本文關(guān)鍵詞：聚乙烯亞胺對(duì)兩性離子型脂質(zhì)體及陰離子型脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的影響

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【摘要】：近年來,聚乙烯亞胺(PEI)由于具有較高的轉(zhuǎn)染效率,成為當(dāng)前最有代表性的非病毒基因載體材料,但PEI臨床應(yīng)用中的毒性引起了人們對(duì)其安全性問題的關(guān)注,其與細(xì)胞的相互作用機(jī)制仍需要深入探究。本文選用比較典型的兩性離子型磷脂磷脂酰膽堿(SPC)和陰離子磷脂磷脂酰絲氨酸(DOP S)制備脂質(zhì)體來模擬細(xì)胞膜,從分子水平研究三種分子量的支化PEI對(duì)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)影響和相互作用機(jī)制,為PEI對(duì)細(xì)胞膜的擾動(dòng)機(jī)理提供了理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：對(duì)PEI-SPC脂質(zhì)體體系,PEI25K、PEI10K 和 PEI1.8K均可以在一定濃度范圍內(nèi)主要通過氫鍵和范德華力與脂質(zhì)體結(jié)合,使脂質(zhì)體之間發(fā)生聚集而形成復(fù)合物導(dǎo)致粒徑增加,并伴有表面電勢由負(fù)至正的反轉(zhuǎn),且兩者的結(jié)合是放熱過程。PEI與槲皮素有一定的結(jié)合作用,在低濃度的PEI條件下,槲皮素通過脂質(zhì)體外膜的能力增加,脂膜中心區(qū)域槲皮素的通透能力則降低。同時(shí)PEI可以使膜表面區(qū)域的流動(dòng)性稍有增加,脂膜中心流動(dòng)性則隨著PEI濃度的增加而降低,但整體變化不明顯。兩者相互作用還與PEI分子量有關(guān),其中PEI25K的作用強(qiáng)度最高。對(duì)PEI-DOPS脂質(zhì)體體系,DOPS由于帶有較多的負(fù)電荷與PEI的作用強(qiáng)度更強(qiáng)。三種分子量的PEI均能在一些特定的濃度下使DOPS脂質(zhì)體間發(fā)生膜融合。Zeta電位和ITC結(jié)果表明PEI主要通過氫鍵和范德華力與DOPS脂質(zhì)體結(jié)合,引起脂質(zhì)體表面電勢反轉(zhuǎn),且兩者結(jié)合是放熱過程。在膜融合的PEI濃度范圍內(nèi),藥物槲皮素通過脂膜的能力增加,膜流動(dòng)性降低。同樣,兩者的結(jié)合還受到PEI分子量的影響。PEI對(duì)SPC和DOPS脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的作用不同點(diǎn)在于是否使脂質(zhì)體產(chǎn)生膜融合,和對(duì)脂膜通透性流動(dòng)性的不同影響。
【關(guān)鍵詞】：聚乙烯亞胺 毒性 脂質(zhì)體 磷脂酰膽堿 聚集 磷脂酰絲氨酸融合
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O633.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 符號(hào)說明11-12
• 第一章 緒論12-25
• 1.1 研究背景12-13
• 1.2 基因載體材料13-17
• 1.2.1 病毒性基因載體材料14-15
• 1.2.2 非病毒性基因載體材料15-17
• 1.3 聚乙烯亞胺(PEI)17-19
• 1.3.1 聚乙烯亞胺的性質(zhì)和應(yīng)用17-18
• 1.3.2 聚乙烯亞胺安全性和存在的問題18-19
• 1.4 脂質(zhì)體19-22
• 1.4.1 脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)和特征19-20
• 1.4.2 脂質(zhì)體在臨床及實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用20-21
• 1.4.3 聚乙烯亞胺與脂質(zhì)體相互作用的研究現(xiàn)狀21-22
• 1.5 論文立題思路和研究內(nèi)容22-25
• 1.5.1 論文研究思路22-23
• 1.5.2 論文研究的主要內(nèi)容23-24
• 1.5.3 論文的創(chuàng)新點(diǎn)24-25
• 第二章 聚乙烯亞胺對(duì)兩性離子型脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的影響25-49
• 2.1 引言25-26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分26-27
• 2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)原料和試劑26-27
• 2.2.2 主要儀器27
• 2.3 樣品的制備和表征27-31
• 2.3.1 溶液的配制27-28
• 2.3.2 兩性離子型大豆磷脂酰膽堿(SPC)脂質(zhì)體的制備28
• 2.3.3 動(dòng)態(tài)光散射測粒徑28-29
• 2.3.4 熒光共振能量轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)(FRET)測SPC脂質(zhì)體膜融合29
• 2.3.5 Zeta電位測量29
• 2.3.6 等溫滴定量熱29-30
• 2.3.7 熒光猝滅30
• 2.3.8 熒光法分析PEI對(duì)槲皮素及對(duì)槲皮素-SPC脂質(zhì)體混合體系的影響30-31
• 2.3.9 熒光各向異性31
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論31-48
• 2.4.1 PEI引起的SPC脂質(zhì)體粒徑變化31-33
• 2.4.2 PEI對(duì)SPC脂質(zhì)體膜融合的影響33-35
• 2.4.3 PEI引起的SPC脂質(zhì)體Zeta電位的變化35-36
• 2.4.4 PEI與SPC脂質(zhì)體相互作用的熱力學(xué)研究36-39
• 2.4.5 PEI對(duì)SPC脂質(zhì)體膜通透性的影響39-46
• 2.4.6 PEI對(duì)SPC脂質(zhì)體膜流動(dòng)性的影響46-47
• 2.4.7 PEI與SPC脂質(zhì)體相互作用的分析47-48
• 2.5 本章小結(jié)48-49
• 第三章 聚乙烯亞胺對(duì)陰離子型脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的影響49-67
• 3.1 引言49
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分49-50
• 3.2.1 主要實(shí)驗(yàn)原料和試劑50
• 3.2.3 主要儀器50
• 3.3 樣品的制備和表征50-52
• 3.3.1 溶液的配制50
• 3.3.2 陰離子型磷酯酰絲氨酸(DOPS)脂質(zhì)體的制備50-51
• 3.3.3 動(dòng)態(tài)光散射測粒徑51
• 3.3.4 FRET實(shí)驗(yàn)測DOPS脂質(zhì)體膜融合51
• 3.3.5 Zeta電位測量51
• 3.3.6 等溫滴定量熱51
• 3.3.7 熒光猝滅51-52
• 3.3.8 熒光各向異性52
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論52-66
• 3.4.1 PEI引起的DOPS脂質(zhì)體粒徑變化52-54
• 3.4.2 PEI對(duì)DOPS脂質(zhì)體膜融合的影響54-57
• 3.4.3 PEI引起DOPS脂質(zhì)體Zeta電位的變化57-59
• 3.4.4 PEI與DOPS脂質(zhì)體相互作用的熱力學(xué)研究59-61
• 3.4.5 PEI對(duì)DOPS脂質(zhì)體膜通透性的影響61-64
• 3.4.6 PEI對(duì)DOPS脂質(zhì)體膜流動(dòng)性的影響64-65
• 3.4.7 PEI與DOPS脂質(zhì)體相互作用的分析65-66
• 3.5 本章小結(jié)66-67
• 第四章 結(jié)論和展望67-69
• 4.1 研究結(jié)果67-68
• 4.2 展望68-69
• 參考文獻(xiàn)69-78
• 致謝78-79
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄79

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