【摘要】：目的:比較不同時(shí)間點(diǎn)電針對(duì)局灶性腦缺血大鼠血管新生相關(guān)因子內(nèi)皮抑素(ES)、血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)表達(dá)的影響,以血管新生為切入點(diǎn),探討不同時(shí)間點(diǎn)電針對(duì)缺血性腦卒中的治療效果及其可能作用機(jī)制,為臨床治療缺血性腦卒中提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:從100只雄性SD大鼠中隨機(jī)選取27只作為假手術(shù)組,余下73只采用Zea Longa改良版右側(cè)頸外動(dòng)脈線栓法建立局灶性大腦中動(dòng)脈阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。最終將54只造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組(27只)和電針組(27只),根據(jù)不同治療時(shí)間將每組分為三個(gè)亞組,即3d、7d、14d組,每個(gè)亞組9只大鼠。假手術(shù)組和模型組大鼠不作任何治療,電針組于術(shù)后1d開(kāi)始,選取“百會(huì)”“水溝”二穴,根據(jù)上述不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行連續(xù)治療,再分別于3d、7d、14d后處死取材。利用神經(jīng)功能缺損體征評(píng)分于術(shù)后4h、3d、7d、14d觀察每組大鼠神經(jīng)功能損傷及恢復(fù)情況;利用HE染色法觀察各組大鼠缺血區(qū)海馬組織病理學(xué)改變;利用TTC染色法檢測(cè)各組大鼠腦梗死體積;采用免疫組織化學(xué)法、蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)分析各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦缺血區(qū)海馬組織ES和TSP-1蛋白表達(dá)情況;采用免疫組織化學(xué)法和Weidner法測(cè)定腦梗死區(qū)的微血管密度,觀察血管新生情況;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-qPCR)檢測(cè)大鼠缺血區(qū)海馬組織中ES mRNA、TSP-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:1.神經(jīng)功能缺損評(píng)分術(shù)后4h,3d,7d,14d,模型組神經(jīng)功能缺損體征評(píng)分均高于假手術(shù)組(P0.01);術(shù)后4h,3d,電針組神經(jīng)功能缺損評(píng)分與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);術(shù)后7d,14d,電針組神經(jīng)功能缺損程度低于模型組(P0.01)。電針組不同時(shí)間點(diǎn)比較:與4h組比較,3d組評(píng)分降低(P0.05);7d組、14d組評(píng)分顯著降低(P0.01);與3d組比較,7d組、14d組評(píng)分均顯著降低(P0.01);與7d組比較,14d組評(píng)分降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.病理組織學(xué)觀察假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)完整,層次分明,神經(jīng)元形態(tài)正常,排列有序,可見(jiàn)清晰完整細(xì)胞核;術(shù)后3d,模型組及電針組缺血側(cè)均出現(xiàn)不同程度的腦組織間質(zhì)水腫,細(xì)胞排列紊亂,結(jié)構(gòu)疏松呈網(wǎng)狀,部分胞核固縮等病理改變;治療7d后,電針組缺血腦組織損傷程度較模型組稍微減輕;治療14d后,電針組缺血腦組織間質(zhì)水腫明顯減輕,胞核清晰,腦組織損傷程度較模型組明顯減輕。3.腦梗死體積檢測(cè)假手術(shù)組未見(jiàn)梗死區(qū),模型組和電針組均出現(xiàn)不同程度梗死區(qū)。治療3d后,與模型組比較,電針組腦梗死體積無(wú)明顯差異(P0.05);治療7d,14d后,電針組腦梗死體積小于模型組(P0.01)。電針組不同時(shí)間點(diǎn)比較:與3d組比較,7d組、14d組腦梗死體積均縮小(P0.01);與7d組比較,14d組腦梗死體積縮小(P0.01)。4.Western Blot結(jié)果顯示:假手術(shù)組ES和TSP-1蛋白呈少量表達(dá)。模型組ES和TSP-1蛋白在各時(shí)間點(diǎn)與假手術(shù)組之間均有極顯著性差異(P0.01)。治療3d后,電針組與模型組ES和TSP-1蛋白表達(dá)之間均無(wú)明顯差異(P0.05)。治療7d,14d后,電針組ES和TSP-1蛋白表達(dá)量較模型組均顯著降低(P0.01)。電針組不同時(shí)間點(diǎn)比較:與3d組比較,7d組、14d組ES和TSP-1蛋白表達(dá)量均顯著降低(P0.01);與7d組比較,14d組ES蛋白表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05),TSP-1蛋白表達(dá)量降低(P0.05)。5.RT-qPCR結(jié)果顯示:假手術(shù)組ES mRNA和TSP-1 mRNA呈少量表達(dá)。模型組ES mRNA和TSP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量在3d,7d,14d較假手術(shù)組均顯著增高(P0.01)。治療3d后,電針組ES mRNA相對(duì)表達(dá)量與模型組之間無(wú)明顯差異(P0.05),TSP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量較模型組降低(P0.01)。治療7d,14d后,電針組ES mRNA和TSP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量較模型組均顯著降低(P0.01)。電針組不同時(shí)間點(diǎn)比較:與3d組比較,7d組ES mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.01),TSP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05),14d組ES mRNA和TSP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯下降(P0.05或P0.01);與7d組比較,14d組ES mRNA相對(duì)表達(dá)量降低(P0.05),TSP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05)。6.免疫組化結(jié)果顯示:假手術(shù)組ES、TSP-1陽(yáng)性細(xì)胞呈少量表達(dá),模型組ES、TSP-1陽(yáng)性表達(dá)在3d,7d,14d時(shí)較假手術(shù)組均顯著增加(P0.01)。治療3d后,電針組ES陽(yáng)性表達(dá)較模型組降低(P0.05),TSP-1陽(yáng)性表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05);治療7d,14d后,電針組ES、TSP-1陽(yáng)性表達(dá)較模型組均顯著降低(P0.01)。電針組不同時(shí)間點(diǎn)比較:與3d組比較,7d組ES、TSP-1陽(yáng)性表達(dá)增加(P0.05或P0.01),14d組ES陽(yáng)性表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05),14d組TSP-1陽(yáng)性表達(dá)增加(P0.05);與7d組比較,14d組ES、TSP-1陽(yáng)性表達(dá)均無(wú)明顯差異(P0.05)。7.缺血區(qū)血管新生觀察假手術(shù)組微血管密度(MVD)呈少量表達(dá),模型組MVD在3d,7d,14d時(shí)均高于假手術(shù)組(P0.01)。治療后各時(shí)間點(diǎn),電針組MVD較模型組均顯著增加(P0.01)。電針組不同時(shí)間點(diǎn)比較:與3d組比較,7d組、14d組MVD顯著增加(P0.01);與7d組比較,14d組MVD顯著增加(P0.01)。結(jié)論:1.電針療法能夠改善MCAO大鼠的神經(jīng)功能缺損體征和腦組織病理變化,縮小腦梗死體積。2.不同時(shí)間點(diǎn)電針能夠下調(diào)大鼠缺血側(cè)海馬區(qū)血管新生抑制因子ES、TSP-1蛋白及mRNA表達(dá)量,這可能是電針療法促進(jìn)血管新生,從而恢復(fù)腦缺血后神經(jīng)功能,發(fā)揮腦保護(hù)作用的機(jī)制之一。
【圖文】：

