發(fā)布時間：2020-06-03 18:54

【摘要】：研究背景阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(Obstructive Sleep Apnea Hypopnea Syndrome,OSAHS)是一種臨床常見的睡眠障礙疾病,與多種慢性病的發(fā)生率及病死率相關,對人體造成很大的危害。OSAHS常合并多系統(tǒng)合并癥,近年來其合并癥也逐漸受到人們重視,尤其心血管疾病,此外可以進一步誘發(fā)心血管疾病的高脂血癥、動脈硬化也逐漸被關注,OSAHS與合并癥�；ハ嘤绊�,加重了患者身體及經濟負擔。目前OSAHS患者的治療方式以佩戴呼吸機聯(lián)合運動療法為主,但仍有一部分患者控制不佳,合并癥、并發(fā)癥控制較差,而中醫(yī)藥治療OSAHS對患者進行整體論治,對原發(fā)病、合并癥、并發(fā)癥均干預,取得了很好的療效,且副作用小,可有效改善患者癥狀。但目前也存在著中醫(yī)辨證分型尚不規(guī)范,OSAHS其合并癥中醫(yī)證型研究資料有限的問題。高脂血癥是由于脂質代謝或運轉異常所致的病癥,它可以通過引起全身的動脈粥樣硬化從而導致冠心病、腦梗以及周圍血管疾病等動脈硬化性疾病,危害人體健康。它常與OSAHS相伴發(fā),兩者相互影響,相互加重。常用的降脂藥存在影響肝功能、導致肌炎和肌病的風險,聯(lián)合用藥可能增加了這些不良反應的出現(xiàn),中醫(yī)藥治療降脂療效顯著,還具協(xié)同西藥的降脂作用、減少其臨床用量及毒副作用等優(yōu)點。祖國醫(yī)學認為高脂血癥屬“痰濁”、“瘀血”等范疇,而動脈硬化、OSAHS病機中亦有痰濁、瘀血,痰瘀互結證是其常見的證型。痰瘀同治法是其共同的治法,中藥丹萎片是痰瘀同治的代表方之一,具有調節(jié)血脂、改善動脈硬化、治療心腦血管疾病的作用,但其對OSAHS誘導的高脂血癥、動脈硬化是否有效尚需進一步研究。OSAHS主要病理機制是慢性間歇性缺氧(Chronic Intermittent Hypoxia,CIH),它可以引起代謝紊亂,導致血脂異常、動脈硬化,誘發(fā)心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展。現(xiàn)代研究CIH可通過HIF-1-Angptl4信號通路導致血脂異常、動脈硬化。以往研究已證實丹萎片具有抗炎、保護血管內皮、抗動脈硬化等作用,而適用于OSAHS誘導的血脂異常、動脈硬化,但其療效及作用機制尚不清楚。本研究通過對載脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)--小鼠動脈硬化(Arteriosclerosis,AS)模型進行CIH處理,觀察HIF-1-Angptl4信號通路以及該通路可能上游靶點FIH-1在CIH誘導AS過程中的作用,同時給予丹萎片干預,觀察其干預效果,并探索其干預間歇性低氧誘導動脈硬化、血脂異常的機制。第一部分:阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征及其合并癥中醫(yī)證型規(guī)律研究目的:本研究通過回顧性研究對住院OSAHS患者進行病史、合并癥及中醫(yī)證型采集,分析OSAHS和合并癥中醫(yī)證型特點、分布規(guī)律,及其與睡眠監(jiān)測結果的關系。方法:采用單中心、回顧性研究,納入中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院2014年1月至2018年12月期間呼吸科住院的,明確診斷為OSAHS的數(shù)據齊全的患者77例。按照《鼾癥中醫(yī)診療專家共識意見》,分為痰濕內阻、痰瘀互結、痰熱內蘊、氣虛痰瘀、肺脾氣虛、脾腎兩虛6個證型。建立數(shù)據庫,對患者一般情況、中醫(yī)證型分布及與睡眠監(jiān)測結果的關系、OSAHS合并癥及與中醫(yī)證型的關系等進行數(shù)據分析。