本文關(guān)鍵詞：惡性黑色素瘤中miR-506的表達(dá)及其生物學(xué)意義

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【摘要】：目的惡性黑色素瘤是一種起源于黑色素細(xì)胞的高度惡性腫瘤,好發(fā)于皮膚及黏膜,預(yù)后不佳。轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤的預(yù)后極差,中位生存期僅為7.5個月。目前,在中國惡性黑色素瘤的發(fā)病率和死亡率均呈快速上升的趨勢。傳統(tǒng)的放化療對轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤的療效并不理想,而分子靶向治療如維羅非尼等藥物在延長患者生存期方面展現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢,抗CTLA-4及PD-1/PD-L1等免疫治療目前已取得了巨大成功。但仍有許多分子靶向藥物仍在臨床試驗(yàn)階段,臨床獲益并不明確。Micro RNAs(miRNAs)是一組非編碼的小RNA,可調(diào)控人類基因組約30%的基因,在腫瘤中發(fā)揮抑癌基因或促癌基因的作用。相關(guān)研究表明,miR-506在卵巢癌、乳腺癌、胃癌等上皮源性腫瘤和間葉來源的骨肉瘤中均有抑制腫瘤進(jìn)展的作用,但其在惡性黑色素瘤中的作用尚不明確。因此,本研究旨在探討miR-506在惡性黑色素瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義,同時探索其與DNA損傷同源重組信號通路和間葉上皮轉(zhuǎn)化(Mesenchymal to epithelial transition,MET)之間的關(guān)系,為明確miR-506在惡性黑色素瘤中的生物學(xué)意義提供依據(jù)。方法本研究選取從1981年2月到2013年5月在天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院就診并由病理確診為惡性黑色素瘤的776例患者,并對每位患者的臨床病例資料進(jìn)行收集、整理及生存狀態(tài)的隨訪。應(yīng)用實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測選用其中的48例新鮮惡性黑色素瘤組織(16例腫瘤組織和有配對的正常組織)中miR-506的表達(dá)水平并對miR-506的表達(dá)進(jìn)行差異性分析。從病理科獲取147例惡性黑色素瘤的福爾馬林固定石蠟包埋(Formalin fixed paraffin embedded,FFPE)腫瘤組織,制成組織芯片(Tissue microarray,TMA)進(jìn)行組織樣本的實(shí)驗(yàn),應(yīng)用免疫組化SP染色方法檢測DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白(RAD51 recombinase,RAD51;RAD52 homolog,DNA repair protein,RAD52;ATM serine/threonine kinase,ATM)及MET相關(guān)蛋白(E-cadherin,N-cadherin,Vimentin和Slug)在組織芯片中的表達(dá),分別分析兩組蛋白間表達(dá)的相關(guān)性。采用卡方檢驗(yàn)分析miR-506、相關(guān)蛋白指標(biāo)以及患者臨床病理特征之間相關(guān)性。采用Kaplan-Meier法分析miR-506表達(dá)水平和各相關(guān)蛋白的表達(dá)水平對惡性黑色素瘤患者的總生存期及無進(jìn)展生存期的影響。過表達(dá)或抑制miR-506后在人惡性黑色素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375和A875中,通過3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)、Transwell小室等細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)來觀察miR-506對惡性黑色素瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲性的影響;用Western blot方法來進(jìn)一步觀察miR-506對DNA損傷修復(fù)同源重組相關(guān)蛋白(RAD51)及MET相關(guān)蛋白(N-cadherin,Slug和Vimentin)表達(dá)的影響。結(jié)果1.實(shí)時定量PCR的結(jié)果顯示,miR-506在惡性黑色素瘤腫瘤組織中的表達(dá)水平高于正常組織的表達(dá)水平(n=64,P=0.006),且miR-506高表達(dá)的惡性黑色素瘤患者的總生存、無病生存及無進(jìn)展生存時間均優(yōu)于低表達(dá)的患者(OS:n=48,P=0.002,DFS:n=32,P0.001,PFS:n=35,P=0.039)。miR-506在轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤患者中的表達(dá)顯著低于原發(fā)病變的患者(P=0.049)。2.在惡性黑色素瘤中RAD51蛋白的陽性表達(dá)率為56.5%,ATM的陽性表達(dá)率為53.7%,二者之間的陽性表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.396,P0.001)。而RAD52的陽性表達(dá)率為45.6%,且同RAD51和ATM的陽性表達(dá)則分別呈負(fù)相關(guān)(r=-0.253,P=0.002;r=-0.219,P=0.008)。miR-506的表達(dá)同RAD51表達(dá)成負(fù)相關(guān)(r=-0.467,P=0.001)。3.Vimentin,N-cadherin,Slug和E-cadherin在惡性黑色素瘤中的陽性表達(dá)率分別為72.1%,36.1%,40.1%和29.3%。相關(guān)性檢驗(yàn)可知,N-cadherin的陽性表達(dá)同Vimentin和Slug的陽性表達(dá)成正相關(guān)(r=0.246,P=0.003;r=0.281,P=0.001),而同E-cadherin的陽性表達(dá)成負(fù)相關(guān)(r=-0.327,P0.001),Vimentin的陽性表達(dá)同Slug的陽性表達(dá)之間也成正相關(guān)(r=0.385,P0.001)。miR-506的表達(dá)同Vimentin和Slug表達(dá)分別成負(fù)相關(guān)(r=-0.377,P=0.008;r=-0.358,P=0.012)。4.RAD51、ATM和N-cadherin陽性表達(dá)的患者臨床預(yù)后較陰性表達(dá)的患者差,而RAD52和E-cadherin陽性表達(dá)的患者預(yù)后較好。Cox回歸分析可得RAD51、RAD52和E-cadherin的蛋白表達(dá)可視為患者評估預(yù)后的獨(dú)立因子(P=0.025,HR=2.41;P=0.008,HR=0.37;P=0.003,HR=0.21)。5.