【摘要】：1.基于數(shù)據(jù)挖掘的國(guó)醫(yī)大師劉志明辨治冠心病(胸痹心痛病)組方規(guī)律目的:以傳承整理劉志明教授治療CHD心絞痛臨證經(jīng)驗(yàn)為切入點(diǎn),對(duì)劉老治療CHD心絞痛用藥特點(diǎn)等進(jìn)行挖掘,以期更好指導(dǎo)臨床。方法:利用“中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng)(V2.5)”軟件,選擇《劉志明醫(yī)案精解》、《國(guó)醫(yī)大師劉志明臨證經(jīng)驗(yàn)集》中符合CHD心絞痛納入診斷標(biāo)準(zhǔn)病案資料。同時(shí)錄入劉老首批學(xué)術(shù)傳承人劉如秀教授于2018年12月至2019年2月于門診進(jìn)行診治的CHD心絞痛患者驗(yàn)案;根據(jù)中醫(yī)癥狀、用藥等進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘,人機(jī)結(jié)合,以期系統(tǒng)總結(jié)劉老治療CHD的組方規(guī)律。結(jié)果:(1)頻次分析表明,劉老治療CHD心絞痛常用中藥是薤白、瓜蔞、三七、茯岑、桑椹、太子參、制何首烏、炙甘草、生地黃、黃英、丹參、酸棗仁、枳殼、半夏等,以性甘溫,歸心、腎、脾、肺、肝經(jīng)的藥物為主。(2)通過(guò)用藥模式分析,發(fā)現(xiàn)劉老治療CHD心絞痛常通補(bǔ)兼施,以瓜萎、薤白通上焦心陽(yáng),以生地、桑葚、太子參、黃芪等滋腎補(bǔ)腎、養(yǎng)陰生津,用三七、丹參活血化瘀。(3)基于關(guān)聯(lián)規(guī)則分析發(fā)現(xiàn),制何首烏、茯苓→薤白,制何首烏、茯苓→桑椹,炒杏仁→桑椹,炒杏仁→三七、丹參,酸棗仁→生地黃、炙甘草,制何首烏→茯苓六個(gè)組合內(nèi)藥物和組合外藥物之間的關(guān)聯(lián)度最高,反映了劉老臨床辨證治療CHD心絞痛常用滋補(bǔ)腎陽(yáng)、宣通陽(yáng)氣的治法,:善用瓜萎、法半夏、茯苓、三七、丹參等藥物豁痰開(kāi)竅,健脾化濁,活血化瘀。(4)采用新方分析,共挖掘9個(gè)藥物核心組合,分別為:白芍-太子參-炙甘草,大棗-紅參-白附子-炙黃芪-細(xì)辛,鉤藤-牛膝-葛根-桑寄生-赤芍,山藥-山茱萸-牡丹皮-地龍,山藥-山茱英_枸杞子-瓜萎,柴胡-郁金-香附-紅花,山茱萸-川芎-地龍-車前子,白芍-黨參_西洋參-酸棗仁-太子參,麥冬-法半夏-生地黃-炒枳殼-制何首烏-太子參。(5)證候類型頻次分析表明劉老辨治CHD證候類型以腎虛血瘀,心腎陽(yáng)虛,氣滯血瘀,胸陽(yáng)不振最為常見(jiàn)。(6)藥—證—癥網(wǎng)絡(luò)分析表明:患者主要癥狀表現(xiàn)、證候類型與劉老用藥之間具有對(duì)應(yīng)關(guān)系,如胸悶、胸痛、氣短、乏力、腰膝酸軟、畏寒、苔白厚、舌紫暗、脈沉細(xì)等組成的癥狀群,對(duì)應(yīng)于腎虛血瘀證,與藥物:制何首烏、瓜萎、薤白、桑椹、半夏、太子參、三七等密切相關(guān),但由于中醫(yī)證型兼雜出現(xiàn),藥物功效非唯一,因此”藥—證—癥”之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系呈現(xiàn)出復(fù)雜的網(wǎng)狀關(guān)系。結(jié)論:數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果與中醫(yī)理論相契合。從腎論治是國(guó)醫(yī)大師劉老治療冠心病的核心學(xué)術(shù)思想。他認(rèn)為腎虛為冠心病基本病機(jī),血瘀為要素。在辨治冠心病時(shí),要著眼于腎虛與血瘀的密切關(guān)系,補(bǔ)虛瀉實(shí)、標(biāo)本同治,靈活選用滋腎活血、補(bǔ)腎活血、益氣溫陽(yáng)活血等相關(guān)中藥進(jìn)行加減化裁。