本文關(guān)鍵詞：SPINK1在肝癌患者血漿中表達(dá)情況的研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞癌 SPINK1 甲胎蛋白 腫瘤標(biāo)志物

【摘要】：背景與目的肝癌是世界第五大常見腫瘤,居惡性腫瘤死亡率排名的第三位。肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是肝癌最主要的表現(xiàn)形式,約占肝癌的70%到85%。有統(tǒng)計(jì)學(xué)表明,在出現(xiàn)癥狀后診斷出肝癌的患者,其5年生存率僅為0%~10%,而當(dāng)在肝癌早期診斷后并經(jīng)過手術(shù)治療后,其5年生存率則可以達(dá)到70%,所以對(duì)于肝癌患者來說,早期的診斷非常重要。目前,在臨床上廣泛應(yīng)用的肝癌的血清學(xué)標(biāo)志物是甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP),然而在臨床工作中發(fā)現(xiàn)AFP陰性的肝癌患者占肝癌患者總數(shù)的比例卻高達(dá)30%,可見其對(duì)肝細(xì)胞癌患者的診斷及預(yù)后預(yù)測(cè)具有局限性,所以研究者試圖尋找新的用于肝癌診斷的血清標(biāo)志物。絲氨酸蛋白酶抑制劑(serine protease inhibitors,SERPIN)是分布最廣、規(guī)模最大的蛋白酶抑制劑超家族,絲氨酸蛋白酶抑制劑kazal1型(serine peptidase inhibitor Kazal type1,SPINK1)作為該家族中的一員,近年來受到了廣泛的關(guān)注,它是一種由56個(gè)氨基酸殘基組成的分泌性多肽,最主要的功能是抑制胰蛋白酶的活性。近年來的多項(xiàng)研究證實(shí),與正常的肝臟組織相比,肝癌組織中SPINK1的基因表達(dá)顯著上調(diào),這可能是由于腫瘤浸潤引起的組織破壞誘發(fā)急性期反應(yīng),在白細(xì)胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白細(xì)胞介素1(interleukin-1,IL-1)的作用下誘導(dǎo)了SPINK1的高表達(dá)。SPINK1在肝細(xì)胞癌組織中的高表達(dá)顯示了其具有作為肝細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)志物的潛能,然而其在外周血中的表達(dá)情況卻并未被深入研究,尚不清楚其是否可作為肝細(xì)胞肝癌的血清腫瘤標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA法)檢測(cè)SPINK1、AFP在肝癌、肝硬化、健康人及胃癌和結(jié)腸癌患者血漿中的表達(dá)水平,探討SPINK1在肝細(xì)胞肝癌診斷方面的應(yīng)用價(jià)值。資料收集河南省人民醫(yī)院2014年10月~2015年02月期間住院檢查治療的患者血樣標(biāo)本190例,詳細(xì)記錄患者的年齡、性別及腫瘤分期等臨床資料。其中未經(jīng)治療的肝細(xì)胞癌患者70例、肝硬化患者30例、胃癌患者30例、結(jié)腸癌患者30例,肝癌、胃癌及結(jié)直腸癌患者的診斷均經(jīng)過我院術(shù)后病理診斷證實(shí),肝硬化患者經(jīng)我院超聲、CT及MRI診斷證實(shí)。另外從來我院體檢的人群中隨機(jī)挑選30例健康人作為健康對(duì)照組,全部排除肝、腦、心、腎等主要臟器疾病。方法1、標(biāo)本采集收集每位受試者的清晨空腹靜脈血3ml于edta-抗凝管內(nèi),并立即將標(biāo)本在常溫下以3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘,取上清液分裝于1.5ml離心管內(nèi),然后放置在-100℃冰箱保存,待以后檢測(cè)使用。2、檢測(cè)方法血漿spink1、afp檢測(cè)均采用elisa法。spink1試劑盒購買自臺(tái)灣abnova公司,afp試劑盒購買自novateinbio公司。所有操作均按說明書嚴(yán)格執(zhí)行。3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用spss21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用“t”檢驗(yàn),多個(gè)樣本均數(shù)比較采用方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,以α0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。繪制受試者工作曲線(roc),根據(jù)roc曲線分析血清spink1用于肝細(xì)胞癌診斷的敏感性、特異性。結(jié)果1、spink1在肝細(xì)胞癌組患者血漿中的表達(dá)顯著高于肝硬化及健康對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)意義(p0.01)。2、根據(jù)腫瘤的tnm分期,iii-iv肝細(xì)胞癌患者血漿中spink1的表達(dá)量明顯高于i-ii期肝細(xì)胞癌患者血漿中的表達(dá)量(p0.05)。3、本次實(shí)驗(yàn)中spink1、afp診斷肝細(xì)胞癌的敏感度分別為77.1%、51.4%。特異度分別為67.5%、96.7%。4、在35例afp陰性的肝細(xì)胞癌患者的血漿中,spink1表達(dá)陽性的患者有28例,陽性率80.00%。5、采用spink1、afp平行聯(lián)合的檢測(cè)方法,肝癌患者的敏感度和特異度分別達(dá)到65.8%和90%。采用系列聯(lián)合的檢測(cè)方法,肝癌患者的敏感度和特異度分別為98.3%和37.1%。結(jié)論1、血漿spink1具有作為肝細(xì)胞癌血清腫瘤標(biāo)志物的潛能。2、血漿spink1表達(dá)量的高低與肝細(xì)胞癌患者的腫瘤分期明顯相關(guān)。3、血漿spink1可用于afp陰性肝癌患者的篩查。4、通過spink1與afp的聯(lián)合檢測(cè),可以明顯提高肝癌患者的檢出率。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 SPINK1 甲胎蛋白 腫瘤標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 主要英文縮略詞對(duì)照表11-12
• 引言12-14
• 1 研究對(duì)象與主要儀器14-16
• 1.1 研究對(duì)象14
• 1.2 標(biāo)本的采集與處理14
• 1.3 主要儀器設(shè)備14-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-20
• 2.1 血漿中SPINK1表達(dá)量的檢測(cè)16-18
• 2.1.1 準(zhǔn)備16
• 2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備16-17
• 2.1.3 生物素標(biāo)記的SPINK1抗體工作液的制備17
• 2.1.4 ABC（抗生物素蛋白-生物素-過氧化物酶復(fù)合物）工作液的制備17
• 2.1.5 操作步驟17-18
• 2.2 血漿中AFP表達(dá)量的檢測(cè)18-19
• 2.2.1 準(zhǔn)備18
• 2.2.2 加樣18
• 2.2.3 溫育18
• 2.2.4 配液18-19
• 2.2.5 洗滌19
• 2.2.6 加酶19
• 2.2.7 溫育19
• 2.2.8 洗滌19
• 2.2.9 顯色19
• 2.2.10 終止19
• 2.2.11 測(cè)定19
• 2.3 數(shù)據(jù)的處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19-20
• 3 結(jié)果20-26
• 3.1 SPINK1在各組樣本血漿中表達(dá)情況的比較20
• 3.2 SPINK1與肝癌患者基本情況的相關(guān)性20-22
• 3.3 SPINK1用于診斷肝細(xì)胞癌的ROC曲線22
• 3.4 SPINK1在AFP陰性肝細(xì)胞癌患者血漿中的表達(dá)情況22-23
• 3.5 SPINK1和AFP聯(lián)合檢測(cè)在肝癌診斷上的價(jià)值23
• 3.6 SPINK1與胃癌患者基本情況的相關(guān)性23-26
• 4 討論26-30
• 5 結(jié)論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 文獻(xiàn)綜述34-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51

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