本文關(guān)鍵詞：基于銅納米粒子的生物分析新方法研究

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【摘要】：納米材料因?yàn)槠洫?dú)特性質(zhì)引起了廣泛的關(guān)注。銅納米粒子因?yàn)槠涮厥庑再|(zhì)多應(yīng)用于傳感器、催化等方面。近年來,銅納米粒子在生物分析領(lǐng)域的應(yīng)用發(fā)展迅速。免疫分析和DNA檢測在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都有著十分重要的意義。原子吸收光譜(AAS)和電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)在元素分析方面有著廣泛的應(yīng)用,它們可直接檢測納米探針中的金屬元素,無需探針的光、電等特殊性質(zhì),這樣就降低了探針的合成難度。此外,它們具有高靈敏度的特點(diǎn),被越來越多的應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域。在第1章中,簡述了納米粒子的基本性質(zhì)及制備方法,介紹了納米氧化銅的應(yīng)用及研究現(xiàn)狀,并對原子吸收光譜和免疫分析以及電感耦合等離子體質(zhì)譜和無標(biāo)記DNA分析的研究進(jìn)展進(jìn)行了介紹。在第2章中,本文建立了一種新型的免疫分析方法。根據(jù)標(biāo)記物及檢測方法的不同,標(biāo)記免疫分析技術(shù)可以分為放射免疫分析、熒光免疫分析、酶免疫分析、金屬免疫分析、發(fā)光免疫分析、電化學(xué)免疫分析等。在納米氧化銅和抗體通過靜電結(jié)合后,我們就研究了基于原子吸收光譜檢測的金屬納米粒子標(biāo)記的免疫分析方法。首先,我們考察了醇熱法制備納米氧化銅膠體,制備出了能穩(wěn)定保存的納米氧化銅膠體。然后,使納米氧化銅和羊抗人IgG結(jié)合成銅標(biāo)結(jié)合物,在96孔多孔板上進(jìn)行了三明治夾心免疫反應(yīng)檢測人IgG。經(jīng)稀硝酸溶解銅之后進(jìn)行檢測,原子吸收光譜信號與人IgG濃度呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系。我們優(yōu)化了封閉液(BSA)濃度以及銅標(biāo)結(jié)合物稀釋倍數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明原子吸收光譜信號與人IgG濃度的對數(shù)在10-9-10-5 g/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢出限為0.19 ng/mL。在第3章中,本文建立了一種新型的無標(biāo)記DNA檢測方法。DNA檢測方法通常分為標(biāo)記法和無標(biāo)記法,無標(biāo)記法由于不需要復(fù)雜的操作步驟而在近年來發(fā)展迅速。研究表明,銅離子能在雙鏈DNA存在的情況下被還原劑還原為銅納米粒子,單鏈DNA和三鏈DNA都沒有這種現(xiàn)象。DNA常用的放大技術(shù)有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、鏈替代擴(kuò)增反應(yīng)以及滾環(huán)放大反應(yīng)等,這些反應(yīng)所用到的酶的活性很容易受到多種因素的影響。因此,無酶催化的雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(HCR)有很大的優(yōu)勢。本實(shí)驗(yàn)建立了一種基于電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測的無標(biāo)記、無酶催化的DNA檢測方法。具體實(shí)驗(yàn)步驟是,在磁珠上結(jié)合捕獲DNA,然后與目標(biāo)DNA結(jié)合,之后進(jìn)行雜交鏈?zhǔn)椒糯?形成的雙鏈DNA能促使銅納米粒子的生成。最后,加稀硝酸溶解銅,在ICP-MS上進(jìn)行檢測。銅的信號強(qiáng)度與所加目標(biāo)DNA的濃度成正比例關(guān)系。實(shí)驗(yàn)對銅離子濃度、還原劑濃度、HCR反應(yīng)時(shí)間以及發(fā)卡探針的濃度進(jìn)行了優(yōu)化。ICP-MS信號強(qiáng)度與目標(biāo)DNA的濃度在1 nM-100 nM范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為0.803 nM。
【關(guān)鍵詞】：銅納米粒子 免疫分析 原子吸收光譜 無標(biāo)記DNA檢測 電感耦合等離子體質(zhì)譜
【學(xué)位授予單位】：成都理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3;TB383.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 引言10-29
• 1.1 納米粒子綜述10-14
• 1.1.1 納米粒子簡介10
• 1.1.2 納米粒子的性質(zhì)10-12
• 1.1.3 納米材料的制備方法12-14
• 1.2 納米氧化銅的性質(zhì)及應(yīng)用14-16
• 1.2.1 納米氧化銅的性質(zhì)14
• 1.2.2 納米氧化銅的應(yīng)用14-16
• 1.3 原子吸收光譜及免疫反應(yīng)簡介16-23
• 1.3.1 原子吸收光譜概述16-17
• 1.3.2 石墨爐原子吸收分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)17-19
• 1.3.3 免疫反應(yīng)簡介19-23
• 1.4 電感耦合等離子體質(zhì)譜及無標(biāo)記DNA測定方法簡介23-29
• 1.4.1 ICP-MS概述23
• 1.4.2 ICP-MS基本結(jié)構(gòu)23-25
• 1.4.3 無標(biāo)記DNA測定方法25-29
• 第2章 基于銅納米粒子標(biāo)記的原子吸收光譜免疫分析方法29-41
• 2.1 引言29-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分30-32
• 2.2.1 儀器與試劑30
• 2.2.2 納米氧化銅的制備30
• 2.2.3 納米氧化銅抗體結(jié)合物的制備30-31
• 2.2.4 免疫分析過程31
• 2.2.5 原子吸收光譜檢測31-32
• 2.3 結(jié)果與討論32-40
• 2.3.1 納米氧化銅合成條件優(yōu)化32-35
• 2.3.2 石墨爐原子吸收測銅條件優(yōu)化35-37
• 2.3.3 免疫分析條件優(yōu)化37-38
• 2.3.4 分析性能38
• 2.3.5 樣品分析38-40
• 2.4 結(jié)論40-41
• 第3章 基于銅納米粒子的無標(biāo)記DNA檢測方法41-52
• 3.1 引言41-42
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分42-43
• 3.2.1 儀器與試劑42
• 3.2.2 磁珠預(yù)處理與修飾42-43
• 3.2.3 檢測步驟43
• 3.2.4 電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測43
• 3.3 結(jié)果與討論43-51
• 3.3.1 實(shí)驗(yàn)原理43-45
• 3.3.2 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化45-49
• 3.3.3 分析性能49
• 3.3.4 方法驗(yàn)證49-51
• 3.4 結(jié)論51-52
• 結(jié)論52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 攻讀學(xué)位期間取得學(xué)術(shù)成果59

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙金富,王永成,張明萱,李元宗,常文保;控溫相變免疫分析測定雌酮[J];分析化學(xué);2003年02期

2 嚴(yán)楓;鞠q，

本文編號：1097816