本文關(guān)鍵詞：惡性黑色素瘤中miR-506的表達及其生物學意義

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【摘要】：目的惡性黑色素瘤是一種起源于黑色素細胞的高度惡性腫瘤,好發(fā)于皮膚及黏膜,預(yù)后不佳。轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤的預(yù)后極差,中位生存期僅為7.5個月。目前,在中國惡性黑色素瘤的發(fā)病率和死亡率均呈快速上升的趨勢。傳統(tǒng)的放化療對轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤的療效并不理想,而分子靶向治療如維羅非尼等藥物在延長患者生存期方面展現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢,抗CTLA-4及PD-1/PD-L1等免疫治療目前已取得了巨大成功。但仍有許多分子靶向藥物仍在臨床試驗階段,臨床獲益并不明確。Micro RNAs(miRNAs)是一組非編碼的小RNA,可調(diào)控人類基因組約30%的基因,在腫瘤中發(fā)揮抑癌基因或促癌基因的作用。相關(guān)研究表明,miR-506在卵巢癌、乳腺癌、胃癌等上皮源性腫瘤和間葉來源的骨肉瘤中均有抑制腫瘤進展的作用,但其在惡性黑色素瘤中的作用尚不明確。因此,本研究旨在探討miR-506在惡性黑色素瘤組織中的表達及其臨床意義,同時探索其與DNA損傷同源重組信號通路和間葉上皮轉(zhuǎn)化(Mesenchymal to epithelial transition,MET)之間的關(guān)系,為明確miR-506在惡性黑色素瘤中的生物學意義提供依據(jù)。方法本研究選取從1981年2月到2013年5月在天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院就診并由病理確診為惡性黑色素瘤的776例患者,并對每位患者的臨床病例資料進行收集、整理及生存狀態(tài)的隨訪。應(yīng)用實時定量PCR技術(shù)檢測選用其中的48例新鮮惡性黑色素瘤組織(16例腫瘤組織和有配對的正常組織)中miR-506的表達水平并對miR-506的表達進行差異性分析。從病理科獲取147例惡性黑色素瘤的福爾馬林固定石蠟包埋(Formalin fixed paraffin embedded,FFPE)腫瘤組織,制成組織芯片(Tissue microarray,TMA)進行組織樣本的實驗,應(yīng)用免疫組化SP染色方法檢測DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白(RAD51 recombinase,RAD51;RAD52 homolog,DNA repair protein,RAD52;ATM serine/threonine kinase,ATM)及MET相關(guān)蛋白(E-cadherin,N-cadherin,Vimentin和Slug)在組織芯片中的表達,分別分析兩組蛋白間表達的相關(guān)性。采用卡方檢驗分析miR-506、相關(guān)蛋白指標以及患者臨床病理特征之間相關(guān)性。采用Kaplan-Meier法分析miR-506表達水平和各相關(guān)蛋白的表達水平對惡性黑色素瘤患者的總生存期及無進展生存期的影響。過表達或抑制miR-506后在人惡性黑色素瘤細胞系A(chǔ)375和A875中,通過3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)、Transwell小室等細胞功能實驗來觀察miR-506對惡性黑色素瘤細胞的增殖、遷移及侵襲性的影響;用Western blot方法來進一步觀察miR-506對DNA損傷修復同源重組相關(guān)蛋白(RAD51)及MET相關(guān)蛋白(N-cadherin,Slug和Vimentin)表達的影響。結(jié)果1.實時定量PCR的結(jié)果顯示,miR-506在惡性黑色素瘤腫瘤組織中的表達水平高于正常組織的表達水平(n=64,P=0.006),且miR-506高表達的惡性黑色素瘤患者的總生存、無病生存及無進展生存時間均優(yōu)于低表達的患者(OS:n=48,P=0.002,DFS:n=32,P0.001,PFS:n=35,P=0.039)。miR-506在轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤患者中的表達顯著低于原發(fā)病變的患者(P=0.049)。2.在惡性黑色素瘤中RAD51蛋白的陽性表達率為56.5%,ATM的陽性表達率為53.7%,二者之間的陽性表達呈正相關(guān)性(r=0.396,P0.001)。而RAD52的陽性表達率為45.6%,且同RAD51和ATM的陽性表達則分別呈負相關(guān)(r=-0.253,P=0.002;r=-0.219,P=0.008)。miR-506的表達同RAD51表達成負相關(guān)(r=-0.467,P=0.001)。3.Vimentin,N-cadherin,Slug和E-cadherin在惡性黑色素瘤中的陽性表達率分別為72.1%,36.1%,40.1%和29.3%。相關(guān)性檢驗可知,N-cadherin的陽性表達同Vimentin和Slug的陽性表達成正相關(guān)(r=0.246,P=0.003;r=0.281,P=0.001),而同E-cadherin的陽性表達成負相關(guān)(r=-0.327,P0.001),Vimentin的陽性表達同Slug的陽性表達之間也成正相關(guān)(r=0.385,P0.001)。miR-506的表達同Vimentin和Slug表達分別成負相關(guān)(r=-0.377,P=0.008;r=-0.358,P=0.012)。4.RAD51、ATM和N-cadherin陽性表達的患者臨床預(yù)后較陰性表達的患者差,而RAD52和E-cadherin陽性表達的患者預(yù)后較好。Cox回歸分析可得RAD51、RAD52和E-cadherin的蛋白表達可視為患者評估預(yù)后的獨立因子(P=0.025,HR=2.41;P=0.008,HR=0.37;P=0.003,HR=0.21)。5.