2.滋腎活血方對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞和線粒體功能的影響目的:采用缺氧/復(fù)氧(H/R)條件造成H9C2細(xì)胞損傷,研究在H/R損傷中,滋腎活血方(ZSHX)對(duì)H/R心肌細(xì)胞和線粒體功能影響。方法:選擇H9C2細(xì)胞為研究對(duì)象。(1)采用激光共聚焦觀察線粒體熒光強(qiáng)度及線粒體膜電位;(2)采用Seahorse活細(xì)胞能量測(cè)定儀測(cè)量H9C2細(xì)胞的基礎(chǔ)呼吸、最大呼吸率、ATP生成量、質(zhì)子漏、呼吸控制率;(3)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率。結(jié)果:(1)不同濃度ZSHX均可增強(qiáng)缺氧復(fù)氧后線粒體熒光值(Low-dose ZSHX:220±6.16,Middle-dose ZSHX:256±6.89,High-dose ZSHX:302±6.02 vs.H/R 139±4.22,n=3,均P0.05)。提示缺氧/復(fù)氧造成心肌細(xì)胞活性線粒體數(shù)目減少,而加入不同濃度ZSHX均可增加活性線粒體數(shù)目。(2)H/R組細(xì)胞紅色熒光值與正常組相比減弱,而綠色熒光增強(qiáng)(n=3,P0.05),說(shuō)明H/R組的心肌細(xì)胞△Ψm 顯著高于對(duì)照組。中、高濃度ZSHX紅色熒光增強(qiáng),而綠色熒光減弱(n=3,P0.05),說(shuō)明中、高濃度滋腎活血方穩(wěn)定△ Ψm,保護(hù)線粒體膜結(jié)構(gòu)。(3)H/R組基礎(chǔ)呼吸、最大呼吸、呼吸儲(chǔ)備能力與正常組相比降低(基礎(chǔ)呼吸:H/R:61.18±37.56 vs.Ctrl:100.72±7.57,n=4,P0.05;最大呼吸:H/R:141.38±45.17 vs.Ctrl:243.18±37.56,n=4,P0.05;呼吸儲(chǔ)備能力:H/R:67.13±8.29 vs.Ctrl:147.17±10.29,n=4,P0.05),ATP 合成減少(H/R:38.17±17.76 vs.Ctrl:67.68±10.87,n=4,P0.05),質(zhì)子漏增加(H/R:40.93±5.18 vs.Ctrl:27.17±8.92,n=4,P0.05)。而與H/R組相比,基礎(chǔ)呼吸、ATP生成量隨ZSHX濃度增加而增加,而高濃度的ZSHX增加最大呼吸(High ZSHX:196.42±39.77 vs.H/R:141.38±45.17,n=4,P0.05)。中濃度,高濃度ZSHX使線粒體呼吸儲(chǔ)備明顯上升(Middle ZSHX:95.54±20.98;High ZSHX:107.94±17.27 vs.H/R:67.13±8.29,n=4,P0.05),質(zhì)子漏明顯下降(Middle ZSHX:30.70±11.08;High ZSHX:27.94±12.26vs.H/R:40.93±5.18,n=4,P0.05)。(4)H/R組凋亡細(xì)胞百分率(70.91±4.57)與對(duì)照組(14.52±2.37)相比增加(n=3,P0.01)。而加入不同濃度的ZSHX會(huì)使H/R細(xì)胞凋亡比例顯著下降(Low ZSHX:56.34±4.98 vs.H/R:70.91±4.57,n=3,P0.05;Middle ZSHX:33.70±4.08 vs.H/R:70.91±4.57,n=3,P0.01;High ZSHX:22.67±4.26 vs.H/R:70.91±4.57,n=3,P0.01)。3.滋腎活血方對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞mTORC1信號(hào)通路的影響目的:采用H/R條件造成H9C2細(xì)胞損傷,研究滋腎活血方對(duì)受損的H9C2細(xì)胞線粒體功能的改變,同時(shí)進(jìn)一步探討mTORC1信號(hào)通路在其中的調(diào)控作用。