發(fā)布時間：2017-10-08 00:11

  本文關(guān)鍵詞：腎細胞癌中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與mRNA表達的研究

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【摘要】：目的:腎細胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)是一種比較常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,其發(fā)病率在泌尿系腫瘤中僅次于膀胱癌居第二位。由于RCC的惡性程度較高,初期癥狀不明顯,使得大量患者延誤診治,嚴重影響患者的治愈率和生存率。近年來大樣本的流行病學(xué)研究表明,RCC發(fā)病率呈逐年上升趨勢,且發(fā)病年齡日趨年輕化,因此RCC的早期診斷與治療是近期研究的熱點。表觀遺傳學(xué)是一門研究DNA序列不變而其基因表達發(fā)生遺傳性改變的遺傳學(xué)分支學(xué)科。表觀遺傳學(xué)改變表現(xiàn)為:DNA核苷酸胞嘧啶的甲基化修飾、組蛋白修飾、非編碼RNA干擾的調(diào)節(jié)等。近年來,DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的研究熱點。研究發(fā)現(xiàn),DNA甲基化的發(fā)生與許多癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),其中包括RCC。DACT2基因是DCAT家族的一員,其定位于人類染色體6q27。研究表明,DACT2基因的表達在泌尿系的輸尿管以及腎臟集合管的形成發(fā)育過程中十分重要。同時,DACT2基因具有控制集合管的形態(tài)學(xué)發(fā)生的作用。有文獻報道,DACT2基因能通過抑制Wnt信號通路進而抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展。同時,DACT2基因在肝癌、肺癌、胃癌、食管癌以及結(jié)腸癌等中均表達降低。國內(nèi)外已有大量的實驗研究表明,許多癌癥發(fā)生時,DACT2基因因啟動子區(qū)發(fā)生甲基化而表達沉默進而失去其抑制癌癥發(fā)生發(fā)展的作用。但是RCC的發(fā)生發(fā)展是否與DACT2基因發(fā)生甲基化相關(guān),迄今為止仍未見報道。本研究以59例RCC患者術(shù)后標本為研究對象,通過分析RCC組織、癌旁組織以及相應(yīng)正常腎組織中DACT2基因的啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及其mRNA的相對表達水平,并聯(lián)系臨床數(shù)據(jù)進行相關(guān)分析,旨在進一步揭示RCC的發(fā)病機制,為RCC的早期發(fā)現(xiàn)、診治與預(yù)后的判斷提供相應(yīng)的實驗理論依據(jù)。方法:1應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Methylation Specific PCR,MSP)檢測59例RCC患者術(shù)后標本的正常腎組織、癌旁組織及癌組織中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)。并對DACT2基因異常甲基化狀態(tài)與RCC的發(fā)生發(fā)展及臨床資料進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析。2用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcriptase-PCR,RT-PCR)技術(shù)檢測59例RCC患者術(shù)后標本的正常腎組織、癌旁組織及癌組織中DACT2基因的mRNA相對表達量。并對DACT2基因mRNA在RCC中的相對表達量與臨床資料進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析。3將59例RCC組織按照是否發(fā)生甲基化分為發(fā)生甲基化的RCC組(簡稱甲基化組)和未發(fā)生甲基化的RCC組(簡稱非甲基化組)。分析兩組間DCAT2基因mRNA相對表達量的差異,用以初步探討RCC組織中DACT2基因mRNA相對表達量降低是否與其甲基化的發(fā)生相關(guān)。4應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS16.0對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因在各組織中發(fā)生甲基化狀態(tài)的分析。根據(jù)MSP后電泳結(jié)果可將RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因的甲基化狀態(tài)分為:完全甲基化狀態(tài),不完全甲基化狀態(tài)和完全非甲基化狀態(tài)。其中完全甲基化狀態(tài)和不完全甲基化狀態(tài)記為甲基化陽性,完全非甲基化狀態(tài)記為甲基化陰性。DACT2基因在59例正常腎組織、59例癌旁組織和59例RCC組織中的甲基化發(fā)生率分別為5.08%(3/59),6.78%(4/59),45.76%(27/59)。三組間存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),RCC組織中DACT2基因甲基化陽性率明顯高于癌旁組織(P0.05)及正常組織(P0.05)。而癌旁組織及正常組織中DACT2基因甲基化發(fā)生率間比較未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);2 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)與臨床資料之間的研究。在各組織中DACT2基因啟動子區(qū)甲基化的發(fā)生率與患者的年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、Fuhrman分級(組織學(xué)分級)等臨床資料間均未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);3 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因mRNA在各組織中相對表達量的分析。DACT2基因在59例正常組織、59例癌旁組織和59例RCC組織中的相對表達量分別為(0.872±0.022,0.801±0.047,0.427±0.025)。正常及癌旁組織中DACT2基因mRNA的相對表達量均高于RCC組織,且有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。正常及癌旁組織中DACT2基因mRNA的相對表達量間未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);4 RCC患者術(shù)后標本中DACT2基因mRNA相對表達量與臨床資料之間的研究。在各組織中DACT2基因mRNA相對表達量與患者的年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、組織學(xué)分級等臨床資料間均未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);5甲基化組中DACT2基因的mRNA相對表達量顯著低于非甲基化組中DACT2基因的mRNA相對表達量(P0.05),具有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:1.RCC組織中DACT2基因啟動子區(qū)異常甲基化可能與RCC的發(fā)生有關(guān),但與RCC的臨床進展無關(guān)。2.RCC組織中DACT2基因相對表達量降低可能與RCC的發(fā)生有關(guān),但與RCC的進展無關(guān)。3.RCC組織中DACT2基因啟動子區(qū)異常甲基化可能是導(dǎo)致其mRNA表達降低的主要原因。
【關(guān)鍵詞】：腎細胞癌 DACT2 啟動子區(qū) 甲基化 聚合酶鏈反應(yīng) mRNA
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-25
• 附圖25-27
• 附表27-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-37
• 綜述 腎細胞癌中Wnt通路相關(guān)抑癌基因甲基化的研究進展37-48
• 參考文獻43-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻】

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1 Tadateru Maehata;Hiroaki Taniguchi;Hiroyuki Yamamoto;Katsuhiko Nosho;Yasushi Adachi;Nobuki Miyamoto;Chie Miyamoto;Noriyuki Akutsu;Satoshi Yamaoka;Fumio Itoh;;Transcriptional silencing of Dickkopf gene family by CpG island hypermethylation in human gastrointestinal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2008年17期

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本文編號：990867