本文關(guān)鍵詞：吳茱萸堿對(duì)人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM的影響

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【摘要】：研究背景 卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤之一,其中發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌,占婦科惡性腫瘤的第三位,目前其治療手段主要是手術(shù)和化療,但長(zhǎng)期以來(lái)其5年存活率始終停留在30%,死亡率已居女性生殖系統(tǒng)腫瘤的首位。因此非常迫切的需要尋找到新的有效的抗癌藥物。吳茱萸堿是中藥吳茱萸主要生物活性成分之一,已有報(bào)道吳茱萸堿有血管舒張,抗炎及鎮(zhèn)痛等作用。另外吳茱萸堿體外能明顯抑制人前列腺癌細(xì)胞LNCaP、 PC-3、人黑色素瘤細(xì)胞A375-S2、人白血病細(xì)胞U937、人宮頸癌Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)。然而吳茱萸堿對(duì)卵巢癌細(xì)胞的作用和作用機(jī)制均不明確。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究吳茱萸堿對(duì)人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM增殖、周期、凋亡和轉(zhuǎn)移的影響,并初步探討其作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法 1.用MTT法檢測(cè)吳茱萸堿在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞HO-8910PM體外增殖的影響； 2.用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)經(jīng)吳茱萸堿處理后HO-8910PM細(xì)胞的細(xì)胞周期變化； 3.用AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)吳茱萸堿誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生； 4.應(yīng)用Transwell體外侵襲和遷移模型檢測(cè)吳茱萸堿對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲的抑制作用; 5.用western blot方法分析周期、凋亡及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.吳茱萸堿可以明顯抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖,且呈時(shí)間依賴性和濃度依賴性。與空白對(duì)照組比較,0.625μM～10μM吳茱萸堿作用24h后,HO-8910PM細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制并不明顯。但在作用48h、72h和96h后,增殖抑制率非常顯著,其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性和時(shí)間依賴性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.吳茱萸堿將卵巢癌細(xì)胞阻滯于G2/M期。流式細(xì)胞分析術(shù)結(jié)果顯示,吳茱萸堿作用于HO-8910PM細(xì)胞24h后,各濃度組(OμM,1.25μM,2.5μM和5μM)各周期內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量發(fā)生明顯變化,隨著藥物濃度的增加,G0/G1期細(xì)胞明顯減少而G2/M期細(xì)胞逐漸增加,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示吳茱萸堿作用24h后,CyclinB1蛋白表達(dá)水平明顯上升。 3.吳茱萸堿可以通過(guò)外源性死亡受體凋亡通路和內(nèi)源性線粒體凋亡通路誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡。流式細(xì)胞分析術(shù)結(jié)果顯示,吳茱萸堿各濃度組(1.25μM,2.5μM和5μM)作用于HO-8910PM細(xì)胞48h后,凋亡細(xì)胞顯著增加,且具有藥物濃度依賴性。Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示吳茱萸堿作用24h后,HO-8910PM細(xì)胞中Cleaved Caspase-3、8、9及bax表達(dá)量明顯上升,而B(niǎo)cl-2表達(dá)量明顯下降。 4.吳茱萸堿能抑制卵巢癌細(xì)胞侵襲和遷移能力。體外遷移能力檢測(cè)結(jié)果顯示,吳茱萸堿作用于HO-8910PM細(xì)胞12h后,各濃度組(0.625μM,1.25μM和2.51μM)細(xì)胞遷移至下室的細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組明顯減少(P0.05),并呈劑量依賴性。體外侵襲能力檢測(cè)結(jié)果顯示,吳茱萸堿作用于HO-8910PM細(xì)胞24h后,各濃度組(0.625μM,1.25μM和2.5μM)穿膜細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組有明顯減少(P0.05),并呈劑量依賴性。Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示吳茱萸堿顯著抑制了HO-8910PM細(xì)胞總FAK和p-FAK表達(dá)(P0.05),同時(shí)吳茱萸堿可抑制MMP-2表達(dá)(P0.05),但對(duì)MMP-9無(wú)顯著影響(P0.05)。 5.吳茱萸堿可能通過(guò)PI3K/Akt和MAPKs信號(hào)通路影響卵巢癌細(xì)胞的增殖,生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示吳茱萸堿顯著抑制HO-8910PM細(xì)胞PI3K, p-PI3K, Akt,p-Akt, ERK1/2MAPK, p38MAPK蛋白表達(dá)。 結(jié)論 吳茱萸堿能通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞G2/M期阻滯和細(xì)胞凋亡而抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖,同時(shí)吳茱萸堿還能抑制細(xì)胞的遷移和侵襲,這些作用可能與PI3K/Akt、 ERK1/2MAPK和p38MAPK有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：吳茱萸堿 HO-8910PM 周期 凋亡 遷移 侵襲 PI3K/Akt
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文縮略詞11-14
• 引言14-16
• 1. 材料16-20
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-43
• 5. 討論43-49
• 6. 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 綜述54-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 張衛(wèi)國(guó),史雪勤,王小虎,謝國(guó)建,李勝保,吳清明;不同濃度DMSO對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年11期

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本文編號(hào)：976570