蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)是生化及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的重要組成部分,在本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)中占有重要地位。為了探索合適的實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)條件,優(yōu)化本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的溶菌酶分離純化實(shí)驗(yàn),以獲得更好的純化結(jié)果和教學(xué)效果,該文使用離子交換層析、硫銨沉淀、分子篩層析等方法成功地從蛋清中純化出高純度的溶菌酶,用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳方法鑒定了樣品純度,并用溶壁微球菌做為底物測定了純化酶的活力及比活力。結(jié)果顯示,使用改進(jìn)后的方法能夠得到較高純度和比活力的溶菌酶,整個實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好、易于操作,適合作為本科教學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。 

【文章來源】：實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理. 2020,37(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

離子交換層析OD280-時間曲線

配制變性聚丙烯酰胺凝膠（15%分離膠、4%濃縮膠）。分別對離子交換層析得到的各餾分取少量進(jìn)行電泳。用考馬斯亮藍(lán)R250染色法顯示電泳結(jié)果。部分結(jié)果如圖2所示。其中，a為離子交換層析時用200 mmol/L NaCl溶液洗脫所得餾分中一部分樣品的電泳結(jié)果，M:marker按分子量大小判斷，其中最下方的條帶應(yīng)為溶菌酶的條帶；b的M:marker圖2左起第二、三泳道所點(diǎn)樣品分別取自雞蛋清和Sample1，右側(cè)諸泳道中所點(diǎn)樣品取自500 mmol/L NaCl溶液洗脫所得各餾分，按分子量大小判斷，最下方的條帶應(yīng)為溶菌酶的條帶。2.3.3 鹽析及重懸

進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析分子篩純化結(jié)果如圖4所示。篩選出電泳條帶單一的餾分，混合均勻作為Sample3（測體積）。圖4 分子篩層析各餾分的SDS-PAGE結(jié)果

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本文編號：3321971