方法:選擇H9C2細(xì)胞為研究對(duì)象。(1)利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞內(nèi)ROS水平、心肌細(xì)胞凋亡率;(2)采用Seahorse活細(xì)胞能量測(cè)定儀測(cè)量心肌細(xì)胞基礎(chǔ)呼吸、最大呼吸率、ATP生成量、質(zhì)子漏、呼吸控制率;(3)采用Q-PCR及免疫蛋白印跡法檢測(cè)mTORC1通路相關(guān)蛋白(mTORC1、4E-BP、Raptor,P70s6k),磷酸化蛋白(p-mtor(S2448),p4E-BP1(Ser65)),脂肪酸氧化相關(guān)蛋白(CPT1A),ATP合成酶相關(guān)蛋白(ATP5D)在各組細(xì)胞中的mRNA及蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:(1)與對(duì)照組相比,H/R組細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增加(78.31±6.14vs.34.53±6.10,n=3,P0.01),凋亡比例明顯升高(78.91 ± 3.48 vs.13.83±3.57,n=3,P0.01)。滋腎活血方降低了 H/R造模后ROS合成,ROS值明顯低于H/R組(52.31±6.01 vs.78.31±6.14,n=3,P0.05),同時(shí)使凋亡比例下降(18.24±4.17 vs.78.91±3.48,n=3,P0.01)。在滋腎活血方作用下,應(yīng)用雷帕霉素(Rapa)抑制 mTOR 后,ROS 值明顯增加(66.18±4.03 vs.52.31±6.01,n=3,P0.05);凋亡比例升高(26.84±3.26vs.18.24±4.17,n=3,P0.05)。(2)ZSHX使H/R組細(xì)胞線粒體基礎(chǔ)呼吸上升、ATP合成量增加、質(zhì)子泵漏下降、呼吸儲(chǔ)備明顯上升、最大呼吸明顯上升(基礎(chǔ)呼吸:ZSHX:87.50±7.89vs.H/R:65.12±15.26,n=4,P0.05)(ATP 合成量:ZSHX:45.10±3.99 vs.H/R:17.12±9.76,n=4,P0.05);(質(zhì)子泵漏:ZSHX:42.55±5.89 vs.H/R:57.32±2.26,n=4,P0.05);(呼吸儲(chǔ)備:ZSHX:69.91±8.27vs.H/R:60.13±18.29,n=4,P0.05);(最大呼吸:ZSHX:155.51 士 18.27vs.H/R:125.13±25.59,n=4,P0.05);而加入Rapa抑制mTORCl后,該線粒體保護(hù)作用消失,并且質(zhì)子泵漏增加。(3)H/R組的mTOR、Raptor、p/mTORS2448mRNA及蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比均有下降,4E-BP1及p/4E-BPlS65蛋白表達(dá)明顯升高(n=3,P0.05);與H/R組相比,中劑量ZSHX組和高劑量ZSHX組mTOR、Raptor、p/mTORS2448蛋白及mRNA表達(dá)均升高(n=3,P0.05),而p70S6K表達(dá)未見(jiàn)變化。三組劑量ZSHX作用下,H/R造模后4E-BP1及p/4E-BPlS65mRNA及蛋白表達(dá)明顯降低(n=3,P0.05)。(4)ZSHX使H/R組的ATP5D mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào),并且CPT1A的mRNA及蛋白表達(dá)下調(diào)(n=3,P0.05)。應(yīng)用雷帕霉素抑制mTOR后,ATP5D的mRNA及蛋白表達(dá)減少,而CPT1A的mRNA及蛋白表達(dá)升高(n=3,P0.05)。