結果:1 一般情況:本課題共入選OSAHS患者77例,男性40例,女性37例,年齡最大為80歲,最小為31歲,平均年齡63.82±11.44歲,平均體重指數(shù)(Body Mass Index,BMI)28.91±4.45kg/m2。其中輕度 OSAHS 患者 28 例,中度患者19例,重度患者30例。OSAHS疾病程度與BMI進行分析,發(fā)現(xiàn)重度OSAHS患者BMI明顯高于輕度及中度患者,結果顯示差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2中醫(yī)證型分析2.1中醫(yī)證型分布:痰瘀互結證患者26例,占總數(shù)的33.8%,痰濕內阻證患者19例,占總數(shù)的24.7%,痰熱內蘊證患者15例,占總數(shù)的19.5%,氣虛痰瘀證患者11例,占總數(shù)的14.3%。脾腎兩虛證患者4例,占總數(shù)5.2%,肺脾氣虛2例,占總數(shù)2.6%。2.2中醫(yī)證型兼證情況:15例患者存在兼證,占整體的19.5%。其中痰瘀互結+脾腎兩虛9例,肺脾氣虛+痰濕內阻2例,脾腎兩虛+痰濕內阻4例。單純實證包括痰瘀互結、痰濕內阻、痰熱內蘊證者共51例,虛實夾雜證者26例。2.3中醫(yī)證型與睡眠監(jiān)測結果之間的比較2.3.1各組中醫(yī)證型呼吸紊亂指數(shù)(Apnea Hyponea Index,AHI)之間的比較:痰濕內阻、痰熱內蘊兩組AHI明顯小于痰瘀互結、氣虛痰瘀、痰瘀互結脾腎兩虛三組AHI,P0.05,具有統(tǒng)計學意義。痰瘀互結、氣虛痰瘀、痰瘀互結脾腎兩虛三組AHI之間無明顯差異,P0.05,痰濕內阻、痰熱內蘊組AHI之間無明顯差異,P0.05。2.3.2各組中醫(yī)證型患者LSpO2之間的比較:痰濕內阻、痰熱內蘊兩組LSpO2明顯高于痰瘀互結、氣虛痰瘀、痰瘀互結脾腎兩虛三組LSp02,P0.05,具有統(tǒng)計學意義。痰濕內阻、痰熱內蘊兩組LSp02之間無明顯差異,P0.05,痰瘀互結、氣虛痰瘀、痰瘀互結脾腎兩虛三組LSpC2之間無明顯差異,P0.05。2.3.3各組中醫(yī)證型OSAHS嚴重程度比較:痰濕內阻、痰熱內蘊證OSAHS患者疾病程度以輕度、中度為主,而痰瘀互結、氣虛痰瘀、痰瘀互結脾腎兩虛證OSAHS患者疾病程度以中、重度為主。2.4各中醫(yī)證型合并癥情況患者OSAHS合并癥情況統(tǒng)計:高脂血癥是發(fā)病率最高的合并癥,56例,占72%,其次是高血壓52例,占67%,慢性呼吸系統(tǒng)疾病32例,占41%,糖尿病28例,占36%,冠心病27例,占35%,胃食管反流病24例,占31%,中風10例,占13%。其中無合并癥的患者7人,合并1種合并癥患者6人,合并2種合并癥患者15人,合并3種合并癥的患者有19人,合并3種以上合并癥的患者30人。中醫(yī)證型與OSAHS合并癥之間的關系:合并高脂血癥的OSAHS患者常見于痰瘀互結、痰濕內阻證;合并冠心病的OSAHS患者常見證型為痰濕內阻、痰熱內蘊證;合并高血壓的OSAHS患者常見于痰濕內阻、痰瘀互結證;合并中風的OSAHS患者常見于痰瘀互結證;合并糖尿病的OSAHS患者常見于痰瘀互結證;合并胃食管反流的OSAHS患者常見于痰熱內蘊證;合并慢性呼吸系統(tǒng)疾病的OSAHS患者常見于痰濕內阻證。結論:本組OSAHS患者的中醫(yī)證型分布為痰瘀互結證痰濕內阻證痰熱內蘊證氣虛痰瘀證脾腎兩虛證肺脾氣虛證,以實證為主,虛實夾雜次之,痰瘀互結證最為常見。不同證型的睡眠監(jiān)測結果不同,痰濕內阻、痰熱內蘊證OSAHS患者疾病程度以輕度、中度為主,而痰瘀互結、氣虛痰瘀、痰瘀互結脾腎兩虛證OSAHS患者疾病程度以中、重度為主。OSAHS常伴發(fā)多種合并癥,高脂血癥是發(fā)病率最高的合并癥,常見中醫(yī)證型為痰瘀互結,其他心腦血管疾病、代謝性疾病、消化疾病、呼吸系統(tǒng)疾病均可見。