本文選題：逍遙散 + 代謝組學(xué)��； 參考：《山西大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：選題依據(jù):抑郁癥是一種病因非常復(fù)雜的精神類疾病,嚴(yán)重者可以導(dǎo)致自殺,給人們的生活以及工作造成了嚴(yán)重的影響。目前臨床上治療抑郁癥主要以西藥為主,但副作用較大,價格比較貴,療效也不甚理想。逍遙散是抗抑郁最常用的經(jīng)典復(fù)方之一,但屬于中藥復(fù)方,成分非常復(fù)雜,作用機(jī)理至今仍不明確,客觀的整體療效評價體系也比較缺乏。代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的一個重要分支,能夠?qū)崟r反映出機(jī)體在疾病或藥物刺激時的整體狀態(tài),在中藥復(fù)方療效評價以及作用機(jī)制的研究中優(yōu)勢非常明顯。本課題組前期采用1HNMR、GC-MS和LC-MS代謝組學(xué)技術(shù)對抑郁模型(CUMS)大鼠經(jīng)灌胃逍遙散28天前后的血液和尿液進(jìn)行了研究,取得了一定進(jìn)展。但是臨床上抑郁癥很復(fù)雜,人與動物存在較大差異。因此,本課題組在動物實驗的基礎(chǔ)上從中西醫(yī)兩個角度同時對逍遙散的臨床療效進(jìn)行評價,并對所有受試者的尿液和血漿進(jìn)行了1H NMR代謝組學(xué)分析,為逍遙散的抗抑郁療效評價及作用機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。然而,樣本與分析方法不同對代謝組學(xué)的貢獻(xiàn)也不同,關(guān)于抑郁癥患者血漿的GC-MS和LC-MS代謝組學(xué)分析尚未進(jìn)行。目的:尋找臨床血漿樣本中與逍遙散抗抑郁療效相關(guān)的差異代謝物及其代謝通路,探討逍遙散的抗抑郁作用機(jī)制;篩選出具有臨床診斷價值的潛在生物標(biāo)志物,為逍遙散抗抑郁臨床療效評價體系的建立奠定基礎(chǔ)。方法:本研究以健康人的血漿為對照,對經(jīng)逍遙散治療前后的抑郁癥患者血漿樣本進(jìn)行GC-MS和LC-MS測定。將采集到的數(shù)據(jù)集分別采用XCMS軟件包(http://metlin.scripps.edu/download/)和 SIEVE 軟件包(Thermo-Fisher 公司,USA)對譜圖進(jìn)行濾噪、峰對齊、峰提取等前處理后轉(zhuǎn)化成包含保留時間(retention time)、精確質(zhì)荷比(m/z)以及峰面積(peak area)的數(shù)據(jù)矩陣,歸一化處理后,導(dǎo)入軟件SIMCA-P 13.0中進(jìn)行多元統(tǒng)計分析,根據(jù)相應(yīng)的S-plot及其VIP值并結(jié)合t檢驗結(jié)果,尋找與逍遙散抗抑郁療效相關(guān)的差異代謝物并根據(jù)KEGG數(shù)據(jù)庫以及相關(guān)文獻(xiàn)挖掘其生物意義,然后綜合實驗室前期相關(guān)動物實驗以及臨床1HNMR代謝組學(xué)研究結(jié)果,找出與逍遙散抗抑郁療效相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物及相關(guān)代謝通路,探討抑郁癥抗抑郁作用機(jī)制。最后對所得到的與逍遙散抗抑郁療效相關(guān)的差異代謝物進(jìn)行ROC曲線分析,以評價其臨床診斷價值。結(jié)果:1.建立了基于GC-MS代謝組學(xué)的臨床血漿分析方法,并對所有受試者血漿進(jìn)行測定分析。