發(fā)布時間：2017-07-19 15:26

  本文關(guān)鍵詞：模擬微重力對人腦神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)影響的研究

  更多相關(guān)文章： 微重力模擬 神經(jīng)組織 形態(tài)結(jié)構(gòu) 細(xì)胞骨架 凋亡

【摘要】：航天飛行中，空間微重力對宇航員身體的影響問題較為突出，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)的問題亟需解決。研究地基模擬微重力對神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)的影響，與航天員飛行中神經(jīng)生理上的變化建立聯(lián)系，以便更好地了解和維護(hù)人們的活動，為人類探索空間提供一些研究數(shù)據(jù)。 研究方法：機(jī)械分離外科手術(shù)病人腦癌旁神經(jīng)組織，細(xì)胞法和植塊法進(jìn)行原代細(xì)胞和組織塊培養(yǎng)7天后，隨機(jī)分成兩組，一組移至回轉(zhuǎn)器培養(yǎng)1天、3天、5天、7天、14天，另一組同步靜置培養(yǎng)相同時間。各時間點收集兩組細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)檢測。倒置顯微鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞/組織塊形態(tài)及大體結(jié)構(gòu)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化，掃描電鏡觀察細(xì)胞表面立體微細(xì)形貌及對基底的貼附能力情況；采用TRITC熒光標(biāo)記的二抗和FITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(FITC-phalloidin)分別對β微管蛋白(β-tubulin)和纖維狀肌動蛋白(F-action)進(jìn)行標(biāo)記，在激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)β-tubulin和F-actin的變化；采用Hoechest-PI雙染和Tunel法顯示細(xì)胞/組織塊的凋亡形態(tài)學(xué)改變；采用AnnexinV標(biāo)記的異硫氰酸熒光素(AnnexinV-FITC)對細(xì)胞進(jìn)行染色，在流式細(xì)胞儀上檢測細(xì)胞凋亡率。 實驗結(jié)果：顯微鏡下可見，短時回轉(zhuǎn)處理如1天、3天細(xì)胞/組織塊形態(tài)變化不明顯，回轉(zhuǎn)時間延長至7天、14天后細(xì)胞體明顯變大，細(xì)胞對基底的貼附能力下降，脫落嚴(yán)重，，周圍連有散在性碎片；組織塊培養(yǎng)失去放射狀“生長暈”，遷出細(xì)胞紊亂無序，移行短。透射電鏡下，14天回轉(zhuǎn)組胞漿內(nèi)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)變少，線粒體斷裂同時互相離散，并有大量空泡產(chǎn)生。掃描電鏡下，細(xì)胞完全失去三角形態(tài)，僅剩一層細(xì)胞膜貼附在基底上。激光共聚顯微鏡下，同步對照組細(xì)胞內(nèi)β-tubulin和F-actin表達(dá)豐富，β-tubulin呈束狀有序排列；回轉(zhuǎn)組胞質(zhì)內(nèi)兩者表達(dá)明顯減少，F(xiàn)-actin繞核呈環(huán)狀，分布紊亂，且1個細(xì)胞核解離成幾個微核。流式細(xì)胞術(shù)檢測晚期細(xì)胞凋亡顯示，回轉(zhuǎn)14天組細(xì)胞的凋亡率(24.7％)高于同步對照組(10.5％)。 結(jié)論：模擬微重力一周后能夠明顯影響神經(jīng)組織細(xì)胞的大體形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的改變，同時也引起了細(xì)胞骨架蛋白的高度紊亂分布并伴隨細(xì)胞凋亡的發(fā)生，這些形態(tài)學(xué)上的變化可能是模擬微重力效應(yīng)誘導(dǎo)其后續(xù)發(fā)生凋亡的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：微重力模擬 神經(jīng)組織 形態(tài)結(jié)構(gòu) 細(xì)胞骨架 凋亡
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R85
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 目錄8-11
• 第一章 緒論11-20
• 1.1 本論文研究的背景和意義11-12
• 1.2 微重力12-14
• 1.2.1 空間微重力12-13
• 1.2.2 微重力效應(yīng)的模擬13-14
• 1.3 微重力的生物學(xué)效應(yīng)14-17
• 1.3.1 微重力對細(xì)胞的影響14-16
