本文關(guān)鍵詞：沉默PLD2基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞增殖與遷移能力的影響及其機(jī)制的研究

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【摘要】：第一部分PLD2在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義目的:檢測(cè)PLD2在結(jié)腸癌組織及遠(yuǎn)端相臨的正常結(jié)腸粘膜組織中的表達(dá),探討PLD2的表達(dá)與患者臨床病理資料之間的關(guān)系。方法:1.采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)PLD2蛋白在35例人結(jié)腸癌組織及其相應(yīng)的遠(yuǎn)端正常結(jié)腸粘膜組織中的表達(dá),并進(jìn)一步分析PLD2蛋白在組織中的表達(dá)結(jié)果與患者臨床病理特性特性之間的內(nèi)在聯(lián)系。2.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)方法檢測(cè)PLD2m RNA在人結(jié)腸癌組織、正常結(jié)腸粘膜組織以及結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)水平。3.采取Western blot的技術(shù)檢測(cè)PLD2蛋白在人結(jié)腸癌粘膜組織、正常結(jié)腸粘膜組織及結(jié)腸癌細(xì)胞株中的表達(dá)差異。結(jié)果:1.PLD2主要定位于結(jié)腸癌細(xì)胞漿與細(xì)胞膜中,相對(duì)于正常結(jié)腸組織,PLD2在結(jié)腸癌組織中表達(dá)明顯增高(P0.05)。PLD2的表達(dá)與結(jié)腸癌患者腫瘤瘤體大小有關(guān)(P0.05)。2.PLD2的m RNA在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)水平明顯高于在與之相鄰的正常結(jié)腸組織中的表達(dá)(P0.05)。3.相對(duì)于正常結(jié)腸粘膜組織PLD2蛋白在癌組織中的表達(dá)水平明顯升高(P0.05),且PLD2在結(jié)腸癌SW480及SW620中有較高的表達(dá)水平。結(jié)論:PLD2在結(jié)腸癌組織及SW480與SW620細(xì)胞中均高表達(dá),且PLD2的表達(dá)與結(jié)腸癌腫瘤體積的大小相關(guān)。第二部分沉默PLD2基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞增殖與遷移能力的影響及其機(jī)制的研究目的:觀察沉默PLD2基因表達(dá)后結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和遷移能力的變化及相關(guān)分子機(jī)制。方法:1.腺病毒干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480與SW620細(xì)胞株后,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后PLD2的m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化情況。2.采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)方法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后兩株細(xì)胞增殖情況。3.通過Transwell小室法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞遷移能力變化。4.采用Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中周期蛋白D1(Cyclin D1)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Metalloproteinase-2,MMP-2)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1.轉(zhuǎn)染PLD2 si RNA后結(jié)腸癌細(xì)胞PLD2 m RNA和蛋白的表達(dá)量顯著下降(均P0.01)2.沉默PLD2表達(dá)后兩株細(xì)胞的增殖能力明顯下降(P=0.000)3.特異性抑制PLD2表達(dá)后結(jié)腸癌細(xì)胞遷移能力明顯下降(P=0.000)4.與正常組(未轉(zhuǎn)染病毒)和空載組相比較,PLD2干擾組Cyclin D1及MMP-2蛋白表達(dá)明顯下降(P=0.000)結(jié)論:特異性沉默PLD2基因表達(dá)引起的細(xì)胞增殖和遷移能力的下降可能與Cyclin D1和MMP-2表達(dá)下調(diào)密切相關(guān),提示PLD2可能成為結(jié)腸癌治療的新靶點(diǎn)之一。
【關(guān)鍵詞】：PLD2 結(jié)腸癌 免疫組化 quantitative Real-Time PCR Western blot 磷脂酶D2 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移 結(jié)腸癌 小干擾RNA
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-17
• 參考文獻(xiàn)15-17
• 第一部分PLD2在結(jié)腸癌的表達(dá)及臨床意義17-36
• 1 材料與方法17-28
• 2 結(jié)果28-32
• 3 討論32-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 第二部分 沉默PLD2基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞增殖與遷移能力的影響及其機(jī)制的研究36-50
• 1 材料與方法36-40
• 2 結(jié)果40-46
• 3 討論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 全文總結(jié)50-51
• 文獻(xiàn)綜述51-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60-61
• 攻讀學(xué)位期間的主要研究成果61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳萬(wàn)青;鄭榮壽;張思維;曾紅梅;左婷婷;賈漫漫;夏昌發(fā);鄒小農(nóng);赫捷;;2012年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J];中國(guó)腫瘤;2016年01期

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本文編號(hào)：996095