【摘要】：目的:比較不同時間點電針對局灶性腦缺血大鼠血管新生相關因子內皮抑素(ES)、血小板反應蛋白-1(TSP-1)表達的影響,以血管新生為切入點,探討不同時間點電針對缺血性腦卒中的治療效果及其可能作用機制,為臨床治療缺血性腦卒中提供新的實驗依據。方法:從100只雄性SD大鼠中隨機選取27只作為假手術組,余下73只采用Zea Longa改良版右側頸外動脈線栓法建立局灶性大腦中動脈阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。最終將54只造模成功的大鼠隨機分為模型組(27只)和電針組(27只),根據不同治療時間將每組分為三個亞組,即3d、7d、14d組,每個亞組9只大鼠。假手術組和模型組大鼠不作任何治療,電針組于術后1d開始,選取“百會”“水溝”二穴,根據上述不同時間點進行連續(xù)治療,再分別于3d、7d、14d后處死取材。利用神經功能缺損體征評分于術后4h、3d、7d、14d觀察每組大鼠神經功能損傷及恢復情況;利用HE染色法觀察各組大鼠缺血區(qū)海馬組織病理學改變;利用TTC染色法檢測各組大鼠腦梗死體積;采用免疫組織化學法、蛋白質免疫印跡法(Western Blot)檢測分析各組大鼠不同時間點腦缺血區(qū)海馬組織ES和TSP-1蛋白表達情況;采用免疫組織化學法和Weidner法測定腦梗死區(qū)的微血管密度,觀察血管新生情況;采用實時熒光定量PCR法(RT-qPCR)檢測大鼠缺血區(qū)海馬組織中ES mRNA、TSP-1 mRNA的相對表達量。結果:1.神經功能缺損評分術后4h,3d,7d,14d,模型組神經功能缺損體征評分均高于假手術組(P0.01);術后4h,3d,電針組神經功能缺損評分與模型組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);術后7d,14d,電針組神經功能缺損程度低于模型組(P0.01)。電針組不同時間點比較:與4h組比較,3d組評分降低(P0.05);7d組、14d組評分顯著降低(P0.01);與3d組比較,7d組、14d組評分均顯著降低(P0.01);與7d組比較,14d組評分降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.病理組織學觀察假手術組腦組織結構完整,層次分明,神經元形態(tài)正常,排列有序,可見清晰完整細胞核;術后3d,模型組及電針組缺血側均出現不同程度的腦組織間質水腫,細胞排列紊亂,結構疏松呈網狀,部分胞核固縮等病理改變;治療7d后,電針組缺血腦組織損傷程度較模型組稍微減輕;治療14d后,電針組缺血腦組織間質水腫明顯減輕,胞核清晰,腦組織損傷程度較模型組明顯減輕。3.腦梗死體積檢測假手術組未見梗死區(qū),模型組和電針組均出現不同程度梗死區(qū)。治療3d后,與模型組比較,電針組腦梗死體積無明顯差異(P0.05);治療7d,14d后,電針組腦梗死體積小于模型組(P0.01)。電針組不同時間點比較:與3d組比較,7d組、14d組腦梗死體積均縮小(P0.01);與7d組比較,14d組腦梗死體積縮小(P0.01)。4.Western Blot結果顯示:假手術組ES和TSP-1蛋白呈少量表達。模型組ES和TSP-1蛋白在各時間點與假手術組之間均有極顯著性差異(P0.01)。治療3d后,電針組與模型組ES和TSP-1蛋白表達之間均無明顯差異(P0.05)。治療7d,14d后,電針組ES和TSP-1蛋白表達量較模型組均顯著降低(P0.01)。電針組不同時間點比較:與3d組比較,7d組、14d組ES和TSP-1蛋白表達量均顯著降低(P0.01);與7d組比較,14d組ES蛋白表達量無明顯差異(P0.05),TSP-1蛋白表達量降低(P0.05)。5.RT-qPCR結果顯示:假手術組ES mRNA和TSP-1 mRNA呈少量表達。模型組ES mRNA和TSP-1 mRNA相對表達量在3d,7d,14d較假手術組均顯著增高(P0.01)。治療3d后,電針組ES mRNA相對表達量與模型組之間無明顯差異(P0.05),TSP-1 mRNA相對表達量較模型組降低(P0.01)。治療7d,14d后,電針組ES mRNA和TSP-1 mRNA相對表達量較模型組均顯著降低(P0.01)。電針組不同時間點比較:與3d組比較,7d組ES mRNA相對表達量顯著降低(P0.01),TSP-1 mRNA相對表達量無明顯差異(P0.05),14d組ES mRNA和TSP-1 mRNA相對表達量明顯下降(P0.05或P0.01);與7d組比較,14d組ES mRNA相對表達量降低(P0.05),TSP-1 mRNA相對表達量無明顯差異(P0.05)。6.免疫組化結果顯示:假手術組ES、TSP-1陽性細胞呈少量表達,模型組ES、TSP-1陽性表達在3d,7d,14d時較假手術組均顯著增加(P0.01)。治療3d后,電針組ES陽性表達較模型組降低(P0.05),TSP-1陽性表達無明顯差異(P0.05);治療7d,14d后,電針組ES、TSP-1陽性表達較模型組均顯著降低(P0.01)。電針組不同時間點比較:與3d組比較,7d組ES、TSP-1陽性表達增加(P0.05或P0.01),14d組ES陽性表達無明顯差異(P0.05),14d組TSP-1陽性表達增加(P0.05);與7d組比較,14d組ES、TSP-1陽性表達均無明顯差異(P0.05)。7.缺血區(qū)血管新生觀察假手術組微血管密度(MVD)呈少量表達,模型組MVD在3d,7d,14d時均高于假手術組(P0.01)。治療后各時間點,電針組MVD較模型組均顯著增加(P0.01)。電針組不同時間點比較:與3d組比較,7d組、14d組MVD顯著增加(P0.01);與7d組比較,14d組MVD顯著增加(P0.01)。結論:1.電針療法能夠改善MCAO大鼠的神經功能缺損體征和腦組織病理變化,縮小腦梗死體積。2.不同時間點電針能夠下調大鼠缺血側海馬區(qū)血管新生抑制因子ES、TSP-1蛋白及mRNA表達量,這可能是電針療法促進血管新生,從而恢復腦缺血后神經功能,發(fā)揮腦保護作用的機制之一。
【圖文】：

