本文關(guān)鍵詞：推拿對SNI大鼠脊髓腹角和背根神經(jīng)元凋亡通路中Bcl-2、caspase-3表達(dá)的影響

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【摘要】：[目的]通過觀察坐骨神經(jīng)損傷(Sciatic Nerve Inj ury, SNI)大鼠脊髓和背根神經(jīng)元Bcl-2、caspase-3的表達(dá),從線粒體／細(xì)胞色素C介導(dǎo)的凋亡通路探究推拿對SNI大鼠神經(jīng)元凋亡的影響,進(jìn)一步分析推拿促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷修復(fù)的機(jī)理。[方法]將91只SD大鼠分為空白對照組、假手術(shù)組、模型組、甲鈷胺組和推拿組五組,通過坐骨神經(jīng)夾持造成SNI模型,甲鈷胺組干預(yù)方法為腹腔注射甲鈷胺營養(yǎng)液,推拿組用“按摩推拿手法模擬儀”模擬撥法、點(diǎn)法、揉法三種手法進(jìn)行推拿干預(yù),穴位選取殷門、承山和陽陵泉處,每穴每法各1分鐘,共9分鐘。推拿干預(yù)后,以斜板試驗(yàn)、坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(Sciaticfunctional index, SFI),光熱耐痛閾評價大鼠運(yùn)動、感覺功能的恢復(fù)情況；對脊髓腹角、坐骨神經(jīng)損傷點(diǎn)進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析,并用TUNNEL染色法觀察坐骨神經(jīng)損傷點(diǎn)處神經(jīng)元凋亡情況,同時觀察坐骨神經(jīng)電生理和腓腸肌濕重的變化,尋找推拿對損傷神經(jīng)修復(fù)的證據(jù)；對脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)損傷點(diǎn)處Bcl-2、caspase-3的含量進(jìn)行檢測,闡釋推拿促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷后再生和修復(fù)的機(jī)理。[結(jié)果]1行為學(xué)——推拿能促進(jìn)SNI運(yùn)動、感覺恢復(fù)。1.1斜板實(shí)驗(yàn)、SFI結(jié)果：造模后7天,模型組大鼠斜板實(shí)驗(yàn)、SFI評分明顯低于空白對照組(P0.05),說明SNI模型制備成功,大鼠出現(xiàn)運(yùn)動功能障礙。干預(yù)7次、20次后,推拿組、甲鈷胺組斜板實(shí)驗(yàn)、SFI評分與模型組比較明顯升高(P0.05),而且干預(yù)20次明顯高于干預(yù)7次,說明推拿干預(yù)有效,而且效果在逐步提升,推拿可促進(jìn)SNI大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)。1.2光熱耐痛閾結(jié)果：造模后7天模型組大鼠光熱耐痛閾明顯高于空白對照組(P0.05),說明SNI模型制備成功。干預(yù)7次、20次后,模型組大鼠光熱耐痛閾明顯高于空白對照組(P0.05),推拿組、甲鈷胺組光熱耐痛閾與模型組比較明顯降低(P0.05),在20次后推拿組、甲鉆胺組光熱耐痛閾與空白對照組比較沒有差異(P0.05),說明20次治療后SNI大鼠感覺功能基本恢復(fù)正常。2形態(tài)學(xué)、功能學(xué)——推拿能改善大鼠脊髓腹角、神經(jīng)的微觀形態(tài)和減少神經(jīng)元凋亡數(shù)量,改善神經(jīng)傳導(dǎo)速度,增加腓腸肌濕重。2.1脊髓腹角HE染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)顯示脊髓腹角HE染色形態(tài)學(xué)有改變：造模后7天模型組脊髓腹角中存在神經(jīng)元凋亡,胞體腫脹等表現(xiàn)。干預(yù)10次后,甲鈷胺組和推拿組的形態(tài)學(xué)有所改善,模型組改善較差。干預(yù)20次后,模型組形態(tài)學(xué)改變也有所恢復(fù),但仍明顯差于正常組,甲鉆胺組和推拿組的形態(tài)學(xué)有改觀,且明顯優(yōu)于模型組,神經(jīng)元排列較為規(guī)整,腫脹消失,提示推拿干預(yù)能夠改善大鼠的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。2.2坐骨神經(jīng)HE染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)顯示坐骨神經(jīng)的HE染色形態(tài)學(xué)有改變：造模后7天模型組坐骨神經(jīng)中存在神經(jīng)元凋亡,胞體腫脹等；坐骨神經(jīng)可見髓鞘散亂,軸索崩解等表現(xiàn)。干預(yù)10次后,甲鈷胺組和推拿組的形態(tài)學(xué)有所改善,模型組改善較差。干預(yù)20次后,模型組形態(tài)學(xué)改變也有所恢復(fù),但仍明顯差于正常組,甲鈷胺組和推拿組的形態(tài)學(xué)有改觀,且明顯優(yōu)于模型組,神經(jīng)元排列較為規(guī)整,腫脹消失,提示推拿干預(yù)能夠改善大鼠的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。2.3坐骨神經(jīng)損傷點(diǎn)處TUNNEL染色結(jié)果：造模后7天,模型組大鼠神經(jīng)元凋亡數(shù)量明顯高于空白對照組(P0.05),說明造模后開始有神經(jīng)元凋亡現(xiàn)象的發(fā)生。干預(yù)7次、20次后模型組大鼠神經(jīng)元凋亡數(shù)量仍然高于空白對照組(P0.05),甲鈷胺組、推拿組神經(jīng)神經(jīng)元凋亡數(shù)量與模型組比較明顯降低(P0.05),說明推拿干預(yù)能夠降低神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡數(shù)量,促進(jìn)神經(jīng)再生。2.4腓腸肌濕重結(jié)果：造模后7天,模型組大鼠腓腸肌濕重明顯低于空白對照組(P0.05),說明造模后腓腸肌萎縮。干預(yù)7次、20次后模型組大鼠腓腸肌濕重低于空白對照組(P0.05),甲鈷胺組、推拿組腓腸肌濕重與模型組比較明顯升高(P0.05),說明推拿能夠促進(jìn)腓腸肌的恢復(fù),防止其萎縮。2.5神經(jīng)電生理結(jié)果：造模后7天,模型組大鼠運(yùn)動、感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯低于空白對照組(P0.05),說明造模后神經(jīng)傳導(dǎo)速度降低。