本文關(guān)鍵詞：原發(fā)免疫性血小板減少癥氣不攝血證病證結(jié)合小鼠模型研究　出處：《中國中醫(yī)科學院》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 病證結(jié)合 ITP 氣虛模型 睡眠剝奪 氣血脈

【摘要】：原發(fā)免疫性血小板減少癥(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是一種以血小板減少、伴或不伴皮膚粘膜瘀紫、鼻衄、內(nèi)臟出血等為特征的自身免疫性疾病,ITP動物模型是深入研究ITP發(fā)病機制與治療方法的主要手段,在ITP的研究中發(fā)揮著重要作用。病證結(jié)合動物模型是開展中醫(yī)藥治療ITP作用機制研究的重要基礎(chǔ),目前ITP的病證結(jié)合模型主要有ITP熱盛證模型、ITP腎陰虛證模型、ITP氣不攝血證模型等,但氣不攝血證ITP動物模型的研究還比較少,因此,本文在以往研究的基礎(chǔ)上,采用病證結(jié)合動物模型擬臨床研究的方法,建立ITP氣不攝血證病證結(jié)合小鼠模型,并對該模型的病理生理機制進行了動態(tài)觀察,以期為中醫(yī)氣血理論理論研究及中藥藥效評價提供一種合適的動物模型。目的:1)本課題采用動物模型對照法,比較分析法建立ITP氣不攝血證病證結(jié)合模型。2)通過對ITP氣不攝血證病證結(jié)合模型成模過程中生理病理指標的動態(tài)監(jiān)測與比較探索氣不攝血證的生理病理分子層面的發(fā)病機制。3)通過模型臨床指標的監(jiān)控與臨床疾病發(fā)生的對比,比較分析出合理的合乎臨床的氣不攝血證模型。內(nèi)容與方法:1.小鼠氣虛模型的建立與評價將ICR雄性小鼠分為正常對照組、睡眠剝奪組、力竭游泳組、睡眠剝奪+力竭游泳(簡稱復(fù)合組),每組12只,睡眠剝奪組采用每天9小時水環(huán)境多平臺法進行睡眠剝奪;力竭游泳組采用負重游泳力竭;復(fù)合組采用兩種方法聯(lián)合使用,連續(xù)4周。觀察小鼠行為,測量體重、抓力,數(shù)碼照相機采集舌面,舌底脈絡(luò),足部圖像,小動物無創(chuàng)監(jiān)護儀檢測脈搏信號,細胞流式儀檢測脾臟B細胞與T細胞亞群。2.小鼠原發(fā)免疫性血小板減少癥模型的建立將CBA/J雌性小鼠分為正常組與模型組,每組5只。模型組采用腹腔注射哺乳期后雌性Wistar大鼠血小板進行免疫造模,腹腔注射0.5ml含1X108個大鼠血小板的0.9%氯化鈉溶液首次免疫,之后每周一次注射0.5X108個血小板強化免疫,正常組腹腔注射生理鹽水,連續(xù)注射4周。每周免疫注射前,小鼠行尾尖取血測量血小板數(shù)。3.小鼠原發(fā)免疫性血小板減少癥氣不攝血證病證結(jié)合模型的建立與評價將CBA/J雌性小鼠分為正常組、睡眠剝奪組、免疫組、睡眠剝奪-免疫組,益氣攝血方組,每組12只。睡眠剝奪組采用每天16時水環(huán)境多平臺睡眠剝奪法;免疫組采用腹腔注射哺乳期后Wistar雌性大鼠血小板進行免疫造模;睡眠剝奪-免疫組兩種方法聯(lián)合使用;中藥組與睡眠剝奪-免疫組干預(yù)一致,并每天灌胃益氣攝血方,連續(xù)35天。觀察小鼠行為,測量體重與抓力,數(shù)碼照相機采集小鼠舌面圖像,小動物無創(chuàng)監(jiān)護儀檢測脈搏信號,稱量脾臟指數(shù),胸腺指數(shù);細胞流式儀檢測脾臟B細胞與T細胞亞;HE法觀察脾臟病理,血細胞計數(shù)儀檢測血小板數(shù);ELISA檢測血清細胞因子。4.小鼠原發(fā)免疫性血小板減少癥氣不攝血證病證結(jié)合模型的動態(tài)研究將CBA/J雌性小鼠分為正常組、模型組,每組48只。模型組采用多平臺水環(huán)境法進行睡眠剝奪,每天16小時,并在第二周結(jié)合腹腔注射哺乳期后Wistar雌性大鼠血小板進行ITP病癥結(jié)合造模。正常組與模型組分別在第2、3、4、5周末取材。觀察小鼠行為與體重,抓力儀測量小鼠抓力,數(shù)碼照相機采集舌面,舌底脈絡(luò),足部圖像,小動物無創(chuàng)監(jiān)護儀檢測脈搏信號,稱量脾臟指數(shù),胸腺指數(shù);細胞流式儀檢測脾臟B細胞與T細胞亞群;HE法觀察脾臟病理,血細胞計數(shù)儀檢測血小板數(shù);ELISA檢測血清細胞因子。結(jié)果:1.小鼠氣虛模型的建立與評價1)主要癥狀:與正常對照組比較,三組模型小鼠呈現(xiàn)疲勞特性,體重、抓力顯著降低(P0.05-0.01)。2)舌像:模型組小鼠舌面呈現(xiàn)不同程度的變白,只有復(fù)合組具有顯著性差異(P0.05)。3)脈象:復(fù)合組與睡眠剝奪組小鼠心率、脈搏幅度、呼吸頻率、與呼吸幅度均顯著降低(P0.05-0.01)。4)免疫學:各模型組的CD3+、CD4+、CD8+T細胞亞群顯著增加(P0.01),睡眠剝奪組的CD19+B細胞數(shù)目顯著減少(P0.01)。2.小鼠原發(fā)免疫性血小板減少癥模型的建立1)與正常對照組比較,模型組血小板數(shù)目在第2周達到最低點,結(jié)果有顯著差異(P0.01)。3.小鼠原發(fā)免疫性血小板減少癥氣不攝血證病證結(jié)合模型的建立與評價1)主要癥狀:與正常組比較,各模型組小鼠活動能力均降低,體重、抓力顯著降低(P0.05-0.01)呈現(xiàn)疲勞狀態(tài)。2)舌像:小鼠舌面均出現(xiàn)不同程度的變嫩白。