【摘要】：目的:疼痛是一種不愉快的感覺和情緒上的體驗,往往伴隨潛在的組織損傷[1]。急性疼痛對機體具有保護作用,而慢性疼痛則會對機體具有不良影響。由于慢性疼痛機制錯綜復(fù)雜,針對單一靶點的藥物往往療效較差,且目前的鎮(zhèn)痛藥物多半具有鎮(zhèn)痛不全、藥物耐受、副作用等缺陷[2]。電針已經(jīng)廣泛應(yīng)用于急性和慢性疼痛治療中,相對藥物的單一靶點,電針治療影響疼痛的多個過程,安全有效且副作用小。世界衛(wèi)生組織將運動系統(tǒng)慢性疼痛、術(shù)后疼痛、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、三叉神經(jīng)痛等多種疼痛列為針刺適應(yīng)癥[3]。雖然經(jīng)過臨床實驗證實電針鎮(zhèn)痛療效確切[4-8],其機制卻仍不明確。本實驗利用CFA誘導(dǎo)的足底慢性炎性痛大鼠模型,發(fā)現(xiàn)電針能下調(diào)模型大鼠背根神經(jīng)節(jié)中Nav 1.7的表達緩解慢性炎性痛。因此探索電針在CFA誘導(dǎo)的足底慢性炎性痛模型中的鎮(zhèn)痛機制,為炎性痛的臨床治療和電針鎮(zhèn)痛提供理論依據(jù)。方法:1.建立足底炎性痛大鼠模型。大鼠麻醉后,左后肢足底注射50μL CFA建立動物模型,對照組大鼠足底注射相同體積0.9%氯化鈉溶液。造模后檢測模型大鼠機械縮足反射閾值(PWT)和熱縮足反射潛伏期(PWL)變化,驗證大鼠模型制作是否成功。2.電針治療。造模后1d開始電針治療,電針刺激大鼠左側(cè)“環(huán)跳”穴和“足三里”穴,兩天1次,持續(xù)至造模后14天。檢測電針治療后大鼠PWT和PWL的變化,驗證電針鎮(zhèn)痛是否有效。3.大鼠抑郁狀態(tài)檢測注射CFA后14天進行蔗糖偏愛實驗和強迫游泳實驗檢測大鼠是否處于抑郁狀態(tài),電針治療是否能夠改善抑郁狀態(tài)。4.相關(guān)蛋白及分子檢測Elisa檢測造模后第14天大鼠血清皮質(zhì)酮的含量,Western blot和qRT-PCR檢測造模后第14天DRG中Navl.7及GR的mRNA和蛋白表達的變化。5.觀察GR表達的改變對大鼠疼痛行為學(xué)及Navl.7蛋白表達的影響在足底注射CFA后第7天鞘內(nèi)注射GR拮抗劑RU38486,連續(xù)給藥5天。檢測大鼠PWT、PWL及Nav1.7蛋白的變化。注射CFA后第7天鞘內(nèi)注射GR正義寡核苷酸(GR sense oligonucleotide)(以下簡稱 GR sense)或反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide)(以下簡稱GR antisense),檢測大鼠PWT、PWL的變化。6.免疫熒光技術(shù)檢測DRG中Nav1.7與GR的共標(biāo)情況。7.觀察GR表達的改變對電針鎮(zhèn)痛效果的影響注射CFA后7天,在電針治療的基礎(chǔ)上,大鼠分別鞘內(nèi)注射GR sense或GR antisense,與單純EA治療組的大鼠的PWT、PWL及Nav1.7表達情況做比較。結(jié)果:1.CFA誘導(dǎo)的足底炎性痛大鼠模型同側(cè)PWT和PWL降低與對照組大鼠相比,模型組和電針組大鼠同側(cè)的PWT和PWL在CFA注射后1 d顯著降低(P0.001),模型建立成功。至注射后14 d,模型組PWT與PWL均低于對照組(P0.001)。2.電針治療緩解大鼠炎性痛與模型組相比,注射CFA后7 d電針組大鼠PWT與PWL顯著提高(P0.001),且至術(shù)后14 d依然高于模型組(P0.001)。3.電針治療緩解大鼠抑郁情緒模型組大鼠蔗糖偏愛率較對照組顯著降低(P0.001),電針治療后明顯升高(P0.01);強迫游泳實驗中,模型組大鼠較對照組不動時間明顯增加(P0.01),電針治療后有所降低(P0.05)。4.電針治療降低大鼠DRG中Nav1.7和GR的表達,降低大鼠血清中皮質(zhì)酮的含量建模后14天,模型組大鼠DRG中Nav1.7mRNA與蛋白表達均上調(diào)(P0.01,P0.001),GR mRNA表達升高(P0.001),細(xì)胞質(zhì)中GR蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)而細(xì)胞核中GR蛋白表達升高(P0.001),模型組大鼠血清中皮質(zhì)酮含量明顯升高(P0.001),電針治療顯著降低了nav1.7與GR mRNA和蛋白表達(P0.05,P0.01,P0.001,P0.01)和大鼠血清中皮質(zhì)酮含量(P0.01)。5.鞘內(nèi)注射GR拮抗劑緩解了 CFA引起的機械痛和熱痛覺過敏,反轉(zhuǎn)了注射CFA后Nav1.7的上調(diào);鞘內(nèi)注射GR sense加劇了大鼠機械痛和熱痛覺過敏,注射GR antisense緩解了大鼠的機械痛和熱痛覺過敏。鞘內(nèi)注射GR拮抗劑RU38486后大鼠PWT與PWL升高(P0.05,P0.01),Nav1.7表達降低(P0.01)。鞘內(nèi)注射GR antisense后大鼠PWT與PWL升高(P0.001,P0.01),而注射GR sense后大鼠PWT與PWL降低(P0.05,P0.01)。6.免疫熒光結(jié)果顯示在DRG中Nav1.7與GR共標(biāo)7.鞘內(nèi)注射GR antisense減少Nav1.7蛋白表達,增強電針的鎮(zhèn)痛效果,而注射GR sense則增加Nav1.7蛋白表達,降低電針的鎮(zhèn)痛效果。造模后兩組大鼠在電針治療的基礎(chǔ)上分別鞘內(nèi)注射GR sense或GR antisense,測試PWT和PWL。結(jié)果顯示與電針組相比,電針聯(lián)合鞘內(nèi)注射GR sense的大鼠PWT和PWL顯著降低(P0.001)。電針聯(lián)合鞘內(nèi)注射GR antisense的大鼠PWT和PWL較電針組升高(P0.01)。Western blot結(jié)果顯示,相比電針組,電針聯(lián)合鞘內(nèi)注射GR sense后DRG中的Nav1.7蛋白水平增加(P0.001),電針聯(lián)合鞘內(nèi)注射GR antisense后,DRG中的Nav1.7蛋白水平與單純電針治療相比降低(P0.05)。結(jié)論:慢性炎性痛時DRG中GR激活后促進Nav1.7蛋白的表達,電針刺激通過抑制DRG中GR的轉(zhuǎn)錄活性降低Nav1.7蛋白的表達,緩解大鼠炎性痛及抑郁情緒。沉默GR可以逆轉(zhuǎn)CFA引起的Nav1.7的高表達并增強電針的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。綜上GR可能是電針參與慢性炎性痛鎮(zhèn)痛的重要靶點,本研究為更全面闡明電針鎮(zhèn)痛機制提供了理論依據(jù),為慢性疼痛的治療開辟了新的思路。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R245.97

