發(fā)布時間：2017-08-28 06:03

  本文關(guān)鍵詞：基于代謝組學(xué)研究決明子水提物及橙黃決明素對高脂血癥大鼠代謝的影響

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【摘要】：目的:研究基于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)的代謝組學(xué)應(yīng)用于決明子水提物及橙黃決明素對高脂血癥模型大鼠體內(nèi)代謝物的影響。通過常用的代謝組學(xué)分析方法找到高脂血癥的生物標(biāo)志物,探討決明子及橙黃決明素調(diào)脂作用與高脂血癥生物標(biāo)志物的聯(lián)系。從而為決明子中藥材以及橙黃決明素的進(jìn)一步開發(fā)與利用提供有價值的依據(jù)。方法:(1)大鼠高脂血癥模型的建立將適應(yīng)環(huán)境3d后的Sprague-Dawley雄性大鼠隨機分成2組,正常對照組:普通飼料喂養(yǎng);高脂血癥模型組:高脂飼料(蛋黃粉8.0%、豬油6.0%、膽固醇4.0%、膽酸鈉0.5%、丙硫氧嘧啶0.2%及基礎(chǔ)飼料81.3%)喂養(yǎng)。30d后眼底靜脈叢取血檢測其生化指標(biāo),確認(rèn)造模效果。(2)建立大鼠血清中內(nèi)源性代謝物GC-MS定量分析方法由于GC-MS能檢測的成分必須具備揮發(fā)性,所以對血清樣品進(jìn)行肟化-硅烷化衍生處理,從而達(dá)到能夠檢測難揮發(fā)和較大極性代謝產(chǎn)物的目的。將多個樣本均勻混合而制成質(zhì)量控制(quality control,QC)樣本,結(jié)合混合標(biāo)準(zhǔn)品樣本中各標(biāo)準(zhǔn)品相對含量的RSD值進(jìn)行GC-MS方法學(xué)的考察。(3)高脂血癥生物標(biāo)志物篩選比較高脂血癥造模前后、決明子水提物、橙黃決明素及阿托伐他汀治療前后大鼠體內(nèi)代謝物的變化,采用變量的投影重要性指標(biāo)(VIP)和隨機森林算法兩種方法尋找與高脂血癥相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物,對尋找到的潛在生物標(biāo)志物進(jìn)行t檢驗分析,確認(rèn)最終的生物標(biāo)志物。運用主成分分析法(PCA)和偏最小二乘-判別分析(PLS-DA)得到?jīng)Q明子水提物、橙黃決明素及阿托伐他汀調(diào)脂作用與高脂血癥生物標(biāo)志物的相關(guān)性,從而對其調(diào)脂作用做出推斷。結(jié)果:(1)除造模過程中死去的大鼠外,其余大鼠各項生化指標(biāo)均有變化,其中低密度脂蛋白膽固醇、總膽固醇升高有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),提示高脂血癥大鼠造模成功。(2)QC樣本的大部分代謝物RSD值及混合標(biāo)準(zhǔn)品樣本中各標(biāo)準(zhǔn)品相對含量的RSD值均小于20%,說明樣本前處理重復(fù)性好,儀器穩(wěn)定性亦良好,獲得的數(shù)據(jù)可靠,可以用于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析。結(jié)合化學(xué)對照品、NIST05及NIST107質(zhì)譜庫對大鼠血清內(nèi)源性代謝物進(jìn)行定性,準(zhǔn)確定性出共45個代謝物,其中的27個用化學(xué)對照品定性,另外18個在NIST107和NIST05質(zhì)譜庫中檢索,其相似度均≥85%。這45種代謝物中包含有機酸、脂肪酸、氨基酸、糖類以及膽固醇。(3)采用VIP值得到了9種與高脂血癥相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物:L-纈氨酸、丙氨酸、甘氨酸、富馬酸、異亮氨酸、絲氨酸、硬脂酸、亞油酸和膽固醇;采用隨機森林算法得到與高脂血癥相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物10個,分別為丙氨酸、甘氨酸、L-纈氨酸、異亮氨酸、富馬酸、絲氨酸、1,5-脫水山梨醇、亞油酸、硬脂酸和膽固醇。對這些生物標(biāo)志物進(jìn)行t檢驗分析,最終得到5種具有差異的代謝物:丙氨酸、L-纈氨酸、異亮氨酸、亞油酸和膽固醇。以此5種代謝物建立PLS-DA模型,具有良好的分離度。因此認(rèn)為此5種代謝物為高脂血癥相關(guān)的生物標(biāo)志物。結(jié)論:(1)GC-MS用于代謝組學(xué)數(shù)據(jù)采集時存在一定的缺陷,但在對血清樣本采取肟化-硅烷化衍生處理后,可以作為一種準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性良好的數(shù)據(jù)采集方法,更好地應(yīng)用于代謝組學(xué)的研究。(2)本實驗通過2種不同代謝組學(xué)分析方法尋找與高脂血癥相關(guān)的生物標(biāo)志物,結(jié)合t檢驗結(jié)果進(jìn)行PLS-DA建模,最終得到5種高脂血癥的潛在生物標(biāo)志物。通過PCA、PLS-DA比較分析了決明子水提物和橙黃決明素治療前后高脂血癥大鼠體內(nèi)代謝物的變化情況,發(fā)現(xiàn)橙黃決明素具有更好的調(diào)脂作用。
【關(guān)鍵詞】：高脂血癥 決明子水提物 橙黃決明素 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 代謝組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 1 引言12-16
• 2 大鼠高脂血癥模型的建立及GC-MS方法學(xué)考察16-28
• 2.1 儀器、試劑及動物16-17
• 2.2 方法17-20
• 2.3 結(jié)果20-26
• 2.4 討論26-28
• 3 決明子及橙黃決明素調(diào)脂作用的比較與生物標(biāo)志物的篩選28-38
• 3.1 儀器、試劑及動物28
• 3.2 實驗方法28-29
• 3.3 結(jié)果29-36
• 3.4 討論36-38
• 4 全文總結(jié)與展望38-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 附錄45-46
• 綜述46-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 在校科研成績57-58
• 致謝58

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1 譚穎杰;;決明子水提物對自發(fā)性高血壓大鼠降壓作用的實驗研究[J];中外醫(yī)學(xué)研究;2012年27期

2 李文;殷小杰;張村;李麗;王嵐;肖永慶;;生、炒決明子水提物抗氧化及對一氧化氮、內(nèi)皮素影響的比較研究[J];中國中藥雜志;2009年18期

3 金香子;金政;蔡英蘭;;決明子水提物對D-半乳糖中毒大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J];時珍國醫(yī)國藥;2007年03期

4 ;[J];;年期

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1 余勝;基于代謝組學(xué)研究決明子水提物及橙黃決明素對高脂血癥大鼠代謝的影響[D];湖南師范大學(xué);2016年

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