干預(yù)7次、20次后模型組大鼠神經(jīng)的運(yùn)動、感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度低于空白對照組(P0.05),甲鈷胺組、推拿組運(yùn)動、感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度與模型組比較明顯升高(P0.05),說明推拿能夠促進(jìn)損傷神經(jīng)的恢復(fù),干預(yù)20次后甲鈷胺組、推拿組大鼠運(yùn)動、感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度仍然低于空白對照組(P0.05),但高于模型組(P0.05),并且20次后推拿組的效果強(qiáng)于第7次,說明推拿干預(yù)后神經(jīng)功能在逐漸恢復(fù)。3免疫組化結(jié)果——推拿能明顯促進(jìn)脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中的Bcl-2的表達(dá)量,降低caspase-3的表達(dá)量。3.1 Bcl-2免疫組化結(jié)果Bcl-2在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)結(jié)果造模后7天模型組大鼠Bcl-2在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量明顯高于空白對照組(P0.05),表明造模后在損傷處增多。推拿干預(yù)7次、20次后模型組、甲鈷胺組、推拿組大鼠Bcl-2在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量明顯高于空白對照組(P0.05),推拿組、甲鈷胺組Bcl-2在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量與模型組比較明顯升高(P0.05),而且干預(yù)第7次、20次均好于模型組,說明推拿干預(yù)有治療效果,發(fā)揮損傷神經(jīng)保護(hù)作用；推拿組Bcl-2在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量與甲鈷胺組比較無明顯差異(P0.05),說明推拿和甲鈷胺對Bcl-2表達(dá)均有效。3.2 casepase-3免疫組化結(jié)果casepase-3在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)結(jié)果造模后7天模型組大鼠casepase-3在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量明顯高于空白對照組(P0.05),表明造模后在損傷處增多。推拿干預(yù)7次、20次后模型組、甲鈷胺組、推拿組大鼠casepase-3在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量明顯高于空白對照組(P0.05),推拿組、甲鈷胺組casepase-3在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量與模型組比較明顯升高(P0.05),而且干預(yù)第7次、20次均好于模型組,說明推拿干預(yù)有治療效果,發(fā)揮損傷神經(jīng)保護(hù)作用；推拿組casepase-3在脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中免疫組化表達(dá)量與甲鉆胺組比較無明顯差異(P0.05),說明推拿和甲鈷胺對casepase-3表達(dá)均有效。4 Western blot結(jié)果——推拿能明顯促進(jìn)脊髓腹角中的Bcl-2的表達(dá)量,降低caspase-3的表達(dá)量。造模后7天模型組大鼠Bcl-2、casepase-3在脊髓腹角中表達(dá)量明顯高于空白對照組(P0.05),表明造模后在損傷處表達(dá)量明顯增多。推拿干預(yù)7次、20次后模型組、甲鈷胺組、推拿組大鼠Bcl-2、casepase-3在脊髓腹角中表達(dá)量明顯高于空白對照組(P0.05),推拿組、甲鈷胺組Bcl-2在脊髓腹角中表達(dá)量與模型組比較明顯升高(P0.05)；casepase-3在脊髓腹角中表達(dá)量與模型組比較明顯降低(P0.05),說明推拿干預(yù)有治療效果,能夠促進(jìn)Bcl-2的表達(dá),抑制caspase-3的表達(dá),能夠發(fā)揮抗凋亡作用,組織神經(jīng)元凋亡,進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,甲鈷胺組和推拿組比較沒有差異(P0.05),說明甲鈷胺和推拿干預(yù)均能發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。[結(jié)論]1推拿干預(yù)可以促進(jìn)SNI大鼠斜板實(shí)驗(yàn)、SFI、光熱耐痛閾的恢復(fù),提示推拿可以改善SNI大鼠的運(yùn)動、感覺功能。2推拿干預(yù)可以促進(jìn)受損神經(jīng)軸突的有髓神經(jīng)數(shù)的增加,促進(jìn)再生神經(jīng)與靶器官建立連接,降低細(xì)胞水腫程度,和神經(jīng)再生的關(guān)鍵部位“神經(jīng)元”的功能恢復(fù)。推拿干預(yù)改善神經(jīng)元凋亡情況；促進(jìn)坐骨神經(jīng)的運(yùn)動、感覺神經(jīng)傳導(dǎo)功能的恢復(fù),改善坐骨神經(jīng)功能,促進(jìn)損傷神經(jīng)修復(fù)；防止腓腸肌萎縮。3推拿干預(yù)可以增加脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中Bcl-2的表達(dá)量,降低caspase-3的表達(dá)量,進(jìn)而發(fā)揮其抗凋亡作用,促進(jìn)損傷神經(jīng)的再生,這應(yīng)是推拿促進(jìn)神經(jīng)損傷修復(fù)的起效機(jī)理之一。推拿可以促進(jìn)SNI大鼠運(yùn)動、感覺功能的恢復(fù),提高神經(jīng)傳導(dǎo)速度,抑制神經(jīng)元的凋亡,防止腓腸肌萎縮,增加脊髓腹角、背根神經(jīng)節(jié)、坐骨神經(jīng)中Bcl-2的表達(dá)量,降低caspase-3的表達(dá)量,進(jìn)而發(fā)揮其抗凋亡作用。
【關(guān)鍵詞】：Bcl-2 caspase-3 機(jī)理 細(xì)胞凋亡 推拿
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R244.1
【目錄】：