中醫(yī)證型與合并癥的發(fā)生具有一定的關系,可以指導OSAHS及其合并癥的治療。第二部分:丹萎片干預慢性間歇低氧誘導的血脂異常和動脈硬化小鼠模型的研究研究一丹萎片干預間歇性低氧誘導的血脂異常及動脈硬化小鼠模型療效評價目的:評價丹萎片治療間歇性低氧誘導的血脂異常及動脈硬化小鼠模型的有效性。方法:12周齡的雄性ApoE-/-小鼠16只,分為4組,每組4只,假手術組(Sham)不進行CIH造模。CIH+生理鹽水組進行CIH處理,同時每天生理鹽水(2ml/次)灌胃1次。CIH+Angptl4抗體組進行CIH處理,同時Angpt14免疫組化抗體(30mg/kg)每周腹腔注射。CIH+丹萎片組進行CIH處理,同時丹萎片(250mg/kg)每天灌胃1次。每組干預4周后取材,采集眶后血液,離心取血清。動物處死留取附睪脂肪墊,心臟組織標本,放入-80℃冰箱中保存。動物處死后從左心室緩慢灌流磷酸鹽緩沖液,分離主動脈弓。進行指標檢測,ELISA檢測血清脂質,試劑盒測定血清脂蛋白,脂蛋白脂酶(Lipoproteinlipase,LPL)活性檢測試劑盒檢測血清LPL活性,HE和免疫組化觀察動脈斑塊形態(tài)性質。結果:1各組ApoE-/-小鼠血清脂質和脂蛋白測定CIH組TC、TG、LDL、VLDL等與Sham組相比較,P0.01,兩組差異明顯,具有統(tǒng)計學意義,說明CIH可以導致小鼠血脂異常。Angptl4抗體組其TC、TG、LDL、VLDL與CIH組結果相比較,P0.01,兩組差異明顯,具有統(tǒng)計學意義,AngptI4抗體可以減輕CIH誘導的血脂異常,降低血脂。丹萎片組其TC、TG、LDL、VLDL與CIH組結果相比較,P0.01,兩組差異明顯,具有統(tǒng)計學意義,丹蔞片可以干預CIH誘導的血脂異常,改善血脂代謝。2各組ApoE-/-小鼠血清脂蛋白脂肪酶(LPL)活性測定CIH組LPL活性與Sham組相比較,P0.01,兩組差異明顯,具有統(tǒng)計學意義,與Sham組相比,CIH組小鼠血清中LPL的活性水平均顯著降低,說明CIH可造成LPL活性減低,阻礙血脂的清除,造成血脂的升高。Angpt14抗體組LPL活性與CIH組相比,P0.01,兩組差異明顯,具有統(tǒng)計學意義,提示Angptl4抗體組可能通過中和Angptl4,從而升高LPL活性,達到降低血脂的目的。丹萎片組其LPL活性與CIH相比,P0.01,兩組差異明顯,具有統(tǒng)計學意義,丹萎片干預后LPL活性顯著升高,丹萎片通過升高LPL活性改善血脂代謝。3動脈斑塊形態(tài)性質觀察主動脈弓HE染色后,與Sham組相比,CIH組的動脈粥樣硬化斑塊面積顯著增加,動脈壁變厚,管腔變狹窄。與CIH組相比,Angptl4組和丹萎片組的動脈粥樣硬化斑塊面積顯著降低,動脈壁厚度有一定程度的變窄,動脈粥樣硬化的病變有所緩解。與CIH組相比,Angpt14抗體組和丹萎片組的動脈粥樣硬化斑塊CD68染色面積顯著降低,染色強度減弱,動脈壁厚度有一定程度的變窄,動脈粥樣硬化的病變有所緩解。結論:間歇性低氧處理可加重ApoE-/-小鼠的動脈粥樣硬化病變,升高血脂。而通過Angptl4抗體和丹萎片的干預,小鼠的動脈粥樣硬化情況有緩解,血脂下降。本實驗驗證了丹萎片干預治療CIH誘導的動脈硬化、血脂異常的有效性,但其干預機制尚需進一步探索。研究二丹萎片干預慢性間歇低氧誘導的血脂異常和動脈硬化的機制研究目的:探索HIF-1-Angptl4通路以及其可能上游靶點FIH-1在慢性間歇低氧誘導的血脂異常和動脈硬化過程中的作用,以及丹萎片的可能干預機制。方法:取實驗一中處死的各組動物附睪脂肪墊、心臟組織標本,按照實驗一分組分為4組,進行實時熒光定量PCR檢測各組小鼠附睪脂肪墊、心臟組織中FIH-1、Angptl4、HIF-1、LPL 的 mRNA 表達量。并用 Western blot 檢測各組小鼠附睪脂肪墊、心臟組織中FIH-1、Angpt14、HIF-1、LPL的蛋白水平。