【摘要】：研究目的:通過(guò)TMT蛋白組學(xué)分析篩選出肌筋膜疼痛觸發(fā)點(diǎn)(Myofascial Trigger Points,MTr Ps)大鼠脊髓差異蛋白,并對(duì)這些蛋白做GO功能注釋及KEGG通路富集。根據(jù)GO功能注釋和KEGG通路富集結(jié)果,篩選出與MTr Ps發(fā)病機(jī)制相關(guān)的信號(hào)通路,選擇MTr Ps發(fā)病機(jī)制最相關(guān)的信號(hào)通路進(jìn)行研究。通過(guò)Unpoit查找所選擇研究的信號(hào)通路上的差異性蛋白的功能,探討它們之間如何相互作用,導(dǎo)致大鼠腓腸肌形成MTr Ps。再通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡,觀察針刺和假針刺干預(yù)后,篩選出的蛋白表達(dá)水平的變化,為針刺治療觸發(fā)點(diǎn)性疼痛的臨床有效性提供理論依據(jù)。研究對(duì)象和方法:以SD大鼠為模型,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)4個(gè)組別,分別為CG組(空白對(duì)照組)和MG組(造模組),DG組(針刺組)和NDG組(假針刺組)。CG組和MG組各選10個(gè)大鼠脊髓樣本做TMT相對(duì)定量蛋白質(zhì)組學(xué)生物信息學(xué)分析,以倍數(shù)變化大于1.2倍(上調(diào)大于1.2倍或者下調(diào)小于0.83)且P value小于0.05的標(biāo)準(zhǔn)篩選出兩組之間存在的差異性蛋白,再根據(jù)GO功能注釋及KEGG信號(hào)通路分析結(jié)果相結(jié)合,篩選出與MTr Ps發(fā)病機(jī)制相關(guān)的生物學(xué)通道。然后通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證四組大鼠脊髓樣本中,所篩選出的信號(hào)通路上的上調(diào)和或下調(diào)蛋白表達(dá)水平的變化,所獲得的數(shù)據(jù)用SPSS 20.0軟件,采用單因素方差分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析。研究結(jié)果:1 iTRAQ實(shí)驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)共鑒定SD大鼠脊髓樣本中蛋白質(zhì)5095個(gè),最終篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì),上調(diào)蛋白70個(gè),下調(diào)蛋白58個(gè),共128個(gè)。最后,根據(jù)研究目的以及GO功能注釋和KEGG通路富集結(jié)果,選擇差異性蛋白富集最顯著的一條通路進(jìn)一步研究,即ECM-受體之間的相互作用。該通路上差異性蛋白主要有血小板反應(yīng)蛋白1(thrombospondin 1,THBS-1)、膠原蛋白,VI型,α(collagen,type VI,alpha,COL6A)、整合素β3(integrin beta 3,ITGβ3)和玻璃體結(jié)合蛋白(vitronectin,VN)。2蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果THBS-1、VN、ITGβ3、COL6A四個(gè)蛋白在MG組/CG組表達(dá)水平上升,組間差異非常顯著(P0.01)。與i TRAQ實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致我們還發(fā)現(xiàn)針刺后COL6A蛋白表達(dá)水平較MTr Ps模型組顯著下降(P0.01),假針刺干預(yù)后表達(dá)上水平也下降(P0.05)。假針刺干預(yù)MTr Ps,COL6A蛋白表達(dá)水平下降沒(méi)有針刺干預(yù)后更顯著。ITGβ3蛋白的DG組/MG組和NDG組/MG組表達(dá)量都顯著下降(P0.01)。VN蛋白的DG組/MG組下降顯著(P0.05),但DG組/MG組組間沒(méi)有差異。THBS-1蛋白表達(dá)水平:DG組/MG組與NDG組/MG組組間都沒(méi)有差異,但較MG組,DG組與NDG組的該蛋白表達(dá)水平均有下降的趨勢(shì)。研究結(jié)論:1.大鼠脊髓內(nèi)THBS-1、ITGβ3、COL6A和VN這四個(gè)蛋白表達(dá)水平上調(diào),可能促進(jìn)中樞神經(jīng)元的分化以及神經(jīng)元突觸的發(fā)生和形成,尤其是興奮性突觸的增多,導(dǎo)致MTr Ps大鼠的中樞致敏。2.針刺可能通過(guò)降低MTr Ps大鼠脊髓上調(diào)的ITGβ3表達(dá)水平減輕中樞致敏。此外,準(zhǔn)確定位骨骼肌上MTr Ps的位置行針刺比針刺觸發(fā)點(diǎn)以外的骨骼肌處治療效果更顯著。
【圖文】：

表 1 大鼠分組、簡(jiǎn)稱(chēng)及數(shù)量組別 簡(jiǎn)稱(chēng) 數(shù)量（只）空白對(duì)照組 CG 20造模組 MG 20針刺組 DG 10假針刺組 NDG 103.2 研究方法3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器自制打擊器 自制打擊器主要有兩個(gè)部分組成：桿和重物，總重量為 1200g；桿長(zhǎng) 60cm，端為 1cm×1cm 的圓形接觸面，見(jiàn)圖 1。電動(dòng)跑臺(tái) DSPT-202 型多通道大鼠跑臺(tái)，中國(guó)杭州段氏制作，見(jiàn)圖 2。肌電圖儀 Z2J-MB-NCC08 型肌電圖儀，上海諾誠(chéng)醫(yī)療器械有限公司；電極：同心圓針電極。見(jiàn)圖 3。銀針 型號(hào)：0.35mm×45mm 樂(lè)灸牌，見(jiàn)圖 4。

表 1 大鼠分組、簡(jiǎn)稱(chēng)及數(shù)量組別 簡(jiǎn)稱(chēng) 數(shù)量（只）空白對(duì)照組 CG 20造模組 MG 20針刺組 DG 10假針刺組 NDG 103.2 研究方法3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器自制打擊器 自制打擊器主要有兩個(gè)部分組成：桿和重物，總重量為 1200g；桿長(zhǎng) 60cm，端為 1cm×1cm 的圓形接觸面，見(jiàn)圖 1。電動(dòng)跑臺(tái) DSPT-202 型多通道大鼠跑臺(tái)，中國(guó)杭州段氏制作，見(jiàn)圖 2。肌電圖儀 Z2J-MB-NCC08 型肌電圖儀，上海諾誠(chéng)醫(yī)療器械有限公司；電極：同心圓針電極。見(jiàn)圖 3。銀針 型號(hào)：0.35mm×45mm 樂(lè)灸牌，見(jiàn)圖 4。
【學(xué)位授予單位】：上海體育學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R245

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本文編號(hào)：2597832