圖 1 各組大鼠缺血區(qū)海馬區(qū)不同時(shí)間點(diǎn)腦組織病理觀察（10x40 倍）Fig.1 Pathological observation of cerebral tissue at different time points inhippocampal area of ischemic region of rats in each group (10x40)各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能缺損體征評(píng)分比較果如表 1、圖 2 所示，假手術(shù)組大鼠術(shù)后肢體活動(dòng)正常，評(píng)分均為 0 分。和電針組大鼠術(shù)后均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損體征，活動(dòng)受限。術(shù)后d、7d、14d，模型組神經(jīng)功能缺損體征評(píng)分均高于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)義（P<0.01）；術(shù)后 4h、3d，電針組神經(jīng)功能缺損評(píng)分與模型組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；術(shù)后 7d、14d，電針組神經(jīng)功能缺損程度明顯低組，有極顯著性差異（P<0.01）。電針組不同時(shí)間點(diǎn)比較：與 4h 組比較，評(píng)分無(wú)明顯差異（P>0.05），7d 組、14d 組評(píng)分顯著降低，，有極顯著性差

ischemia rats in each group (n=9,x ±s)注：與假手術(shù)組比較，△P<0.05，△ △P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；電針組之間比較：與 4h 組比較，#P<0.05，##P<0.01；與 3d 組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與 7d 組比較，※P<0.05，※※P<0.01�！鱌<0.05 and△ △P<0.01 vs sham operation group,*P<0.05 and**P<0.01 vs model group,comparison between EAgroup:#P<0.05 and##P<0.01 vs 4h group,▲P<0.05 and▲▲P<0.01vs 3d group,※P<0.05 and※※P<0.01 vs 7d group.組別 4h 3d 7d 14d假手術(shù)組 0 0 0 0模型組 2.67±0.50△ △2.44±0.53△ △2.22±0.44△ △2.00±0.50△ △電針組 2.56±0.53 2.11±0.60 1.22±0.67**##▲▲0.89±0.33**## ▲ ▲※
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R245

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本文編號(hào)：2594292