• 摘要5-9
• Abstract9-14
• 英文縮略詞14-15
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述15-45
• 綜述一 周圍神經(jīng)損傷的研究進(jìn)展15-27
• 1 中西醫(yī)對周圍神經(jīng)損傷的認(rèn)識和病因分析15-17
• 2 損傷的病因和分類17-18
• 3 中西醫(yī)對周圍神經(jīng)損傷的修復(fù)機(jī)理18-21
• 4 推拿治療周圍神經(jīng)損傷研究進(jìn)展21-27
• 綜述二 細(xì)胞凋亡損傷研究進(jìn)展27-31
• 1 細(xì)胞凋亡的特征27
• 2 細(xì)胞凋亡的分子信號通路27-30
• 3 通路間的相互作用30-31
• 綜述三 Bcl-2、caspase-3的研究概況31-37
• 1 Bcl-2家族31-32
• 2 caspases家族32-33
• 3 Bcl-2、caspase-3在凋亡通路中的作用33-35
• 4 Bcl-2、caspase-3的表達(dá)情況35-37
• 參考文獻(xiàn)37-45
• 前言45-47
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究47-85
• 實(shí)驗(yàn)一 推拿對SNI大鼠行為學(xué)的影響研究47-55
• 1 材料47-48
• 2 行為學(xué)檢測方法48-50
• 3 行為學(xué)結(jié)果50-53
• 4 討論53-55
• 實(shí)驗(yàn)二 推拿對SNI大鼠形態(tài)學(xué)、功能學(xué)的影響研究55-67
• 1 材料55
• 2 形態(tài)學(xué)、功能學(xué)檢測方法55-58
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-63
• 4 討論63-67
• 實(shí)驗(yàn)三 推拿對SNI大鼠凋亡通路中Bcl-2、caspase-3表達(dá)的影響67-85
• 1 材料67
• 2 免疫組化、Western blot檢測方法67-71
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果71-81
• 4 討論81-85
• 結(jié)語85-86
• 參考文獻(xiàn)86-89
• 附錄89-97
• 附錄1 脊髓腹角HE染色89-90
• 附件2 坐骨神經(jīng)HE染色90-91
• 附件3 脊髓腹角Bcl-2免疫組化染色91-92
• 附件4 背根神經(jīng)節(jié)Bcl-2免疫組化染色92-93
• 附件5 坐骨神經(jīng)Bcl-2免疫組化染色93-94
• 附件6 脊髓腹角caspase-3免疫組化染色94-95
• 附件7 背根神經(jīng)節(jié)caspase-3免疫組化染色95-96
• 附件8 坐骨神經(jīng)caspase-3免疫組化染色96-97
• 致謝97-99
• 在學(xué)期間主要研究成果99-100
• 個人簡歷100