圖 1 各組大鼠缺血區(qū)海馬區(qū)不同時間點腦組織病理觀察（10x40 倍）Fig.1 Pathological observation of cerebral tissue at different time points inhippocampal area of ischemic region of rats in each group (10x40)各組大鼠不同時間點神經功能缺損體征評分比較果如表 1、圖 2 所示，假手術組大鼠術后肢體活動正常，評分均為 0 分。和電針組大鼠術后均出現不同程度的神經功能缺損體征，活動受限。術后d、7d、14d，模型組神經功能缺損體征評分均高于假手術組，差異具有統(tǒng)義（P<0.01）；術后 4h、3d，電針組神經功能缺損評分與模型組比較，統(tǒng)計學意義（P>0.05）；術后 7d、14d，電針組神經功能缺損程度明顯低組，有極顯著性差異（P<0.01）。電針組不同時間點比較：與 4h 組比較，評分無明顯差異（P>0.05），7d 組、14d 組評分顯著降低，，有極顯著性差

ischemia rats in each group (n=9,x ±s)注：與假手術組比較，△P<0.05，△ △P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；電針組之間比較：與 4h 組比較，#P<0.05，##P<0.01；與 3d 組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與 7d 組比較，※P<0.05，※※P<0.01�！鱌<0.05 and△ △P<0.01 vs sham operation group,*P<0.05 and**P<0.01 vs model group,comparison between EAgroup:#P<0.05 and##P<0.01 vs 4h group,▲P<0.05 and▲▲P<0.01vs 3d group,※P<0.05 and※※P<0.01 vs 7d group.組別 4h 3d 7d 14d假手術組 0 0 0 0模型組 2.67±0.50△ △2.44±0.53△ △2.22±0.44△ △2.00±0.50△ △電針組 2.56±0.53 2.11±0.60 1.22±0.67**##▲▲0.89±0.33**## ▲ ▲※
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R245

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本文編號：2594292