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔣永亮;何曉芬;尹小虎;沈亞芳;方劍喬;;電針干預(yù)關(guān)節(jié)炎大鼠慢性痛的抗炎和促滑膜阿片系統(tǒng)的作用[J];中國針灸;2015年09期

2 李文迅;黃怡然;雷林丹;李娜;;電針、手針“足三里”對慢性關(guān)節(jié)炎大鼠血清炎性細(xì)胞因子含量的影響[J];針刺研究;2012年04期

3 王振宇;李淑蓮;王希文;孫忠人;;脊髓背角P物質(zhì)在電針調(diào)控炎性痛大鼠神經(jīng)-免疫網(wǎng)絡(luò)中的作用研究[J];中醫(yī)藥學(xué)報;2012年03期

4 李賽波;吳耀持;;電針對膝骨性關(guān)節(jié)炎模型大鼠IL-1和IL-1β-mRNA的影響[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報;2011年11期

5 薛奇明;黃露;李寧;;電針天樞穴對重癥急性胰腺炎大鼠血清促炎和抗炎因子的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報;2011年06期

6 王泳;馬素英;;電針對福爾馬林炎性痛大鼠脊髓中央管周圍灰質(zhì)神經(jīng)元一氧化氮合酶表達的影響[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年02期

7 張皓;王健;陳新勇;吳富東;單秋華;藍竹梅;;電針對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠鎮(zhèn)痛作用及內(nèi)啡肽影響[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年05期

8 王航;黃浩;蔡克銀;;電針夾脊穴通過磷酸化p38 MAPK信號通路對大鼠炎性痛閾的影響[J];安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年05期

9 嵇波;郭長青;金燕;鐘鼎文;陳幼楠;郭孟瑋;;針刀和電針對膝骨關(guān)節(jié)炎大鼠痛閾和中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J];中國病理生理雜志;2010年06期

10 常小榮;艾坤;劉梨;劉美榮;;電針足三里 關(guān)元對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠β-內(nèi)啡肽 ACTH的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2009年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 韓萍;脊髓IL-33及受體ST2在小鼠炎癥痛及電針鎮(zhèn)痛中的作用及機制[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 由冬冶;夾脊電針對炎性痛大鼠脊髓P物質(zhì)的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

2 王俊英;電針鎮(zhèn)痛的累積效應(yīng)與下丘腦、海馬膽堿能神經(jīng)元關(guān)系的研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2008年

3 王春雷;電針夾脊穴對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓背角內(nèi)ERK/NK-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

4 龔偉;p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在電針鎮(zhèn)痛中的作用及機理[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

本文編號：2714681