【摘要】：目的:對發(fā)酵蟲草菌粉治療慢性阻塞性肺疾病的臨床療效進(jìn)行系統(tǒng)評價(jià);采用香煙煙霧熏染聯(lián)合氣管內(nèi)滴注脂多糖建立COPD大鼠模型,比較不同工藝發(fā)酵蟲草菌粉對COPD大鼠的作用,從中篩選出效果較佳的工藝,并進(jìn)一步探討發(fā)酵蟲草菌粉對COPD大鼠的作用機(jī)制。方法:1.計(jì)算機(jī)檢索CNKI、VIP、WanFang、CBM、PubMed、EBSCO和The Cochrane Library數(shù)據(jù)庫中發(fā)酵蟲草菌粉(Cs-4)治療COPD的臨床隨機(jī)對照試驗(yàn),檢索時(shí)間均從建庫至2019年2月12日。按照Cochrane系統(tǒng)評價(jià)方法篩選文獻(xiàn)、提取資料并評價(jià)質(zhì)量后采用RevMan5.3軟件進(jìn)行Meta分析。2.采用香煙煙霧熏染聯(lián)合氣管內(nèi)滴注脂多糖建立COPD大鼠模型,分批給予六種不同工藝的發(fā)酵蟲草菌粉高劑量(1.2g·kg~(-1))和低劑量(0.3g·kg~(-1)),使用WPB PLT-UNR-RT-2型小動物肺功能檢測系統(tǒng)檢測大鼠肺功能,通過HE染色及AB-PAS染色檢測大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變。3.采用香煙煙霧熏染聯(lián)合氣管內(nèi)滴注脂多糖建立COPD大鼠模型,給予篩選出的發(fā)酵蟲草菌粉A、F低(0.3g·kg~(-1))、中(0.6g·kg~(-1))、高劑量(1.2g·kg~(-1)),試劑盒法檢測COPD大鼠血清IL-8、肺組織勻漿TNF-α、IL-6、IL-4、IFN-γ,血清SOD、MDA、CAT及支氣管肺泡灌洗液SOD、CAT含量;通過HE染色及AB-PAS染色檢測COPD大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變。4.提取肺組織蛋白,采用Nano-LC-LTQ-Orbitrap技術(shù)分析蛋白樣品,使用Protein Discovery軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定,SIEVE軟件進(jìn)行相對定量定性分析,用Uniprot數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)查找蛋白相關(guān)信息。結(jié)果:1.最終納入21項(xiàng)隨機(jī)對照試驗(yàn),共1772例患者。發(fā)酵蟲草菌粉(Cs-4)制劑能提高穩(wěn)定期COPD患者總有效率[RR=1.27,95%CI(1.19,1.35),P0.00001],降低血清TNF-α含量[MD=-10.86,95%CI(-15.15,-6.56),P0.00001],改善血清SOD含量[MD=231.95,95%CI(52.92,410.97),P=0.01],改善FEV_1[MD=0.25,95%CI(0.08,0.42),P=0.004],改善FEV_1%[MD=9.17,95%CI(5.01,13.32),P0.0001],降低SGRQ評分[MD=-6.02,95%CI(-8.97,-3.07),P0.0001],提高血清IgA水平[MD=0.49,95%CI(0.40,0.58),P0.00001],提高外周血Th17/Treg[MD=0.12,95%CI(0.05,0.18),P=0.0002],提高動脈血PaO_2[MD=3.54,95%CI(0.70,6.39),P=0.01];但在改善TGF-β1、FVC、FEV_1/FVC、PaCO_2、6MWT方面試驗(yàn)組與對照組無差異。發(fā)酵蟲草菌粉(Cs-4)制劑能改善急性加重期患者FVC[MD=0.56,95%CI(0.41,0.71),P0.00001],在改善FEV_1方面試驗(yàn)組與對照組無差異。2.COPD模型組大鼠PEF、EF50、Cdyn明顯降低(P0.01,P0.05),LR升高(P0.05)。