結(jié)果顯示,與健康對照組相比,抑郁癥患者血漿中草酸(Oxalic acid)和硬脂酸(Stearic acid)水平顯著升高,而纈氨酸(Valine)和尿素(Urea)水平顯著下降,經(jīng)過逍遙散治療后,抑郁癥患者血漿中這四個代謝物水平出現(xiàn)明顯回調(diào),并處于正常水平,涉及纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的生物合成(Valine,leucine and isoleucine biosynthesis)、乙醛酸和二羧酸鹽代謝(Glyoxylate and dicarboxylate metabolism)、精氨酸和脯氨酸代謝(Arginine and proline metabolism)、脂肪酸的生物合成(Fatty acid biosynthesis)等代謝通路的調(diào)節(jié),表明逍遙散的抗抑郁作用機(jī)制與這四條代謝通路的調(diào)節(jié)有關(guān)。根據(jù)ROC曲線分析結(jié)果顯示,草酸和硬脂酸的曲線下面積大于0.7,具有臨床診斷價值,這兩種差異代謝物結(jié)合后訓(xùn)練集和預(yù)測集中的ROC曲線下面積分別為0.889和0.893,為逍遙散抗抑郁臨床療效評價體系的建立奠定基礎(chǔ)。2.建立了基于LC-MS代謝組學(xué)的臨床血漿分析方法,并對所有受試者的血漿進(jìn)行測定分析。結(jié)果在抑郁癥患者血漿中發(fā)現(xiàn)20種與逍遙散抗抑郁療效相關(guān)的差異代謝物,包括溶血性甘油磷脂酰膽堿(LPC 10:3、LPC 16:1、LPC 21:4、LPC 19:0、LPC 18:0)、�；鈮A類物質(zhì)(Carnitine C14:2和Carnitine C10:4)、脂肪酸類(4-羰基2,3烯基己二酸(4-oxohex-2-enedioic acid)、環(huán)己烷十一酸(Cyclohexaneundecanoic acid)和十七碳二烯酸(Heptadecadienoic acid))、鞘磷脂(Phytosphingosine)、神經(jīng)酰胺(Stearic amide和Palmitic amide)、肌酐(Creatinine)、乙酰磷酸(Acetylphosphate)以及硫胱醚(L-cystathionine)等,涉及甘油磷脂代謝(Glycerophospholipid metabolism)、鞘脂代謝(Sphingolipid metabolism)、脂肪酸代謝(Fatty acid metabolism)以及半胱氨酸和蛋氨酸代謝(Cysteine and methionine metabolism)、�；撬岷蛠喤；撬岽x(Taurine and hypotaurine metabolism)等代謝通路的調(diào)節(jié),表明逍遙散的抗抑郁作用與這些代謝通路的調(diào)節(jié)有關(guān)。ROC曲線分析結(jié)果顯示,4-羰基2,3烯基己二酸(4-oxohex-2-enedioic acid)、肌酐(Creatinine)、硫胱醚(L-cystathionine)和乙酰磷酸(Acetylphosphate)的ROC曲線下面積大于0.7,具有臨床診斷價值。這四種代謝物結(jié)合后這兩種差異代謝物結(jié)合后訓(xùn)練集和預(yù)測集中的ROC曲線下面積為0.879和0.833,為逍遙散抗抑郁臨床療效評價體系的建立奠定了基礎(chǔ)。3.綜合前期動物實驗和臨床實驗研究結(jié)果,共篩選出30種與逍遙散抗抑郁療效相關(guān)的差異代謝物,包括氨基酸類(丙氨酸、亮氨酸和纈氨酸)、有機(jī)酸類(乳酸和草酸)、胺類(氧化三甲胺、谷氨酰胺以及神經(jīng)酰胺)、脂肪酸(硬脂酸、十七碳二烯酸)、脂類(溶血性磷酸酰膽堿、膽堿、鞘脂)、�；鈮A類(Carnitine C10:4和Carnitine C14:2)以及葡萄糖等,這些代謝物主要參與機(jī)體的能量代謝(乙醛酸鹽代謝、丙酮酸代謝和脂肪酸代謝)、神經(jīng)遞質(zhì)合成(纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸的生物合成、谷氨酸和谷氨酰胺代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、半胱氨酸和蛋氨酸代謝、�；撬岷蛠喤；撬岽x、甘油磷脂代謝、鞘脂代謝)和腸道菌群代謝等三大方面的代謝。ROC曲線分析結(jié)果顯示,血漿中乳酸、氧化三甲胺、草酸、硬脂酸、4-^慊，

本文編號：1775658