在惡性黑色素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375和A875中MTT和Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:過表達(dá)miR-506可顯著抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞的增殖,遷移及侵襲;抑制miR-506可促進(jìn)惡性黑色素瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。6.在惡性黑色素瘤細(xì)胞系中過表達(dá)miR-506可引起Vimentin、N-cadherin、Slug和RAD51蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)的功能。7.在惡性黑色素瘤細(xì)胞系中抑制miR-506,未見其對Vimentin、N-cadherin、Slug和RAD51蛋白的表達(dá)有明顯調(diào)控功能。結(jié)論惡性黑色素瘤中miR-506的表達(dá)與患者的預(yù)后相關(guān)。miR-506可下調(diào)RAD51的表達(dá),調(diào)控DNA損傷同源重組通路,對腫瘤細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用;亦可下調(diào)Vimentin、N-cadherin和Slug的表達(dá),調(diào)控間葉上皮轉(zhuǎn)化通路,抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。由此可知,在惡性黑色素瘤中miR-506可能發(fā)揮“保護(hù)”的作用。
【關(guān)鍵詞】：惡性黑色素瘤 miR-506間葉上皮轉(zhuǎn)化 E-鈣黏連蛋白 RAD51重組酶
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語/符號說明12-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 1 對象和方法17-35
• 1.1 研究對象17
• 1.1.1 組織樣本17
• 1.1.2 細(xì)胞株17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料17-21
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 1.2.3 溶液配制19-21
• 1.3 研究方法21-33
• 1.3.1 臨床樣本收集與保存21
• 1.3.2 組織樣本RNA的提取21-22
• 1.3.3 實(shí)時定量PCR檢測miR-506在惡性黑色素瘤組織中的表達(dá)22-24
• 1.3.4 惡性黑色素瘤樣本組織芯片的構(gòu)建24
• 1.3.5 免疫組織化學(xué)染色檢測蛋白表達(dá)24-26
• 1.3.6 細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)26-33
• 1.4 病歷資料隨訪33-34
• 1.5 統(tǒng)計(jì)分析34-35
• 2 結(jié)果35-64
• 2.1 惡性黑色素瘤的臨床特征及預(yù)后因素35-44
• 2.1.1 惡性黑色素瘤的一般臨床特征及預(yù)后35-37
• 2.1.2 皮膚型惡性黑色素瘤的一般臨床特征及其預(yù)后37
• 2.1.3 黏膜型惡性黑色素瘤的一般臨床特征及其預(yù)后37-44
• 2.2 惡性黑色素瘤組織樣本中miR-506的表達(dá)分析及預(yù)后意義44-48
• 2.2.1 惡性黑色素瘤組織樣本中miR-506的表達(dá)分析44
• 2.2.2 miR-506與惡性黑色素瘤患者臨床資料的相關(guān)分析44-46
• 2.2.3 miR-506在惡性黑色素瘤中的預(yù)后意義46-48
• 2.3 DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達(dá)及臨床意義48-52
• 2.3.1 DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達(dá)及臨床相關(guān)分析48-50
• 2.3.2DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的臨床意義50-52
• 2.3.3miR-506與DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析52
• 2.4 間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達(dá)及臨床意義4052-59
• 2.4.1 間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達(dá)及臨床相關(guān)分析52-53
• 2.4.2 間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的臨床意義53-58
• 2.4.3 miR-506與間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析58-59
• 2.5 miR-506在惡性黑色素瘤細(xì)胞系中功能實(shí)驗(yàn)的研究59-64
• 2.5.1 miR-506對細(xì)胞增殖的影響59-60
• 2.5.2 miR-506對細(xì)胞遷移和侵襲的影響60-62
• 2.5.3 miR-506對惡性黑色素瘤細(xì)胞間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白及RAD51蛋白表達(dá)水平的影響62-64
• 3 討論64-68
• 3.1 miR-506 在惡性黑色素瘤中的表達(dá)及預(yù)后意義64-65
• 3.2 miR-506 在惡性黑色素瘤中同 DNA 損傷同源重組修復(fù)蛋白的關(guān)系65-66
• 3.3 miR-506 在惡性黑色素瘤中同間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的關(guān)系66-67
• 3.4 miR-506抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲67-68
• 4 結(jié)論68-70
• 參考文獻(xiàn)70-76
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明76-77
• 綜述 miR-506在腫瘤中作用機(jī)制的研究進(jìn)展77-90
• 綜述參考文獻(xiàn)84-90
• 致謝90-91
• 個人簡歷91

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Meng-Ze Hao;Wen-Ya Zhou;Xiao-Ling Du;Ke-Xin Chen;Guo-Wen Wang;Yun Yang;Ji-Long Yang;;Novel anti-melanoma treatment:focus on immunotherapy[J];Chinese Journal of Cancer;2014年09期

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本文編號：992991