建立了高效液相色譜法(HPLC)測定硝酸羥胺含量的分析方法。采用柱前衍生化方法對樣品進行預(yù)處理,通過對色譜條件和衍生化條件的優(yōu)化,確定了以ZORBAX SB-C18色譜柱(100mm×2.1mm,3.5μm)進行分離,以乙腈-水為流動相進行梯度洗脫;使用2-硝基苯甲醛作為衍生化試劑,70℃水浴反應(yīng)40min的衍生化方法。結(jié)果表明,衍生產(chǎn)物和衍生劑實現(xiàn)了完全分離,標準曲線線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)R=0.9999,在50μg/mL～150μg/mL加標水平下,加標回收率為99.14%～101.03%,RSD為0.7%～2.6%。該方法檢測快速高效,精密度和準確度高,適用于硝酸羥胺含量的測定。

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【部分圖文】：

圖12-硝基苯甲醛和衍生物色譜圖

根據(jù)待測物的性質(zhì)，一般選擇C18色譜柱進行分離。本研究選用ZORBAXSB-C18柱，峰形與分離度均良好。HAN和鹽酸羥胺與2-硝基苯甲醛反應(yīng)的衍生產(chǎn)物均為2-硝基苯甲醛肟，考察衍生產(chǎn)物和衍生試劑的分離條件。流動相分別選取乙腈-水和甲醇-水，比較其對化合物分離和響應(yīng)強度的影響。....

圖2反應(yīng)溫度對衍生化反應(yīng)的影響

溫度對衍生化反應(yīng)有重要的影響，考察不同溫度下衍生物的峰面積變化。分別在4個樣品瓶中加入100μL的稀釋后HAN樣品，加入300μL的10mg/mL的2-硝基苯甲醛溶液，然后加入600μL乙腈至1ml，旋后水浴。考察相同時間內(nèi)溫度30℃，50℃，60℃，70℃和80℃時，對衍生化反....

圖3反應(yīng)時間對衍生化反應(yīng)的影響

考察反應(yīng)時間對衍生化反應(yīng)的影響，設(shè)定衍生化時間為20min、30min、40min和50min，分別在70℃進行水浴后，上機檢測。衍生物的峰面積如圖3所示，結(jié)果顯示，隨著衍生化反應(yīng)時間的增加，衍生物的峰面積逐漸變大，20min～40min衍生物峰面積增加較快，超過40min后峰面....

圖4鹽酸羥胺濃度與衍生產(chǎn)物峰面積的線性關(guān)系

分別取20μL、40μL、80μL、120μL和160μL的鹽酸羥胺標準溶液于樣品瓶中，加入300μL衍生劑，然后加入乙腈至1ml，渦旋，在70℃水浴反應(yīng)40min，放至室溫后，進行液相色譜分析。以衍生產(chǎn)物的峰面積為縱坐標，鹽酸羥胺濃度為橫坐標，繪制標準曲線如圖4所示。按照衍生產(chǎn)....

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