• 1.3.1.1 模擬微重力對細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和骨架的影響14-15
• 1.3.1.2 模擬微重力對細(xì)胞凋亡的影響15-16
• 1.3.2 微重力對神經(jīng)系統(tǒng)的影響16-17
• 1.4 神經(jīng)系統(tǒng)17-18
• 1.5 本課題研究內(nèi)容18
• 1.6 本課題研究思路18-20
• 第二章 材料與方法20-31
• 2.1 主要儀器設(shè)備20
• 2.2 人腦神經(jīng)組織20
• 2.3 主要試劑及抗體20-21
• 2.4 原代組織塊和細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備工作21
• 2.4.1 解剖器械的清洗與滅菌21
• 2.4.2 培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿的預(yù)處理21
• 2.4.3 DMEM-F12 培養(yǎng)基及緩沖液的配制21
• 2.5 體外原代組織塊和細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.5.1 原代組織塊植塊培養(yǎng)法22
• 2.5.2 原代分離細(xì)胞培養(yǎng)法22
• 2.6 模擬微重力效應(yīng)體系的建立22-24
• 2.7 神經(jīng)細(xì)胞的特異性免疫鑒定24
• 2.8 原位掃描電鏡和透射電鏡細(xì)胞標(biāo)本制備24-27
• 2.8.1 2.5％戊二醛固定液的配制24-25
• 2.8.2 掃描電鏡細(xì)胞標(biāo)本制備25-26
• 2.8.3 透射電鏡細(xì)胞標(biāo)本制備26-27
• 2.9 細(xì)胞骨架蛋白的免疫熒光染色27
• 2.10 細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)熒光 Hoechst-PI 雙染27-28
• 2.11 石蠟切片的 HE 染色和 TMR-Red Tunel 檢測28-30
• 2.11.1 石蠟切片-HE 染色28-29
• 2.11.2 石蠟切片-Tunel 檢測29-30
• 2.12 細(xì)胞凋亡率的流式細(xì)胞儀檢測30-31
• 第三章 結(jié)果與分析31-52
• 3.1 模擬微重力效應(yīng)前原代組織塊和細(xì)胞生長時間的確定31-34
• 3.1.1 原代組織塊生長情況的跟蹤觀察31-32
• 3.1.2 原代細(xì)胞生長情況的跟蹤觀察32-33
• 3.1.3 小結(jié)33-34
• 3.2 神經(jīng)細(xì)胞的特異性免疫鑒定34-35
• 3.3 模擬微重力效應(yīng)對原代組織學(xué)大體形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響35-38
• 3.3.1 對原代組織塊大體形態(tài)及其遷出細(xì)胞形態(tài)的影響35-36
• 3.3.2 對原代組織塊內(nèi)部結(jié)構(gòu)影響-石蠟切片 HE 染色結(jié)果36-37
• 3.3.3 小結(jié)37-38
• 3.4 模擬微重力效應(yīng)對原代細(xì)胞大體形態(tài)、表面形貌及超微結(jié)構(gòu)的影響38-44
• 3.4.1 對原代細(xì)胞大體形態(tài)的影響38-39
• 3.4.2 對原位細(xì)胞表面立體微細(xì)形貌的影響39-41
• 3.4.3 對原位細(xì)胞胞內(nèi)線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等超微結(jié)構(gòu)的影響41-43
• 3.4.4 小結(jié)43-44
• 3.5 模擬微重力效應(yīng)對細(xì)胞骨架系統(tǒng)的影響44-47
• 3.5.1 微管β-tubulin 和微絲 F-actin Merge 結(jié)果44-46
• 3.5.2 小結(jié)46-47
• 3.6 模擬微重力效應(yīng)對細(xì)胞凋亡的影響47-52
• 3.6.1 Hoechst-PI 染色結(jié)果47-48
• 3.6.2 石蠟切片 Tunel 檢測結(jié)果48-49
• 3.6.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率結(jié)果49-51
• 3.6.4 小結(jié)51-52
• 第四章 討論52-55
• 4.1 模擬微重力效應(yīng)對組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響的分析52-53
• 4.2 模擬微重力效應(yīng)對細(xì)胞內(nèi)骨架系統(tǒng)影響的分析53-54
• 4.3 模擬微重力效應(yīng)引起細(xì)胞凋亡發(fā)生的分析54-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文與研究成果清單60-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：563608