【摘要】：層析分離在生物工程下游技術(shù)中占有重要地位,如何提高層析分離的有效性和經(jīng)濟(jì)性是本領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。理論上講,依據(jù)蛋白分子表面電荷、分子大小及親疏水性的不同,色譜方法的正交組合可以為蛋白質(zhì)分離提供通用的技術(shù)平臺。然而近些年來,疏水色譜并沒有在蛋白質(zhì)分離過程中承擔(dān)重要角色,這主要是由于經(jīng)典疏水色譜高鹽上樣、低鹽洗脫的模式會帶來一系列問題。本論文針對疏水色譜的高鹽問題,發(fā)展了一種pH調(diào)控的疏水色譜方法。該方法通過提高配基的疏水性及偶聯(lián)密度,可實(shí)現(xiàn)非鹽依賴的蛋白質(zhì)吸附和洗脫。本論文的研究內(nèi)容包括以下幾個方面:pH調(diào)控的疏水色譜方法:為增加疏水層析介質(zhì)的吸附選擇性,由提高配基的疏水性出發(fā),以1-萘乙酸作為新型疏水配基合成吸附劑,考察了溶液條件和材料性質(zhì)對溶菌酶吸附的影響,經(jīng)過密度優(yōu)化,可實(shí)現(xiàn)低鹽條件下的pH依賴型吸附,中等密度吸附介質(zhì)在pH 10條件下對溶菌酶吸附量可達(dá)28.5 mg/mL,而p H 5.0條件下吸附量僅為0.8mg/mL;通過瓊脂糖凝膠電泳(SDS-PAGE)分析,1-萘乙酸功能化吸附介質(zhì)對復(fù)雜樣品中溶菌酶具有較好的分離效果,經(jīng)pH 5.0的磷酸緩沖液(0.01 mol/L)洗脫,溶菌酶純度可高達(dá)90%以上,回收率可達(dá)80%左右。pH調(diào)控的疏水色譜方法應(yīng)用擴(kuò)展:進(jìn)一步探究了1-萘乙酸功能化吸附劑吸附抗體時溶液條件和材料性質(zhì)的影響,同樣可實(shí)現(xiàn)低鹽條件下的p H依賴型吸附,中等密度吸附介質(zhì)在中性條件下對人抗體的吸附量可達(dá)34.3 mg/mL。1-萘乙酸功能化吸附介質(zhì)對復(fù)雜體系中抗體也具有較好的分離效果,p H優(yōu)化結(jié)果顯示,牛免疫球蛋白G(bIgG)的最佳上樣pH為7.0,洗脫pH為3.5;上樣量優(yōu)化結(jié)果顯示,bIgG的最佳上樣量為膠血比1:1上樣;一步純化后抗體純度可達(dá)90%以上,回收率達(dá)70%以上;該吸附介質(zhì)經(jīng)酸堿浸泡后仍能保持穩(wěn)定性;五次使用過后抗體吸附量仍可達(dá)30 mg/m L。本論文的研究結(jié)果表明,基于1-萘乙酸功能化疏水層析介質(zhì)的p H調(diào)控的疏水色譜模式能夠?qū)崿F(xiàn)蛋清溶菌酶及牛血清抗體的高效分離,為疏水層析配基的設(shè)計篩選與疏水色譜的應(yīng)用提供了新的方向。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：O652.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2600800