本文關鍵詞：天然冰片通過氯通道介導促進鼻咽癌細胞攝取阿霉素的研究

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【摘要】：目的:我國傳統(tǒng)中藥冰片一直被用作輔助用藥,能促進機體對其他有效藥物的攝取,但機制不明確。我們前期研究發(fā)現(xiàn)氯通道開放可以促進細胞對藥物的攝取,使用氯通道阻斷劑及下調氯通道蛋白表達可以抑制該作用,說明氯通道可能參與或調節(jié)細胞對藥物的攝取。本課題以低分化鼻咽癌細胞(CNE-2Z)為研究對象,以氯通道為研究出發(fā)點,探討:1)氯通道在冰片促進阿霉素跨細胞膜轉運中的作用。2)參與冰片促進阿霉素跨細胞膜轉運的氯通道分子本質。方法:本研究中使用的是天然冰片。1)用熒光示蹤法檢測冰片促進阿霉素跨細胞膜轉運情況;2)采用全細胞膜片鉗技術記錄冰片激活的全細胞氯電流,并分析其電流特性及容積敏感性;3)用倒置熒光顯微鏡拍攝細胞圖像,使用Q500MC圖像分析軟件計算并測量細胞容積變化;4)用酶標儀法及流式細胞術,檢測冰片作用細胞前后細胞內藥物濃度的變化及與氯通道關系;5)使用si RNA技術下調鼻咽癌細胞Cl C-3氯通道蛋白的表達,用Western Blot檢測干擾前后細胞Cl C-3蛋白的表達水平;用流式細胞術及熒光顯微示蹤法檢測si RNA對冰片促進阿霉素跨細胞膜轉運的影響;6)用MTT法檢測冰片及冰片聯(lián)合阿霉素的細胞毒作用。結果:1)冰片明顯促進CNE-2Z細胞對阿霉素的攝取(增加約29%)。2)冰片能快速激活CNE-2Z細胞氯通道,產(chǎn)生氯電流,該電流能被氯通道阻斷劑DIDS及Tamoxifen抑制。此電流也可以被47%高滲溶液抑制,說明冰片激活的氯電流具有容積敏感性。離子置換實驗的結果表明,該氯通道的離子選擇性為:I-Br-Cl-Gluconate-。3)細胞外灌流冰片溶液30分鐘,CNE-2Z細胞體積明顯縮小(減小約9%)。冰片此作用可被氯通道阻斷劑DIDS阻斷。4)冰片促進細胞對阿霉素攝取的效應可被氯通道阻斷劑DIDS明顯抑制。5)Cl C-3si RNA能顯著下調CNE-2Z細胞Cl C-3氯通道蛋白表達(下調約57%);下調Cl C-3氯通道蛋白表達后,冰片促進CNE-2Z細胞對阿霉素攝取的作用減弱。6)冰片無明顯的細胞毒作用,但可增強阿霉素對CNE-2Z細胞增殖的抑制作用,使其半抑制濃度(IC50)降低約50%。結論:1)冰片可以激活低分化鼻咽癌細胞的氯通道,促進細胞攝取阿霉素。2)氯通道是冰片促進阿霉素跨細胞膜轉運的作用靶點之一。3)Cl C-3氯通道在冰片促進阿霉素跨細胞膜轉運中起重要作用。4)冰片能明顯加強阿霉素的抗腫瘤作用。
【關鍵詞】：冰片 鼻咽腫瘤 膜片鉗技術 氯通道 氯通道阻斷劑
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R73-36
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 1 前言8-14
• 1.1 冰片8-11
• 1.1.1 冰片的分類及作用8-9
• 1.1.2 冰片促進藥物跨血腦屏障轉運的研究9-10
• 1.1.3 冰片促進藥物透皮吸收的研究10
• 1.1.4 冰片促進胃粘膜細胞對藥物的攝取10
• 1.1.5 冰片促進細胞對藥物的攝取10-11
• 1.2 氯離子通道11-12
• 1.2.1 氯離子通道的分類11
• 1.2.2 氯通道與物質轉運11-12
• 1.3 本課題研究的目的及意義12-14
• 2 材料及方法14-26
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 主要儀器及設備14-15
• 2.1.2 細胞與藥物15
• 2.1.3 主要試劑及藥品15-17
• 2.2 方法17-25
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)17-18
• 2.2.2 全細胞膜片鉗技術記錄CNE-2Z氯電流18-20
• 2.2.3 冰片對CNE-2Z細胞容積影響。20-21
• 2.2.4 熒光顯微示蹤法檢測冰片促進細胞對阿霉素的攝取情況21-22
• 2.2.5 熒光酶標儀法檢測冰片促進細胞對阿霉素的攝取情況22-23
• 2.2.6 流式細胞術檢測細胞藥物濃度23
• 2.2.7 Cl C-3 si RNA轉染細胞23-24
• 2.2.8 MTT法檢測冰片、阿霉素、及阿霉素聯(lián)合冰片的細胞毒作用24-25
• 2.3 統(tǒng)計方法25-26
• 3.結果26-44
• 3.1 CNE-2Z 細胞對不同濃度阿霉素的攝取26-27
• 3.2 不同濃度冰片對 CNE-2Z 細胞對阿霉素吸收的影響27-28
• 3.3 冰片激活 CNE-2Z 細胞氯電流28-34
• 3.4 氯通道阻斷劑抑制冰片對 CNE-2Z 細胞攝取阿霉素的促進效應34-36
• 3.5 下調 Cl C-3 氯通道表達可以抑制冰片對 CNE-2Z 細胞攝取阿霉素的促進效應36-43
• 3.6 冰片聯(lián)合阿霉素增強阿霉素的細胞毒作用43-44
• 4.討論44-46
• 4.1 冰片誘發(fā) CNE-2Z 細胞容積縮小44
• 4.2 冰片可以促進 CNE-2Z 細胞對阿霉素的攝取44
• 4.3 冰片促進 CNE-2Z 細胞對阿霉素的攝取可能通過氯通道介導44-45
• 4.4 Cl C-3 氯通道在冰片促進 CNE-2Z 細胞對阿霉素的攝取中有重要作用45-46
• 4.5 冰片可以加強阿霉素誘導 CNE-2Z 細胞凋亡的作用46
• 5 結論46-47
• 參考文獻47-51
• 發(fā)表論文51-52
• 主要縮略詞匯表52-53
• 致謝53

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