結(jié)論:(1)滋腎活血方可能是通過(guò)提升缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞線粒體最大呼吸與呼吸儲(chǔ)備能力,降低質(zhì)子漏的產(chǎn)生,增加ATP,從而增強(qiáng)細(xì)胞應(yīng)對(duì)損傷的能量?jī)?chǔ)備能力,保護(hù)心肌細(xì)胞線粒體功能。(2)滋腎活血方對(duì)缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用可能是通過(guò)降低線粒體膜電位及穩(wěn)定線粒體膜結(jié)構(gòu)、減少凋亡,維持缺氧復(fù)氧后心肌細(xì)胞的心臟功能。(3)滋腎活血方可通過(guò)激活mTORC1信號(hào)通路,抑制脂肪酸氧化,進(jìn)而減少ROS生成,降低細(xì)胞凋亡,保護(hù)線粒體呼吸功能,促進(jìn)ATP合成,從而保護(hù)心肌細(xì)胞免受損傷。
【圖文】：

逑４．邋２藥物四氣五味頻次分析逡逑圖１Ａ所示，，１５０味藥物中，寒性中藥６７６次（４０．邋５５％）、平性中藥６２４次逡逑（３７．邋４３％）、溫性中藥邋３５０邋次（２０．９９％）、涼性中藥邋１７邋次（１．０１％）。逡逑圖１Ｂ所示：１５０味中藥中，辛：１７９次（７．３２％）、甘：１２８２次（５２．邋４７％）、逡逑苦：６６７邋次（２７．邋３％）、酸：２５３邋次（１０．邋３５％）、咸：２１邋次（０．８５％）、澀：４１逡逑次（１．６７％），甘味藥居多，其次為苦、酸味，咸味最少，不足１邋％。逡逑、Ａ逡逑圖１藥物四氣五味頻次。Ａ：四氣頻次；Ｂ：五味頻次逡逑４．邋３藥物歸經(jīng)分析逡逑利用軟件，統(tǒng)計(jì)納入處方中的中藥歸經(jīng)頻次與百分比（共計(jì)４３４５次），脾逡逑８７１邋次（２０．邋０４％邋）、肺邋８６１邋次（１９＿邋８１邋％邋）、肝邋７４３邋次（１７．邋１％邋）、心邋７３２邋次（１６．邋８４％邋）、逡逑腎經(jīng)６１０次（１４．０３％）藥物比較常見(jiàn)。胃經(jīng)、膽經(jīng)、膀胱經(jīng)、小腸經(jīng)、大腸經(jīng)逡逑藥物少于１邋％，如圖２所示。逡逑４２逡逑

８７１邋次（２０．邋０４％邋）、肺邋８６１邋次（１９＿邋８１邋％邋）、肝邋７４３邋次（１７．邋１％邋）、心邋７３２邋次（１６．邋８４％邋）、逡逑腎經(jīng)６１０次（１４．０３％）藥物比較常見(jiàn)。胃經(jīng)、膽經(jīng)、膀胱經(jīng)、小腸經(jīng)、大腸經(jīng)逡逑藥物少于１邋％，如圖２所示。逡逑４２逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R249;R259;R285.5

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7 章麗;溫通活血方對(duì)糖尿病下肢血管病變踝肱指數(shù)的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2013年

8 朱震;丹黃活血方對(duì)2型糖尿病血瘀證的研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

9 楊珍珍;溫通活血方治療寒凝血瘀型原發(fā)性痛經(jīng)的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2010年

10 陸洋;補(bǔ)腎益肝活血方對(duì)大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎的療效探討及對(duì)關(guān)節(jié)軟骨影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2600116