本文關(guān)鍵詞：過(guò)表達(dá)AMACR促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖及作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞癌 α-甲�；o酶A消旋酶 細(xì)胞增殖 無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)

【摘要】：目的:AMACR是一種胞漿蛋白,主要存在于人類過(guò)氧化物酶體和線粒體中,參與側(cè)鏈脂肪酸及脂肪酸衍生物的β氧化和在膽酸代謝中間產(chǎn)物的氧化過(guò)程中發(fā)揮重要作用,它的高表達(dá)對(duì)腫瘤的增殖具有積極的促進(jìn)作用,但這一結(jié)論在肝癌中尚未被證實(shí)。本課題組將采用無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析過(guò)表達(dá)AMACR對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。方法:應(yīng)用AMACR過(guò)表達(dá)的慢病毒載體對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo),建立AMACR穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞株,通過(guò)CCK-8試驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)AMACR對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響。然后提取AMACR過(guò)表達(dá)細(xì)胞株全蛋白,進(jìn)行無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究。對(duì)鑒定結(jié)果用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選出差異表達(dá)蛋白,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析和利用熒光定量PCR方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:成功構(gòu)建了AMACR過(guò)表達(dá)肝癌細(xì)胞株,CCK-8試驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)AMACR能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖。應(yīng)用無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,共篩選出138個(gè)差異表達(dá)蛋白,其中上調(diào)蛋白124個(gè),下調(diào)蛋白14個(gè)。這些差異表達(dá)蛋白主要參與代謝加工、細(xì)胞加工等,證明AMCR的過(guò)表達(dá)對(duì)于肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為影響巨大。IPA分析發(fā)現(xiàn),這些差異蛋白主要參與了ERK1/2信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路。應(yīng)用qRT-PCR方法對(duì)AMACR和FABP5的表達(dá)量進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果與質(zhì)譜定量結(jié)果相符。結(jié)論:過(guò)表達(dá)AMACR能夠促進(jìn)人類肝癌細(xì)胞的增殖,可能是通過(guò)調(diào)節(jié)ERK1/2和NF-κB信號(hào)通路以及上調(diào)多個(gè)促癌因子的表達(dá)量的手段使肝癌細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 α-甲�；o酶A消旋酶 細(xì)胞增殖 無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 材料與方法11-24
• 1. 主要儀器11
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 3. 主要試劑配制方法13-14
• 4.實(shí)驗(yàn)方法14-24
• 結(jié)果24-32
• 1. 穩(wěn)定過(guò)表達(dá)AMACR肝癌細(xì)胞株的建立24
• 2. CCK-8 細(xì)胞增殖試驗(yàn)24-25
• 3. 蛋白樣品濃度測(cè)定和樣品質(zhì)量檢測(cè)25-26
• 4. 蛋白鑒定及差異蛋白的篩選26-30
• 5. 差異蛋白的生物信息學(xué)分析30-31
• 6. AMACR的過(guò)表達(dá)和差異蛋白質(zhì)的熒光定量RT-PCR驗(yàn)證31-32
• 討論32-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 致謝39-40
• 附錄A 主要英文縮略詞表40-41
• 附錄B 綜述 基于蛋白質(zhì)組學(xué)的肝癌生物標(biāo)志物研究41-45
• 參考文獻(xiàn)44-45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 周玲麗;曹驥;李薇;羅旺;楊香娣;楊春;駱成飄;唐艷萍;李瑗;;沉默F(xiàn)ABP-5基因?qū)θ烁伟〩epG2細(xì)胞的影響[J];世界華人消化雜志;2015年02期

2 ;Cancer Incidence and Mortality in China,2007[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年01期

，

本文編號(hào)：999392