本文關(guān)鍵詞：Pokemon對乳腺癌MCF-7細胞基因表達譜的影響

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【摘要】：[目的]應(yīng)用基因芯片和生物信息學(xué)技術(shù),研究Pokemon對乳腺癌MCF-7細胞全基因組表達的影響,探討Pokemon可能影響的細胞生物學(xué)功能。[方法]實驗分為兩個部分。第一部分以處理組穩(wěn)定性高表達Pokemon的MCF-7乳腺癌細胞及對照組穩(wěn)定性普通表達Pokemon的MCF-7乳腺癌細胞為研究對象,分別抽提其總RNA,應(yīng)用芯片技術(shù)檢測兩樣本的基因表達譜,之后對芯片數(shù)據(jù)進行聚類分析、Pathway分析以及GO分析等,并應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)驗證基因表達譜的結(jié)果。再次應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)對瞬時轉(zhuǎn)染了Pokemon質(zhì)粒的MCF-7細胞中TGF-β1和SMAD4的基因表達做進一步驗證。第二部分則是應(yīng)用組織芯片及免疫組織化學(xué)染色方法檢測208例乳腺癌及邊緣組織上的TGF-β1的表達,并分析其與臨床病理的關(guān)系。[結(jié)果]1.在穩(wěn)定性高表達Pokemon的MCF-7乳腺癌細胞中(OE組),基因表達譜芯片檢測結(jié)果顯示:與穩(wěn)定性普通表達Pokemon的MCF-7細胞(NC組)相比,有2079個基因有顯著差異性表達(倍數(shù)改變大于2.0倍),其中上調(diào)的有AKT1、WASF2等966個,下調(diào)的有TGF-β1、SMAD4等1113個,可見下調(diào)的基因數(shù)較上調(diào)的多。從細胞分化、增殖和轉(zhuǎn)移這三個方面進行聚類分析,發(fā)現(xiàn)在穩(wěn)定性高表達Pokemon的MCF-7細胞中,與細胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異性基因以下調(diào)基因為主,而與細胞分化相關(guān)的差異性基因以上調(diào)基因為多。2.對差異性基因進行Pathway分析,可見參與免疫反應(yīng)、適應(yīng)性免疫反應(yīng)、脂肪酸、甘油三酯、酮體代謝、腫瘤、P53信號通路的下調(diào)差異性基因占據(jù)主導(dǎo),而參與脂質(zhì)和脂蛋白代謝、凝血過程、發(fā)育生物學(xué)、MAPK通路的上調(diào)差異性基因較多。3.對差異性基因進行GO分析,可見從細胞組成方面分析,在細胞器中下調(diào)基因較多;從分子功能方面分析,參與磷酸基團轉(zhuǎn)移酶活性、酶調(diào)節(jié)活性的基因上調(diào)的較多,而在DNA結(jié)合以及與核苷酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的基因下調(diào)增多;從生物學(xué)過程方面分析,在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及與細胞表面受體結(jié)合進行細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)中下調(diào)基因居多,在解剖結(jié)構(gòu)發(fā)育、多細胞生物發(fā)育及系統(tǒng)發(fā)育過程中下調(diào)基因也較上調(diào)多,且在核酸代謝過程中下調(diào)基因仍然居多,而蛋白代謝中上下調(diào)基因未見明顯差異�？梢�,下調(diào)基因在大部分功能中占據(jù)主導(dǎo)。4.挑選出19個差異性表達基因,用Real-time PCR驗證其表達,結(jié)果與之前差異性表達譜的表達變化大致相同,說明基因表達譜結(jié)果可信度高。5.對MCF-7細胞瞬時轉(zhuǎn)染Pokemon質(zhì)粒后,用Real-time PCR再次檢測TGF-β1和SMAD4基因m RNA水平,與之前結(jié)果相同均下調(diào)。6.TGF-β1在乳腺癌中的表達高于邊緣組織中的表達,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。7.在乳腺癌組織中,TGF-β1的表達在不同的年齡、腫瘤類型、核分裂象及是否伴有淋巴轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中的差異結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。[結(jié)論]1、在乳腺癌MCF-7細胞中,Pokemon對參與細胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達以負性調(diào)控為主,而對參與細胞分化相關(guān)基因的表達以正向調(diào)控為主。2、Pokemon下調(diào)TGF-β1和SMAD4基因m RNA轉(zhuǎn)錄水平。3、TGF-β1在乳腺癌組織中呈現(xiàn)高表達,而在不同年齡、腫瘤類型、核分裂等級及是否伴有淋巴轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中的表達無明顯差異。
【關(guān)鍵詞】：Pokemon MCF-7細胞 基因表達譜 免疫組化
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要縮略語詞及英文索引10-12
• 前言12-14
• 第一部分Pokemon對乳腺癌MCF-7 細胞基因表達譜的影響14-42
• 1.1 實驗材料14-15
• 1.2 實驗方法15-24
• 1.3 實驗結(jié)果24-42
• 第二部分 乳腺癌組織中TGF-β1 的表達及與臨床病理的關(guān)系42-47
• 2.1 材料與方法42-44
• 2.2 實驗結(jié)果44-47
• 討論47-52
• 結(jié)論52-54
• 參考文獻54-60
• 綜述60-74
• 參考文獻68-74
• 附錄74-76
• 致謝76

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本文編號：978366