發(fā)布時間：2020-06-21 23:08

【摘要】：目的:本課題通過體內(nèi)和體外模型實驗,探討壤篤岜總黃酮作用于鼻咽癌細胞株CNE-1的增殖、克隆、劃痕、遷移、侵襲、凋亡、周期和體內(nèi)抗腫瘤的影響;采用western blot法檢測相關(guān)蛋白的表達,初步闡明壤篤岜總黃酮作用于鼻咽癌細胞株CNE-1的作用機制;采用小鼠、大鼠灌胃給藥法觀察壤篤岜總黃酮進行長期和急性毒理性研究,評價其安全性;為提高壤篤岜總黃酮部位的利用價值和開發(fā)新藥提供理論依據(jù)。方法:1.通過MTT法、單細胞克隆實驗、細胞劃痕實驗、細胞侵襲實驗、細胞周期凋亡實驗檢測壤篤岜總黃酮(RDB)體外對人鼻咽癌細胞株CNE-1增殖能力、克隆能力、遷移能力、侵襲能力、凋亡和周期的影響,從而得出RDB對CNE-1細胞的影響。2.通過鼻咽癌裸鼠體內(nèi)模型,對RDB體內(nèi)抗鼻咽癌的療效進行觀察。3.通過western blot觀察RDB是否改變相關(guān)蛋白的表達。4.通過對RDB的急性毒性實驗和長期毒性實驗來對RDB的安全性進行評價。結(jié)果:1.通過MTT法測定,RDB作用CNE-1細胞24h、48h、72h的IC_(50)分別為63.23μg/ml、54.50μg/ml、41.20μg/ml;通過單細胞克隆實驗測定,RDB濃度為30μg/ml和60μg/ml時細胞克隆存活率分別為49.25%和22.5%;通過細胞劃痕實驗測定,48 h時30μg/ml和60μg/ml處理CNE-1細胞的愈合率分別為44.01±3.54%和37.96±2.32%;通過細胞侵襲實驗的測定,72 h時RDB濃度為30μg/ml穿過小室的CNE-1細胞只有control組的28.3%,RDB濃度為60μg/ml穿過小室的CNE-1細胞只剩control組的1.1%;通過細胞凋亡實驗測定,72 h時RDB濃度為60μg/ml作用CNE-1細胞后,其細胞凋亡率已達到55.58%。通過細胞周期的測定,經(jīng)RDB處理過的CNE-1細胞其凋亡率顯著上升,在G0/G1期中發(fā)生細胞阻滯。2.通過裸鼠體內(nèi)實驗測定,RDB對裸鼠體內(nèi)的鼻咽癌細胞株CNE-1具有顯著的抑制作用,RDB高、中、低劑量在給藥21 d后的抑瘤率分別為52.15%±14.65%、40.61%±17.51%、37.89%±12.79%。3.通過western blot測定,RDB作用鼻咽癌細胞株CNE-1后可以使胞內(nèi)的。4.通過對RDB進行的急性毒性實驗和長期毒性實驗測定,急性毒性實驗過程中無小鼠死亡,給藥結(jié)束后小鼠的肝臟病理切片也無明顯的病變;長期毒性實驗過程中大鼠長期服用RDB體重、各臟器指標(biāo)和病理切片、血清指標(biāo)中除鈉離子外均正常。結(jié)論:1.RDB可以抑制鼻咽癌細胞株CNE-1的增殖和克隆,降低鼻咽癌細胞株CNE-1的遷移和侵襲能力,使細胞的周期阻滯在G0/G1,促進鼻咽癌細胞株CNE-1發(fā)生凋亡。2.RDB可以有效抑制裸鼠體內(nèi)鼻咽癌CNE-1細胞的生長。3.經(jīng)RDB處理過的鼻咽癌CNE-1細胞會通過bcl-2家族和caspase家族、p53信號途徑,從而誘導(dǎo)鼻咽癌CNE-1細胞發(fā)生凋亡。4.通過對RDB的急性和長期毒性研究表明,RDB口服安全。
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R29
【圖文】：

圖 1.1 RDB 對 CNE-1 細胞生長的抑制率注：*，與 control 組相比，p＜0.05，**，與 control 組相比，p＜0.013.2 細胞克隆實驗結(jié)果

圖 1.2 RDB 對 CNE-1 細胞克隆的抑制作用注：*，與 control 組相比，p＜0.05，**，與 control 組相比，p＜0.013.3 細胞劃痕實驗結(jié)果為探討 RDB 對 CNE-1 細胞遷移率的影響，我們通過細胞劃痕來進行檢測。研究結(jié)果表明，RDB 濃度為 30 μg/ml 和 60 μg/ml 時對CNE-1 細胞的遷移能力都起到了一定的抑制作用，且細胞遷移率和RDB 濃度成反比。24 h 時，經(jīng)高、低濃度組處理的 CNE-1 細胞的愈合率分別為 18.38±2.80%和 22.76±2.68%，48 h 時，經(jīng)高、低濃度組處理 CNE-1 細胞的愈合率分別為 37.96±2.32%和 44.01±3.54%，與control 組相比，均有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01）。結(jié)果如表 1.3 和圖 1.3

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本文編號：2724788