【摘要】：研究背景傳統(tǒng)針灸學(xué)將腧穴定義為人體臟腑經(jīng)絡(luò)之氣輸注于體表的特殊部位,既是反映疾病的門道,又是針灸的施術(shù)部位。這里雖然提到了特殊部位,但是對其中的具體結(jié)構(gòu)未做詳細(xì)的描述。現(xiàn)代研究則認(rèn)為腧穴是由一系列已知結(jié)構(gòu),如神經(jīng)、血管等,按一定規(guī)律進(jìn)行空間布局和立體構(gòu)筑所組成的一個綜合體。腧穴是針刺刺激的初始應(yīng)答部位,針灸效應(yīng)的產(chǎn)生與皮膚的結(jié)構(gòu)和功能密不可分。皮膚由表皮(epidermis)、真皮(dermis)、皮下(subcuits)組織構(gòu)成。其不同層次內(nèi)含有各種具有不同生理功能的細(xì)胞如角質(zhì)形成細(xì)胞、黑素細(xì)胞(melanocyte)、朗格漢斯細(xì)胞(Langerhans cells,LCs)和Merkel細(xì)胞。皮膚免疫系統(tǒng)(skinimmune system,SIS)可分為細(xì)胞與體液兩大部分。細(xì)胞成分包括角質(zhì)形成細(xì)胞、LCs、樹突狀細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞等。體液成分有肽類、補(bǔ)體、分泌型免疫球蛋白及細(xì)胞因子等。對于腧穴結(jié)構(gòu)的探索經(jīng)歷了從宏觀到微觀幾個不同的認(rèn)識階段。過去研究者們覺得人體上的穴位大多位于神經(jīng)末梢密集集中或有較粗神經(jīng)纖維經(jīng)行之處,但是關(guān)于對其具體結(jié)構(gòu)的描述尚無明確定論。目前為止,我們對腧穴相關(guān)的組織結(jié)構(gòu)還缺少深入系統(tǒng)的研究。過去通過肉眼對體表的觀察和局部解剖后的宏微觀解析,或是借助各種顯微鏡對組織切片上進(jìn)行的微觀圖像記錄和分析,我們觀察到的腧穴是由多元已知成分組成的組織結(jié)構(gòu),它們是針灸過程中能夠直接接觸或作用的載體,并借此發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。綜合來看,近幾十年來研究者將對穴位結(jié)構(gòu)研究的重點(diǎn)大多放在穴位的體表定位及其大體組織結(jié)構(gòu)上,而缺少對其中的細(xì)胞分類和它們所包含的化學(xué)成分方面的深入研究。既然我們還無法確認(rèn)與腧穴相對應(yīng)的特定結(jié)構(gòu)的存在,那么從已知的組織結(jié)構(gòu)入手研究與腧穴相關(guān)的細(xì)胞分類及其化學(xué)特征就自然成為腧穴生物學(xué)基礎(chǔ)研究的選擇。目前,隨著組織學(xué)研究技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步,為我們從組織學(xué)水平深入研究腧穴的顯微結(jié)構(gòu)提供了更多有效的方法,也為我們能夠更好地探究腧穴相關(guān)的組織結(jié)構(gòu)創(chuàng)造了條件。皮膚接受針灸刺激后發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的部位與其微循環(huán)結(jié)構(gòu)、神經(jīng)末梢以及細(xì)胞生物活性成分的關(guān)系非常密切。盡管穴位的選取和刺激的方式對針灸療效的獲得起著至關(guān)重要的作用,但是系統(tǒng)深入地了解腧穴的生物學(xué)基礎(chǔ)及顯微結(jié)構(gòu),有助于我們更好地解釋針刺效應(yīng)產(chǎn)生的機(jī)制。我們需要注意的是由于腧穴所在部位的不同,它們在皮膚的厚度、肌肉組織的多少、血管和神經(jīng)分布的疏密等方面也存在很多差異。因此為了更加深入地了解腧穴的生物學(xué)基礎(chǔ),我們要將重點(diǎn)放在腧穴結(jié)構(gòu)相關(guān)的組織化學(xué)研究上。接受刺激后腧穴局部的生物活性物質(zhì)會發(fā)生相應(yīng)改變,正是這種變化啟動了機(jī)體自穩(wěn)態(tài)的調(diào)控以及一系列相應(yīng)級聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生,從而達(dá)到治愈疾病的目的。由此反映出針灸具有調(diào)控和維持人體功能穩(wěn)態(tài)的效應(yīng)。針灸刺激穴區(qū)處皮膚可以出現(xiàn)針感及所謂“得氣”“循經(jīng)感傳”效應(yīng),該興奮可以通過穴區(qū)內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)向中樞傳遞,其中血管壁及其周圍的交感神經(jīng)末梢的興奮沖動,在循經(jīng)感傳的產(chǎn)生以及“穴位—臟腑相關(guān)”調(diào)節(jié)效應(yīng)中起到了關(guān)鍵性作用。