【摘要】：目的:觀察電針百會(huì)、大椎、腎俞對(duì)3月齡及9月齡SAMP8小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、海馬區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)及β-淀粉樣蛋白、Tau蛋白表達(dá)的影響,探討早期電針對(duì)AD的作用。方法:將SAMP8小鼠隨機(jī)分為模型組、3月齡電針組、9月齡電針組,以同齡正常老化SAMR1小鼠為對(duì)照組;12只/組。3月齡電針組與9月齡電針組小鼠分別于3月齡及9月齡用網(wǎng)兜固定后取百會(huì)、大椎、腎俞進(jìn)行針刺干預(yù),其中電針正負(fù)兩極分別接于大椎、腎俞(每日雙側(cè)交替接電針)。進(jìn)針后,無(wú)手法刺激,接電針儀,連續(xù)波,頻率2 Hz,1.5~2 mA(小鼠肢體微顫為宜)。留針20 min/次,1次/日,8天為1療程,療程間隔2天,共3個(gè)療程,計(jì)30天。每組小鼠在10月齡進(jìn)行水迷宮檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶能力結(jié)束后統(tǒng)一取材。電鏡觀察小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu);以免疫組織化學(xué)、Western blot檢測(cè)小鼠海馬Aβ、Tau蛋白的表達(dá),qPCR檢測(cè)小鼠海馬Aβ、Tau的mRNA表達(dá)。結(jié)果:1、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):⑴5天的定位航行試驗(yàn)中,與對(duì)照組比,模型組逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)(P0.01);與模型組比,電針組平均逃避潛伏期較短(P0.05);與9月齡電針組比,3月齡電針組平均逃避潛伏期更短(P0.05)。⑵空間探索實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,模型組原平臺(tái)象限停留的時(shí)間較短(P0.01)而且跨越平臺(tái)的次數(shù)更少(P0.01);與模型組比,電針組原平臺(tái)象限停留的時(shí)間較長(zhǎng)(P0.05)而且跨越平臺(tái)的次數(shù)更多(P0.05);與9月齡電針組比,3月齡電針組停留時(shí)間延長(zhǎng)且跨越平臺(tái)次數(shù)增多(P0.05)。2、透射電鏡:對(duì)照組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞器數(shù)目較多、結(jié)構(gòu)完整,突觸結(jié)構(gòu)清晰,突觸小泡密集;模型組神經(jīng)元突觸結(jié)構(gòu)不完整,突觸前、后膜分界不清,突觸小泡腫脹且數(shù)量較少;與模型組相比,9月齡電針組和3月齡電針組突觸數(shù)量較多,突觸結(jié)構(gòu)較清晰完整;3月齡電針組較9月齡電針組突觸結(jié)構(gòu)更清晰完整。3、免疫組織化學(xué):⑴Aβ:與對(duì)照組比較,模型組小鼠Aβ明顯升高(P0.01);與模型組比較,9月齡電針組和3月齡電針組小鼠Aβ明顯降低(P0.01),且3月齡電針組降低更明顯(P0.05)。⑵Tau:(1)本次實(shí)驗(yàn)以Tau-5檢測(cè)總tau。與對(duì)照組比較,模型組小鼠Tau-5明顯升高(P0.01);與模型組比較,9月齡電針組和3月齡電針組小鼠Tau-5明顯降低(P0.01),與9月齡電針組比較,3月齡電針組小鼠Tau-5較低(P0.01);(2)以AT8和p-Tau(T231)檢測(cè)磷酸化Tau。與3月齡電針組相比,模型組(P0.01)與9月齡電針組(P0.01)AT8和p-Tau(T231)較高;與模型組相比,對(duì)照組(P0.01)AT8和p-Tau(T231)陽(yáng)性表達(dá)顯著降低。4、Western blot:與對(duì)照組相比,模型組Tau-5、AT8表達(dá)顯著升高(P0.01)。與模型組相比,3月齡及9月齡電針組Tau-5、AT8表達(dá)降低(P0.01)。與3月齡電針組相比,9月齡電針組(P0.01)Tau-5、AT8表達(dá)較高。5、qPCR:與對(duì)照組相比,模型組海馬Aβ與Tau的mRNA顯著升高(P0.01)。與模型組相比,3月齡及9月齡電針組海馬Aβ與Tau的mRNA降低(P0.05)。與3月齡電針組相比,9月齡電針組海馬Aβ與Tau的mRNA較高(P0.05)。結(jié)論:1、AD早期(3月齡)電針干預(yù)更能有效改善SAMP8小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。2、早期電針治療AD更有利于保持突觸結(jié)構(gòu)完整,增加突觸小泡密度,從而提高神經(jīng)元突觸功能。3、早期(3月齡)電針介入AD更能有效減輕SAMP8小鼠Aβ、Tau蛋白的異常表達(dá)。
【圖文】：

臺(tái)所在象限的停留時(shí)間與游泳跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)。.3 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)：對(duì)小鼠前五天的逃避潛伏期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，對(duì)小鼠第 6 天的原平跨越平臺(tái)次數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 透射電鏡觀察.1 動(dòng)物取材麻醉：10 %的水合氯醛（350 mg/kg）對(duì)小鼠行腹腔麻醉。暴露胸腔，灌注針從心尖插入至左心室，剪開(kāi)右心耳后迅速注進(jìn)生理鹽水沖 4 %多聚甲醛注入以灌流固定組織。倒入 2.5 %戊二醛固定液的培養(yǎng)皿置于冰袋上，將小鼠斷頭分離出海馬，，把養(yǎng)皿中，迅速在培養(yǎng)皿上切取海馬 CA1 區(qū)對(duì)應(yīng)組織，每只小鼠相應(yīng)區(qū)海馬5 塊約 1 mm3的組織塊（見(jiàn)圖 1-1），把組織塊即刻浸入前固定液（3 %戊聚甲醛）中 4 ℃冰箱放置 3 d。

早期電針對(duì) SAMP8 小鼠海馬超微結(jié)構(gòu)及 β-淀粉樣蛋白、Tau 蛋白水平的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 Morris 水迷宮結(jié)果在前 5 天的定位航行試驗(yàn)中，與對(duì)照組比，模型組逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)；與模型組比，3 月齡及 9 月齡電針組平均逃避潛伏期縮短(P<0.05)；與 9 月齡電針組比，3 月齡電針組平均逃避潛伏期較短(P<0.05)。見(jiàn)圖 2-1、圖 2-2 及表 2-1。第 6 天空間探索實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，模型組原平臺(tái)象限停留的時(shí)間較短(P<0.01)而且跨越平臺(tái)的次數(shù)更少(P<0.01)；與模型組比，3 月齡及 9 月齡電針組原平臺(tái)象限停留的時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.05)而且跨越平臺(tái)的次數(shù)較多(P<0.05)；與 9 月齡電針組比，3 月齡電針組停留時(shí)間延長(zhǎng)且跨越平臺(tái)次數(shù)增加(P<0.05)。見(jiàn)圖 2-3、圖 2-4、圖 2-5 及表 2-2。
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R245

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本文編號(hào)：2704628