菌粉F高劑量能降低LR水平(P0.05);各菌粉高劑量有不同程度升高PEF、EF50值的趨勢,菌粉A、D、E、F高劑量能夠升高Cdyn,菌粉B、C、D、E高劑量有降低LR的趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。菌粉A、D、E、F低劑量能不同程度升高PEF,菌粉D、E、F低劑量能不同程度升高EF50,各低劑量菌粉均能升高Cdyn,菌粉A、C、D、E、F低劑量能不同程度降低LR值,但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明除菌粉F高劑量能改善COPD大鼠LR值外,其余不同工藝菌粉高、低劑量對COPD大鼠肺功能指標(biāo)的改善作用不明顯。正常組大鼠支氣管黏膜纖毛柱狀上皮細(xì)胞排列整齊,未見杯狀細(xì)胞,小支氣管管壁及周圍較少炎癥細(xì)胞浸潤,肺泡結(jié)構(gòu)完整。COPD模型組大鼠支氣管黏膜上皮壞死、脫落、紊亂,黏膜皺襞增多高聳,突入管腔,管腔變小、狹窄,腔內(nèi)黏液分泌,小支氣管管壁及周圍有明顯炎癥細(xì)胞浸潤,平滑肌增生肥厚,部分肺泡破裂,肺泡腔擴(kuò)大,相互融合,出現(xiàn)肺大泡,符合COPD的特征性病理改變。陽性組大鼠支氣管黏膜上皮無脫落紊亂,小支氣管管壁及周圍極少炎癥細(xì)胞,管腔無變小狹窄,腔內(nèi)無黏液分泌,肺泡腔有輕度融合擴(kuò)大現(xiàn)象。不同工藝菌粉給藥組大鼠支氣管黏膜上皮有脫落紊亂改變,黏膜皺襞高聳,管腔變小狹窄,管壁及周圍有炎癥細(xì)胞浸潤,肺泡腔有不同程度的擴(kuò)大融合改變,與模型組比較相對較輕。結(jié)合HE染色評分,COPD模型組病理切片評分顯著高于正常組(P0.01),各工藝菌粉高劑量組大鼠HE染色評分降低,但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而菌粉A、F低劑量組HE染色評分顯著降低(P0.01)。正常組大鼠小支氣管管腔糖原分泌極少,COPD模型組大鼠分泌糖原顯著增多(P0.01),菌粉B、D、E、F高劑量組大鼠糖原分泌顯著降低(P0.01,P0.05),菌粉A、D、E、F低劑量組大鼠糖原分泌顯著降低(P0.01,P0.05)。3.COPD模型組大鼠血清IL-8及肺組織勻漿中TNF-α和IL-6水平均明顯高于正常組(P0.01),與模型組相比,菌粉F低、中、高劑量組大鼠血清IL-8、肺組織勻漿IL-6水平明顯降低(P0.01,P0.05),菌粉F低劑量組大鼠肺組織勻漿TNF-α水平明顯降低(P0.05),菌粉A僅高劑量組大鼠肺組織勻漿中IL-6水平降低(P0.01)。COPD模型組大鼠肺組織勻漿中IFN-γ低于正常組(P0.05),與模型組相比,發(fā)酵蟲草菌粉A低、中劑量組IFN-γ水平升高(P0.01,P0.05);COPD模型組大鼠肺組織勻漿中IL-4及IL-4/IFN-γ水平高于正常組(P0.01,P0.05),與模型組相比,發(fā)酵蟲草菌粉F低、中劑量組IL-4水平降低(P0.05),發(fā)酵蟲草菌粉A、F各劑量組IL-4/IFN-γ均降低(P0.01,P0.05)。COPD模型組大鼠血清中MDA含量高于正常組(P0.05),與模型組相比,菌粉A低劑量組和菌粉F低、中劑量組MDA含量均降低(P0.01,P0.05);COPD模型組大鼠血清及支氣管肺泡灌洗液中SOD、CAT含量均低于正常組(P0.01,P0.05),與模型組相比,菌粉F中劑量組血清及支氣管肺泡灌洗液中SOD、CAT含量顯著升高(P0.01,P0.05),菌粉A高劑量組大鼠支氣管肺泡灌洗液中SOD含量顯著升高(P0.01),菌粉A中、高劑量組血清中CAT含量顯著升高(P0.01)。陽性組大鼠管腔平滑肌輕度增生,肺泡融合不明顯;發(fā)酵蟲草菌粉A中、高劑量組,發(fā)酵蟲草菌粉F低、中劑量組大鼠管腔黏液分泌、管腔狹窄及支氣管黏膜損傷較模型組改善明顯,發(fā)酵蟲草菌粉A低劑量組,發(fā)酵蟲草菌粉F高劑量組支氣管損傷較模型組改善不明顯。菌粉A中、高劑量組和F低、中劑量組大鼠HE染色評分顯著降低(P0.01,P0.05),菌粉A中劑量組及F低劑量組大鼠糖原分泌降低(P0.01,P0.05)。