穴區(qū)局部的神經(jīng)纖維的密度、血管及淋巴管的分布、各種免疫細(xì)胞功的激活和相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的產(chǎn)生是針刺效應(yīng)產(chǎn)生的生物學(xué)基礎(chǔ)。血管與淋巴管作為局部的免疫微環(huán)境是穴區(qū)免疫發(fā)生的前提:當(dāng)機(jī)體受到損傷后,淋巴液中會出現(xiàn)一些化學(xué)活性物質(zhì)如炎癥及血管反應(yīng)介質(zhì)等,這些化學(xué)介質(zhì)可能在針刺效應(yīng)中起著關(guān)鍵性作用。同時,針灸對腧穴局部組織產(chǎn)生機(jī)械和化學(xué)刺激,可能借助附近的外周感受器和游離神經(jīng)纖維將針刺信號經(jīng)神經(jīng)上行系統(tǒng)上傳到中樞,然后通過各級中樞的整合及反射,對軀體和內(nèi)臟功能活動進(jìn)行調(diào)控。作為皮膚神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)中的重要一環(huán),淋巴管與微血管所參與的體液調(diào)節(jié)和細(xì)胞免疫在闡釋針刺作用機(jī)制中發(fā)揮重要作用。因此提示我們研究腧穴局部組織中神經(jīng)纖維、血管、淋巴管和免疫細(xì)胞在腧穴局部組織中的相互聯(lián)系的特征,可以作為從細(xì)胞水平上解釋針刺的經(jīng)絡(luò)效應(yīng)的一個關(guān)鍵突破口。大腦與皮膚之間的交流是由內(nèi)分泌系統(tǒng)中一些激素所介導(dǎo)的,每種激素均發(fā)揮自己的調(diào)節(jié)作用。其中肥大細(xì)胞不僅是各類激素作用的靶細(xì)胞,同時還可以釋放多種炎癥介質(zhì),在介導(dǎo)神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)中的聯(lián)絡(luò)橋梁中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。大腦通過“下丘腦-垂體-腎上腺(中央HAP軸)”和“交感神經(jīng)腎上腺髓質(zhì)(SAM軸)”實(shí)現(xiàn)與皮膚的交流和聯(lián)系;同時,皮膚的不同部位也可以分泌類似的激素,形成皮膚局部調(diào)控的微環(huán)境(外周HAP軸)。肥大細(xì)胞在人體中普遍存在,主要分布在血管周圍,尤其是在與血管、神經(jīng)等相接觸部位,能對附近神經(jīng)元產(chǎn)生的神經(jīng)肽作出特定反應(yīng),激活脫顆粒并且還可以誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生。在接受針灸信號之后,肥大細(xì)胞通過脫顆粒釋放炎性介質(zhì)將機(jī)械刺激轉(zhuǎn)化成生物信號,再經(jīng)過神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的整合、傳導(dǎo),使反饋調(diào)節(jié)作用于靶器官,因而達(dá)到即氣至病所的效果。針刺與艾灸的共同作用部位均為腧穴,但兩者的刺激方式是不同的,艾灸主要是通過艾絨燃燒的溫?zé)岽碳ぷ饔糜谌梭w,而針刺則以針具施以手法的機(jī)械性刺激為主。針灸既可以增加穴區(qū)局部肥大細(xì)胞的數(shù)量,引起循經(jīng)聚集效應(yīng),又可以刺激使其脫顆粒,釋放組胺、5-羥色胺,肝素等。這些介質(zhì)不僅可以增加血管的通透性,又可以引起局部水腫以及輕度的自發(fā)性炎癥反應(yīng)。一方面,這可能通過誘導(dǎo)黏附分子和趨化因子促進(jìn)肥大細(xì)胞在病灶等部位向穴位聚集;另一方面,它可以激活免疫系統(tǒng),擴(kuò)大局部針灸作用到整個身體。研究目的與意義1.通過研究不同穴區(qū)與非穴區(qū)皮膚的機(jī)械痛閾,揭示不同腧穴與非穴是否存在感覺差異。2.通過觀察腧穴相關(guān)局部組織中神經(jīng)纖維、血管和免疫細(xì)胞之間的交互聯(lián)系,揭示腧穴相關(guān)組織化學(xué)在結(jié)構(gòu)和功能上的聯(lián)系。3.通過研究針刺與艾灸對穴區(qū)肥大細(xì)胞活化狀態(tài)的影響,揭示針刺與艾灸對機(jī)體的作用的差異。研究方法痛閾檢測:根據(jù)文獻(xiàn)記載穴位區(qū)域的定位是以穴位為中心1 cm×1 cm的皮膚肌肉組織,而非穴位區(qū)域的定位則在穴位左側(cè)或右側(cè)旁開1.5 cm處1 cm×1 cm的皮膚肌肉組織組織。