3)脈象:各組的血氧飽和度均明顯下降(P0.01-0.05),睡眠剝奪組,免疫組,睡眠剝奪-免疫組心率值下降,而藥物組心率值升高,睡眠剝奪組呼吸頻率升高(P0.05),其余組無明顯變化(P0.05),睡眠剝奪-免疫組脈搏幅度明顯降低(P0.05),其余組無明顯差異(P0.05)。血液學:模型組巨核細胞成熟障礙,并且出現(xiàn)凋亡小體。4)藥物組在前3周血小板數(shù)升高明顯(P0.05),在4,5周時睡眠剝奪-免疫組血小板數(shù)最低(P0.01)。5)免疫學:各組脾臟指數(shù)均降低(P0.05-0.01),睡眠剝奪組,睡眠剝多-免疫組胸腺指數(shù)降低,差異明顯(P0.01-0.05)。各組的CD3+、CD4+、CD8+T細胞亞群明顯增加(P0.01),睡眠剝奪組的CD19+B細胞明顯減少(P0.01)。6)小鼠血小板相關(guān)抗體PAIgA與PAIgM無明顯差異。7)血清細胞因子各組分泌的IL-6均高于正常組(P0.01),以睡眠剝奪-免疫組差異最大,各組IFN-γ/IL-4比值均變大。4.小鼠原發(fā)免疫性血小板減少癥氣不攝血證病證結(jié)合模型的動態(tài)研究1)主要癥狀:與正常對照組比較,各組模型小鼠體重、抓力顯著降低(P0.05-0.01),呈現(xiàn)疲勞特性。2)舌像:模型組小鼠舌面均出現(xiàn)不同程度的變嫩白。3)脈象:模型組在第3,4周心率高于正常組(P0.01)在第3周之后,脈搏幅度明顯低于正常組(P0.01)。4)血液學:模型組巨核細胞成熟障礙,且在第5周差異最大。5)在第1-2周,模型組血小板數(shù)目高于正常組,差異明顯(P0.01-0.05),在第3-5周,模型組血小板數(shù)目低于正常組,差異明顯(P0.01),在第4周血小板數(shù)降低至最低。6)免疫學:模型組脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)動態(tài)觀察均低于正常組,其中以在第2,3周時差異顯著(P0.05)。7)模型組各周次的T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+明顯增加(P0.01),在第4,5周CD4+/CD8+明顯高于正常組(P0.01),模型組的CD19+B細胞顯著減少(P0.01)。8)模型組小鼠血小板相關(guān)抗體PAIgA,PAIgG比正常組高。隨造模時間增長,差異增大,在第5周時PAIgG差異明顯(P0.05)。9)血清細胞因子模型組分泌的IL-6均高于正常組,差異明顯(P0.05),IFN-γ/IL-4比值大于正常組,在第3,4周差異顯著(P0.05)。結(jié)論:1.睡眠剝奪,力竭游泳,睡眠剝奪+力竭游泳三種方法均可以成功制備氣虛小鼠模型,以睡眠剝奪造模最優(yōu)。2.基于免疫學的抗原交叉模擬原理,通過提取哺乳期后Wistar雌性大鼠血小板,腹腔注射進CBA雌性小鼠體內(nèi)可模擬臨床慢性ITP疾病,以實驗2-3周為最佳。3.睡眠剝奪結(jié)合血小板免疫5周,可以制備一種ITP氣不攝血證病證結(jié)合模型,為后續(xù)研究ITP機理研究及中藥藥效評價提供了一種接近臨床的動物模型。4.ITP氣不攝血證病證結(jié)合小鼠模型各項指標,從第2周開始出現(xiàn)病理變化,4周最嚴重,在第5周時癥狀及相關(guān)指標有所恢復(fù)。綜上所述,本論文通過造模方法、動物品系、造模時間等因素的選擇與優(yōu)化,初步制備了一種接近臨床的ITP氣不攝血證的病證結(jié)合動物模型。
[Abstract]:In this paper , the pathogenesis of ITP was established and compared with the model group . The mice were divided into two groups : normal group , sleep deprivation group , immune group , sleep deprivation - immune group and Yiqi group . The mice were divided into normal group , sleep deprivation group , immune group , sleep deprivation - immune group and Yiqixuetang group . There was no significant difference in the blood oxygen saturation ( P 0.01 ) , the sleep deprivation group ( P0.05 ) , the sleep deprivation group ( P0.05 ) , the sleep deprivation group and the sleep deprivation group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：中國中醫(yī)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R259;R-332

【參考文獻】

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本文編號：1414431