4.蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果顯示,發(fā)酵蟲草菌粉組與模型組相比,差異蛋白主要涉及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞骨架蛋白相關(guān)的氣道重塑,損傷凋亡,免疫炎癥,生物氧化,能量代謝,糖代謝,脂代謝等相關(guān)蛋白。結(jié)論:1.發(fā)酵蟲草菌粉(Cs-4)對COPD患者有治療作用,尤其能提高穩(wěn)定期COPD患者治療總有效率,降低炎癥因子TNF-α水平,提高抗氧化酶SOD活性,改善肺功能及免疫功能相關(guān)指標(biāo)。受納入文獻(xiàn)質(zhì)量和數(shù)量所限,仍需要大樣本、高質(zhì)量的臨床研究加以證實(shí)。2.六種不同工藝發(fā)酵蟲草菌粉對COPD大鼠的肺功能改善不明顯,但是能不同程度降低COPD大鼠肺組織病理損傷程度及黏液高分泌狀態(tài),菌粉A和F作用較好。3.發(fā)酵蟲草菌粉A、F能從降低COPD大鼠肺組織病理肺損傷程度,黏液高分泌狀態(tài),降低COPD大鼠體內(nèi)促炎因子的水平,調(diào)節(jié)Th2/Th1的失衡,降低氧化損傷的程度來發(fā)揮對COPD大鼠的防治作用,并且其中發(fā)酵蟲草菌粉F的作用更為突出。4.S100 A11鈣結(jié)合蛋白、β-連環(huán)蛋白、膠原蛋白IV、組織蛋白酶B、組織蛋白酶D等蛋白可能是發(fā)酵蟲草菌粉防治COPD的作用靶點(diǎn)。
【圖文】：

采用 Cochrane 手冊 5.1 版偏倚風(fēng)險(xiǎn)評估工具中的風(fēng)險(xiǎn)，包含隨機(jī)分配方案，分配方案的隱藏，對患者價(jià)者盲法的實(shí)施，結(jié)果數(shù)據(jù)的完整性，有無選擇性報(bào) 使用 Rev Man 5.3 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。非連續(xù)變度（RR）和 95%可信區(qū)間（CI），連續(xù)變量的效應(yīng)指5%CI。若 P≥0.1，I2≤50%，說明各研究間無異質(zhì)性若 P＜0.1，I2＞50%，說明各研究間存在異質(zhì)性，尋找或敏感性分析；若未能找出異質(zhì)性來源，采用隨機(jī)效 初步檢索共獲得 504 篇原始文獻(xiàn)，經(jīng)過進(jìn)一步篩1772 例患者。文獻(xiàn)檢索流程如圖 1 所示。

圖 2 試驗(yàn)組與對照組總有效率的森林圖Figure 2 The forest plot of total effective rate in the experimental groupand the control group10 項(xiàng)研究[26,27,29,31,32,34,35,38,41,44]報(bào)告了穩(wěn)定期總有效率，見圖 2，，各研究間無統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（P=0.91，I2=0%），采用固定效應(yīng)模型分析，提示試驗(yàn)組總有效率優(yōu)于對照組[RR=1.27，95%CI（1.19，1.35），P<0.00001]。另有 1 項(xiàng)研究[37]報(bào)告了急性加重期總有效率，結(jié)果表明試驗(yàn)組總有效率優(yōu)于對照組[RR=1.17，95%CI（1.01，1.35），P=0.04]。2.3.2 血清 TNF-α 含量圖 3 試驗(yàn)組與對照組血清 TNF-α 含量的森林圖Figure 3 The forest plot of serum TNF-α content in the experimental group
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R259

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本文編號：2591471