通過人體與大鼠相應(yīng)比列的折算,確定本次實(shí)驗(yàn)的非穴對照。分別從大鼠頭面、軀干、四肢選取代表性腧穴:非穴1(大鼠百會和天門穴連線中點(diǎn))、陽白(大鼠目正中直上,骨骼上方凹陷處)、非穴2(大鼠曲池穴旁5mm處)、外關(guān)(腕關(guān)節(jié)上3 mm,尺橈骨之間)、環(huán)跳(后肢髖關(guān)節(jié)后上緣)、太沖(后肢足背第一、二跖骨間凹陷處)。在大鼠靜息30 min后開始測試,手持測量儀的刺激針頭刺激大鼠不同腧穴穴區(qū)皮膚,逐步增加刺激力度,直至大鼠有回避反應(yīng),記錄該刺激強(qiáng)度。每兩次測試之間需間隔10 min,測量三次并記下每次的數(shù)據(jù)。針刺與艾灸的對比研究:將清潔級健康雄性Sprague Dawley大鼠24只,體質(zhì)量(220±20)g,隨機(jī)分為空白對照組、針刺組和艾灸組,每組8只。大鼠在麻醉狀態(tài)下,針刺組選用0.25 mm× 15 mm針灸針,直刺入“太沖”穴皮膚1.5 mm,以均一頻率(120次/min)小幅度連續(xù)捻轉(zhuǎn)10 min;艾灸組選用線香代替艾條在距離穴位皮膚1cm處,使施灸穴位局部皮溫保持41±0.2℃,持續(xù)施灸10 min。干預(yù)結(jié)束后將大鼠經(jīng)依次灌入0.9%氯化鈉溶液和含有4%多聚甲醛以及0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution,PB,pH 7.4)的固定液。取出穴區(qū)皮膚組織,并制作成組織切片,經(jīng)免疫熒光組織化學(xué)染色后通過共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察分析。研究結(jié)果痛閾檢測結(jié)果:穴位和非穴(陽白與非穴1、外關(guān)與非穴2)之間的痛閾并沒有明顯的差異存在(P0.05);頭面以及肢體末端穴位與非穴(陽白,非穴1,太沖)的對疼痛的耐受度明顯低于軀干及四肢近軀干部的穴區(qū)與非穴區(qū)域(外關(guān),非穴2,環(huán)跳),其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。軀干部的環(huán)跳穴對疼痛的耐受程度明顯高于其他穴區(qū)及非穴區(qū)(P0.01)。針刺與艾灸的對比研究結(jié)果:針刺和艾灸干預(yù)后大鼠“太沖”穴區(qū)皮膚組織中NPY、TH、CGRP陽性神經(jīng)纖維的含量增多以針刺的變化更為明顯,說明兩者對穴區(qū)局部組織的差異性調(diào)節(jié)體現(xiàn)在對神經(jīng)肽的調(diào)節(jié)上;針刺與艾灸均可以促進(jìn)肥大細(xì)胞的激活(P0.05)但兩者之間差異不顯著(P0.05);針刺組對激活型肥大細(xì)胞的脫顆粒比率要明顯高于空白對照組(P0.05),而艾灸組與針刺組之間沒有明顯差異(P0.05);針刺與艾灸均能促進(jìn)5-HT和HA的表達(dá)(P0.05),而兩者之間的差異不顯著(P0.05)。研究結(jié)論1.頭面及肢體遠(yuǎn)端穴位的痛閾明顯低于軀干部;穴位和非穴之間的痛閾沒有明顯差異。2.針刺和艾灸刺激均能引起表皮神經(jīng)纖維中NPY、TH、CGRP的表達(dá)增強(qiáng),進(jìn)而激活肥大細(xì)胞,通過釋放5-HT和HA產(chǎn)生級聯(lián)效應(yīng),這些神經(jīng)活性成分可能在將針灸信號放大和傳遞過程中起到了介導(dǎo)作用,并發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。3.針刺與艾灸對穴區(qū)局部組織中肥大細(xì)胞均具有激活作用并能促使其發(fā)生脫顆粒,在肥大細(xì)胞脫顆粒方面針刺強(qiáng)于艾灸。
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245
【圖文】：
圖１大鼠不同穴區(qū)與非穴區(qū)的痛閾逡逑
圖２邋Ａ－Ｃ大鼠“太沖”穴區(qū)皮下組織中ＬＹＭＥ標(biāo)記的淋巴管（綠色）、Ｐｈａ標(biāo)記的小血管逡逑樣結(jié)構(gòu)（紅色）、ＤＡＰＩ標(biāo)記的細(xì)胞核（藍(lán)色）在局部穴區(qū)皮膚組織中深淺不同層面的分布逡逑－
圖３邋Ａ大鼠“太沖”穴區(qū)皮下組織中Ｔｉｙｐｔａｓｅ標(biāo)記的激活型肥大細(xì)胞（綠色）、Ｐｈａ標(biāo)記的逡逑小血管樣結(jié)構(gòu)（紅色）的空間位置關(guān)系
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