在惡性黑色素瘤細胞系A(chǔ)375和A875中MTT和Transwell小室實驗結(jié)果顯示:過表達miR-506可顯著抑制惡性黑色素瘤細胞的增殖,遷移及侵襲;抑制miR-506可促進惡性黑色素瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力。6.在惡性黑色素瘤細胞系中過表達miR-506可引起Vimentin、N-cadherin、Slug和RAD51蛋白的表達顯著下調(diào)的功能。7.在惡性黑色素瘤細胞系中抑制miR-506,未見其對Vimentin、N-cadherin、Slug和RAD51蛋白的表達有明顯調(diào)控功能。結(jié)論惡性黑色素瘤中miR-506的表達與患者的預(yù)后相關(guān)。miR-506可下調(diào)RAD51的表達,調(diào)控DNA損傷同源重組通路,對腫瘤細胞的增殖有一定的抑制作用;亦可下調(diào)Vimentin、N-cadherin和Slug的表達,調(diào)控間葉上皮轉(zhuǎn)化通路,抑制腫瘤細胞的遷移和侵襲能力。由此可知,在惡性黑色素瘤中miR-506可能發(fā)揮“保護”的作用。
【關(guān)鍵詞】：惡性黑色素瘤 miR-506間葉上皮轉(zhuǎn)化 E-鈣黏連蛋白 RAD51重組酶
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語/符號說明12-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 1 對象和方法17-35
• 1.1 研究對象17
• 1.1.1 組織樣本17
• 1.1.2 細胞株17
• 1.2 實驗材料17-21
• 1.2.1 實驗試劑17-18
• 1.2.2 實驗儀器18-19
• 1.2.3 溶液配制19-21
• 1.3 研究方法21-33
• 1.3.1 臨床樣本收集與保存21
• 1.3.2 組織樣本RNA的提取21-22
• 1.3.3 實時定量PCR檢測miR-506在惡性黑色素瘤組織中的表達22-24
• 1.3.4 惡性黑色素瘤樣本組織芯片的構(gòu)建24
• 1.3.5 免疫組織化學染色檢測蛋白表達24-26
• 1.3.6 細胞學實驗26-33
• 1.4 病歷資料隨訪33-34
• 1.5 統(tǒng)計分析34-35
• 2 結(jié)果35-64
• 2.1 惡性黑色素瘤的臨床特征及預(yù)后因素35-44
• 2.1.1 惡性黑色素瘤的一般臨床特征及預(yù)后35-37
• 2.1.2 皮膚型惡性黑色素瘤的一般臨床特征及其預(yù)后37
• 2.1.3 黏膜型惡性黑色素瘤的一般臨床特征及其預(yù)后37-44
• 2.2 惡性黑色素瘤組織樣本中miR-506的表達分析及預(yù)后意義44-48
• 2.2.1 惡性黑色素瘤組織樣本中miR-506的表達分析44
• 2.2.2 miR-506與惡性黑色素瘤患者臨床資料的相關(guān)分析44-46
• 2.2.3 miR-506在惡性黑色素瘤中的預(yù)后意義46-48
• 2.3 DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達及臨床意義48-52
• 2.3.1 DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達及臨床相關(guān)分析48-50
• 2.3.2DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的臨床意義50-52
• 2.3.3miR-506與DNA損傷同源重組相關(guān)蛋白表達的相關(guān)性分析52
• 2.4 間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達及臨床意義4052-59
• 2.4.1 間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的表達及臨床相關(guān)分析52-53
• 2.4.2 間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白在惡性黑色素瘤組織中的臨床意義53-58
• 2.4.3 miR-506與間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白表達的相關(guān)性分析58-59
• 2.5 miR-506在惡性黑色素瘤細胞系中功能實驗的研究59-64
• 2.5.1 miR-506對細胞增殖的影響59-60
• 2.5.2 miR-506對細胞遷移和侵襲的影響60-62
• 2.5.3 miR-506對惡性黑色素瘤細胞間葉-上皮轉(zhuǎn)化(MET)相關(guān)蛋白及RAD51蛋白表達水平的影響62-64
• 3 討論64-68
• 3.1 miR-506 在惡性黑色素瘤中的表達及預(yù)后意義64-65
• 3.2 miR-506 在惡性黑色素瘤中同 DNA 損傷同源重組修復蛋白的關(guān)系65-66
• 3.3 miR-506 在惡性黑色素瘤中同間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的關(guān)系66-67
• 3.4 miR-506抑制惡性黑色素瘤細胞的增殖、遷移和侵襲67-68
• 4 結(jié)論68-70
• 參考文獻70-76
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明76-77
• 綜述 miR-506在腫瘤中作用機制的研究進展77-90
• 綜述參考文獻84-90
• 致謝90-91
• 個人簡歷91

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Meng-Ze Hao;Wen-Ya Zhou;Xiao-Ling Du;Ke-Xin Chen;Guo-Wen Wang;Yun Yang;Ji-Long Yang;;Novel anti-melanoma treatment:focus on immunotherapy[J];Chinese Journal of Cancer;2014年09期

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本文編號：992991