結果:1 ApoE-/-小鼠的附睪脂肪墊組織qRT-PCR檢測結果與Sham組相比,CIH組的低氧誘導因子抑制因子-1(Factor inhibiting hypoxia-inducible factor-1,FIH-1)mRNA的表達水平顯著降低,Angptl4mRNA的表達水平顯著增加,低氧誘導因子-1(Hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1)mRNA 表達水平顯著增加,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義;LPL mRNA表達水平無顯著性差異,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。與CIH組相比,Angptl4抗體組的FIH-1 mRNA表達水平顯著上升,LPL mRNA表達水平顯著上升,Angpt14 mRNA表達水平顯著升高,HIF-1mRNA的表達水平均顯著降低,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義。與CIH組相比,丹蔞片干預組的FIH-1 mRNA表達水平顯著上升,LPL mRNA表達水平顯著上升,Angpt14 mRNA表達水平顯著降低,HIF-1mRNA的表達水平均顯著降低,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義。2 ApoE-/-小鼠的心臟組織qRT-PCR檢測結果與Sham組相比,CIH干預后,FIH-1mRNA表達水平顯著降低,HIF-1 mRNA表達水平顯著升高,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義。Angptl4 mRNA、LPL mRNA表達水平無顯著性差異。與CIH組相比,Angpt14抗體組和丹蔞片組的FIH-1 mRNA表達水平顯著升高,HIF-1 mRNA表達水平顯著降低,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義。Angptl4 mRNA、LPL mRNA表達水平無顯著性差異。3 ApoE-/-小鼠的附睪脂肪墊組織Western blot檢測結果與Sham組相比,CIH組的FIH-1蛋白的表達水平顯著降低,Angptl4、HIF-1蛋白的表達水平顯著增加,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義;LPL蛋白的表達水平無顯著性差異,P0.05。與CIH組相比,Angpt14體組和丹萎片組的FIH-1、LPL蛋白的表達水平顯著上升,Angptl4、HIF-1蛋白的表達水平顯著降低,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義。4 ApoE-/-小鼠的心臟組織Western blot檢測結果。與Sham組相比,CIH干預后FIH-1蛋白表達水平顯著降低,HIF-1蛋白表達水平顯著升高,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義;Angptl4、LPL蛋白表達水平無顯著性差異,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。與CIH組相比,Angpt14抗體組和丹萎片組的FIH-1蛋白表達水平顯著升高,HIF-1蛋白表達水平顯著降低,P0.01,差異有明顯的統(tǒng)計學意義;Angptl4、LPL蛋白表達水平無顯著性差異,P0.05,差異無統(tǒng)計學意義。結論:丹萎片可能通過影響附睪脂肪墊HIF-1-Angpt14信號通路及該通路可能上游靶點FIH-1治療慢性間歇低氧誘發(fā)的血脂異常和動脈硬化,為中醫(yī)痰瘀同治法干預OSAHS誘導的血脂異常和動脈硬化提供了研究參考。
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