本文選題：銅納米簇 + ATP　； 參考：《鄭州大學》2017年碩士論文

【摘要】：金屬納米簇由于其獨特的性能如生物相容性、低毒性、發(fā)射波長可調(diào)、光穩(wěn)定性以及高量子產(chǎn)率等,越來越多的受到科研工作者的青睞。目前,金屬納米簇主要以牛血清蛋白蛋白、還原性物質(zhì)、樹枝狀大分子、微生物細胞等為模板來合成,而寡核苷酸鏈由于其特有的分子識別、自組裝性能以及優(yōu)良的納米尺寸效應等特點,也是一種優(yōu)良的金屬納米簇的模板。以寡核苷酸鏈為模板的銅納米簇由于其制備方法簡單、成本低、生物相容性好、綠色環(huán)保等優(yōu)點,而受到人們的廣泛關(guān)注,但其應用仍然處在初級階段,因此銅納米簇還有很大的發(fā)展空間和廣闊的應用前景。本論文主要以DNA為模板合成的銅納米簇為出發(fā)點,開展了一系列的研究工作。主要研究思路如下:首先,基于三磷酸腺苷(ATP)與其適配體特異性識別的作用,結(jié)合富T堿基為模板的熒光銅納米簇的聚集熒光增強效應,我們設(shè)計了一種免標高靈敏檢測ATP的新方法。本方法中,我們用富T堿基序列將兩段被裂分開的ATP適配體進行延伸,當有ATP存在的情況下,ATP與其適配體結(jié)合形成適配體1-ATP-適配體2的復合物,從而將兩段可以作為銅納米簇模板的富T堿基序列拉近,而富T堿基序列能作為模板合成銅納米簇,同時產(chǎn)生明顯的熒光增強效應,且體系的熒光強度隨著ATP濃度的增加而增強�；诖�,本文建立了一種操作簡單、選擇性高、成本低的高靈敏檢測ATP的方法,線性范圍為100 nM-100μM,檢測限為10.29 nM。在此基礎(chǔ)上,進一步實現(xiàn)了復雜生物體系中ATP的檢測,為ATP在分子生物學和生物醫(yī)學診斷中提供了一種新型的檢測方法。其次,基于以發(fā)夾狀富T堿基為模板的銅納米簇,我們發(fā)展了一種“turn-off”型免標檢測T4多聚核苷酸激酶的新方法。少于15個T堿基的DNA序列不能被用作銅納米簇合成的模板,除非其位于發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)的環(huán)狀區(qū)域。T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)將DNA的5?端磷酸化,基于此,結(jié)合λ核酸外切酶對5?端為磷酸基團的雙鏈DNA的識別及消解作用,我們提出了一種簡單快速的檢測T4PNK的新方法。在沒有T4 PNK存在的情況下,λ核酸外切酶不能消解5?端為羥基的發(fā)夾狀探針,因此能夠形成熒光銅納米簇。當有T4 PNK存在的情況下,發(fā)夾狀探針的5?端羥基被磷酸化,并被λ核酸外切酶識別消解,發(fā)夾狀的DNA探針被打開形成直鏈狀的DNA,因此不能有效的合成銅納米簇,體系的熒光信號大大降低。基于此,本文建立了一種簡單易行,綠色環(huán)保,成本低廉的檢測T4 PNK的方法,線性范圍是0.1-20 U/mL,檢測限為0.1 U/mL。與文獻報道的方法具有一定的可比性,在生物醫(yī)學領(lǐng)域和臨床診斷領(lǐng)域有很大的應用前景。最后,基于雙鏈DNA模板化的銅納米簇為檢測信號,我們設(shè)計了一個“turn-on”型的檢測T4多聚核苷酸激酶和其抑制劑的新方法。該方法中,我們設(shè)計了一個5?端突出,3?端凹陷并被磷酸化的發(fā)夾狀探針,一旦發(fā)夾狀探針3?端的磷酸基團被T4多聚核苷酸激酶(T4 PNKP)水解為羥基,就能夠在Klenow Fragment(KF)聚合酶的聚合作用下,延伸生成雙鏈DNA,并作為銅納米簇的模板合成熒光銅納米簇�；诖�,本文實現(xiàn)了對T4 PNKP活性的檢測,線性范圍為0.1-25 U/mL,檢測限為0.067 U/m L,并且對T4 PNKP抑制劑的檢測也取得了較好的實驗結(jié)果。該方法簡單、免標、易行,在T4 PNKP的測定及其相關(guān)領(lǐng)域中具有很大的應用前景。
[Abstract]:In this paper , we have developed a new method for detecting ATP by using DNA as template . This paper presents a new method for detecting T4 PNK in the presence of T4 PNK .

【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：O657.3

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本文編號：1793181