和過氧化氫 H2O2反應產生的電流響應信號由循感器對于健康人群臨床診斷 cTnI 顯示出良好的重用前景。

1-6 Basic concept of capillary-based ELISA(B) as compared with microplate at(A)[88].-6 基于毛細管和微孔板的 ELISA 概況圖[88]。Yuan-Cheng Cao 也使用毛細管作為固定化試劑的載體進行多組分目標物的免。如圖 1-7，實驗將三種 IgG 作為探針，編碼并固定化在毛細管不同的位置上合相對應的抗原目標物，以 HRP 標記的 IgG 作為檢測抗體，，形成抗體-抗原夾復合物，最后實時在線虹吸底物進入毛細管，進行顯色反應，用商業(yè)化的 C進行輸出信號。
【學位授予單位】：東北師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：O657.3

【參考文獻】

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本文編號：2648626