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9 謝洪;凋亡抑制基因SURVIVIN在喉癌中的表達(dá)及與caspase-3，p53，cyclin E及ki-67之間的關(guān)系[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張林峰;推拿對SNI大鼠脊髓腹角和背根神經(jīng)元凋亡通路中Bcl-2、caspase-3表達(dá)的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 伍志翔;肌苷對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷細(xì)胞色素c和caspase-3表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2009年

3 林銳波;芪藶強(qiáng)心膠囊對心梗后心衰大鼠心功能及凋亡蛋白caspase-3表達(dá)的影響[D];汕頭大學(xué);2010年

4 梁憲梅;慢性阻塞性肺疾病患者細(xì)胞凋亡和caspase-3的表達(dá)[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2013年

5 胡娜;亞低溫對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷時腦組織含水量和caspase-3的影響[D];南昌大學(xué);2009年

6 王宗立;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對缺血再灌注大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡及Survivin、caspase-3蛋白表達(dá)的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

7 王鶴;凋亡因子caspase-3在女性非小細(xì)胞肺癌發(fā)生中的表達(dá)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

8 白琳;苯妥英鈉對成年大鼠頂葉、海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及Fas、caspase-3的表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

9 仲廣生;乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中paxillin和caspase-3的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2012年

10 胡會華;乳腺癌新輔助化療中caspase-7、caspase-3、survivin的相關(guān)研究[D];蘇州大學(xué);2007年

本文編號：910721