【摘要】：目的:本課題通過體內(nèi)和體外模型實(shí)驗(yàn),探討壤篤岜總黃酮作用于鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1的增殖、克隆、劃痕、遷移、侵襲、凋亡、周期和體內(nèi)抗腫瘤的影響;采用western blot法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá),初步闡明壤篤岜總黃酮作用于鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1的作用機(jī)制;采用小鼠、大鼠灌胃給藥法觀察壤篤岜總黃酮進(jìn)行長(zhǎng)期和急性毒理性研究,評(píng)價(jià)其安全性;為提高壤篤岜總黃酮部位的利用價(jià)值和開發(fā)新藥提供理論依據(jù)。方法:1.通過MTT法、單細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)壤篤岜總黃酮(RDB)體外對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1增殖能力、克隆能力、遷移能力、侵襲能力、凋亡和周期的影響,從而得出RDB對(duì)CNE-1細(xì)胞的影響。2.通過鼻咽癌裸鼠體內(nèi)模型,對(duì)RDB體內(nèi)抗鼻咽癌的療效進(jìn)行觀察。3.通過western blot觀察RDB是否改變相關(guān)蛋白的表達(dá)。4.通過對(duì)RDB的急性毒性實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)來對(duì)RDB的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果:1.通過MTT法測(cè)定,RDB作用CNE-1細(xì)胞24h、48h、72h的IC_(50)分別為63.23μg/ml、54.50μg/ml、41.20μg/ml;通過單細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)測(cè)定,RDB濃度為30μg/ml和60μg/ml時(shí)細(xì)胞克隆存活率分別為49.25%和22.5%;通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定,48 h時(shí)30μg/ml和60μg/ml處理CNE-1細(xì)胞的愈合率分別為44.01±3.54%和37.96±2.32%;通過細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)的測(cè)定,72 h時(shí)RDB濃度為30μg/ml穿過小室的CNE-1細(xì)胞只有control組的28.3%,RDB濃度為60μg/ml穿過小室的CNE-1細(xì)胞只剩control組的1.1%;通過細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)測(cè)定,72 h時(shí)RDB濃度為60μg/ml作用CNE-1細(xì)胞后,其細(xì)胞凋亡率已達(dá)到55.58%。通過細(xì)胞周期的測(cè)定,經(jīng)RDB處理過的CNE-1細(xì)胞其凋亡率顯著上升,在G0/G1期中發(fā)生細(xì)胞阻滯。2.通過裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)測(cè)定,RDB對(duì)裸鼠體內(nèi)的鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1具有顯著的抑制作用,RDB高、中、低劑量在給藥21 d后的抑瘤率分別為52.15%±14.65%、40.61%±17.51%、37.89%±12.79%。3.通過western blot測(cè)定,RDB作用鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1后可以使胞內(nèi)的。4.通過對(duì)RDB進(jìn)行的急性毒性實(shí)驗(yàn)和長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)測(cè)定,急性毒性實(shí)驗(yàn)過程中無(wú)小鼠死亡,給藥結(jié)束后小鼠的肝臟病理切片也無(wú)明顯的病變;長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)過程中大鼠長(zhǎng)期服用RDB體重、各臟器指標(biāo)和病理切片、血清指標(biāo)中除鈉離子外均正常。結(jié)論:1.RDB可以抑制鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1的增殖和克隆,降低鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1的遷移和侵襲能力,使細(xì)胞的周期阻滯在G0/G1,促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1發(fā)生凋亡。2.RDB可以有效抑制裸鼠體內(nèi)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的生長(zhǎng)。3.經(jīng)RDB處理過的鼻咽癌CNE-1細(xì)胞會(huì)通過bcl-2家族和caspase家族、p53信號(hào)途徑,從而誘導(dǎo)鼻咽癌CNE-1細(xì)胞發(fā)生凋亡。4.通過對(duì)RDB的急性和長(zhǎng)期毒性研究表明,RDB口服安全。
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R29
【圖文】：

圖 1.1 RDB 對(duì) CNE-1 細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率注：*，與 control 組相比，p＜0.05，**，與 control 組相比，p＜0.013.2 細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖 1.2 RDB 對(duì) CNE-1 細(xì)胞克隆的抑制作用注：*，與 control 組相比，p＜0.05，**，與 control 組相比，p＜0.013.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果為探討 RDB 對(duì) CNE-1 細(xì)胞遷移率的影響，我們通過細(xì)胞劃痕來進(jìn)行檢測(cè)。研究結(jié)果表明，RDB 濃度為 30 μg/ml 和 60 μg/ml 時(shí)對(duì)CNE-1 細(xì)胞的遷移能力都起到了一定的抑制作用，且細(xì)胞遷移率和RDB 濃度成反比。24 h 時(shí)，經(jīng)高、低濃度組處理的 CNE-1 細(xì)胞的愈合率分別為 18.38±2.80%和 22.76±2.68%，48 h 時(shí)，經(jīng)高、低濃度組處理 CNE-1 細(xì)胞的愈合率分別為 37.96±2.32%和 44.01±3.54%，與control 組相比，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。結(jié)果如表 1.3 和圖 1.3

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本文編號(hào)：2724788