本文關(guān)鍵詞：Pokemon對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響

  更多相關(guān)文章： Pokemon MCF-7細(xì)胞 基因表達(dá)譜 免疫組化

【摘要】：[目的]應(yīng)用基因芯片和生物信息學(xué)技術(shù),研究Pokemon對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞全基因組表達(dá)的影響,探討Pokemon可能影響的細(xì)胞生物學(xué)功能。[方法]實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分。第一部分以處理組穩(wěn)定性高表達(dá)Pokemon的MCF-7乳腺癌細(xì)胞及對(duì)照組穩(wěn)定性普通表達(dá)Pokemon的MCF-7乳腺癌細(xì)胞為研究對(duì)象,分別抽提其總RNA,應(yīng)用芯片技術(shù)檢測(cè)兩樣本的基因表達(dá)譜,之后對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析、Pathway分析以及GO分析等,并應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證基因表達(dá)譜的結(jié)果。再次應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染了Pokemon質(zhì)粒的MCF-7細(xì)胞中TGF-β1和SMAD4的基因表達(dá)做進(jìn)一步驗(yàn)證。第二部分則是應(yīng)用組織芯片及免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)208例乳腺癌及邊緣組織上的TGF-β1的表達(dá),并分析其與臨床病理的關(guān)系。[結(jié)果]1.在穩(wěn)定性高表達(dá)Pokemon的MCF-7乳腺癌細(xì)胞中(OE組),基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)結(jié)果顯示:與穩(wěn)定性普通表達(dá)Pokemon的MCF-7細(xì)胞(NC組)相比,有2079個(gè)基因有顯著差異性表達(dá)(倍數(shù)改變大于2.0倍),其中上調(diào)的有AKT1、WASF2等966個(gè),下調(diào)的有TGF-β1、SMAD4等1113個(gè),可見(jiàn)下調(diào)的基因數(shù)較上調(diào)的多。從細(xì)胞分化、增殖和轉(zhuǎn)移這三個(gè)方面進(jìn)行聚類分析,發(fā)現(xiàn)在穩(wěn)定性高表達(dá)Pokemon的MCF-7細(xì)胞中,與細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異性基因以下調(diào)基因?yàn)橹?而與細(xì)胞分化相關(guān)的差異性基因以上調(diào)基因?yàn)槎唷?.對(duì)差異性基因進(jìn)行Pathway分析,可見(jiàn)參與免疫反應(yīng)、適應(yīng)性免疫反應(yīng)、脂肪酸、甘油三酯、酮體代謝、腫瘤、P53信號(hào)通路的下調(diào)差異性基因占據(jù)主導(dǎo),而參與脂質(zhì)和脂蛋白代謝、凝血過(guò)程、發(fā)育生物學(xué)、MAPK通路的上調(diào)差異性基因較多。3.對(duì)差異性基因進(jìn)行GO分析,可見(jiàn)從細(xì)胞組成方面分析,在細(xì)胞器中下調(diào)基因較多;從分子功能方面分析,參與磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移酶活性、酶調(diào)節(jié)活性的基因上調(diào)的較多,而在DNA結(jié)合以及與核苷酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的基因下調(diào)增多;從生物學(xué)過(guò)程方面分析,在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及與細(xì)胞表面受體結(jié)合進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)中下調(diào)基因居多,在解剖結(jié)構(gòu)發(fā)育、多細(xì)胞生物發(fā)育及系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中下調(diào)基因也較上調(diào)多,且在核酸代謝過(guò)程中下調(diào)基因仍然居多,而蛋白代謝中上下調(diào)基因未見(jiàn)明顯差異�？梢�(jiàn),下調(diào)基因在大部分功能中占據(jù)主導(dǎo)。4.挑選出19個(gè)差異性表達(dá)基因,用Real-time PCR驗(yàn)證其表達(dá),結(jié)果與之前差異性表達(dá)譜的表達(dá)變化大致相同,說(shuō)明基因表達(dá)譜結(jié)果可信度高。5.對(duì)MCF-7細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Pokemon質(zhì)粒后,用Real-time PCR再次檢測(cè)TGF-β1和SMAD4基因m RNA水平,與之前結(jié)果相同均下調(diào)。6.TGF-β1在乳腺癌中的表達(dá)高于邊緣組織中的表達(dá),且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。7.在乳腺癌組織中,TGF-β1的表達(dá)在不同的年齡、腫瘤類型、核分裂象及是否伴有淋巴轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中的差異結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。[結(jié)論]1、在乳腺癌MCF-7細(xì)胞中,Pokemon對(duì)參與細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)以負(fù)性調(diào)控為主,而對(duì)參與細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)以正向調(diào)控為主。2、Pokemon下調(diào)TGF-β1和SMAD4基因m RNA轉(zhuǎn)錄水平。3、TGF-β1在乳腺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá),而在不同年齡、腫瘤類型、核分裂等級(jí)及是否伴有淋巴轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中的表達(dá)無(wú)明顯差異。
【關(guān)鍵詞】：Pokemon MCF-7細(xì)胞 基因表達(dá)譜 免疫組化
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要縮略語(yǔ)詞及英文索引10-12
• 前言12-14
• 第一部分Pokemon對(duì)乳腺癌MCF-7 細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響14-42
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-42
• 第二部分 乳腺癌組織中TGF-β1 的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系42-47
• 2.1 材料與方法42-44
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-47
• 討論47-52
• 結(jié)論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 綜述60-74
• 參考文獻(xiàn)68-74
• 附錄74-76
• 致謝76

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