本文關(guān)鍵詞：吳茱萸堿對人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞HO-8910PM的影響

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【摘要】：研究背景 卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一,其中發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌,占婦科惡性腫瘤的第三位,目前其治療手段主要是手術(shù)和化療,但長期以來其5年存活率始終停留在30%,死亡率已居女性生殖系統(tǒng)腫瘤的首位。因此非常迫切的需要尋找到新的有效的抗癌藥物。吳茱萸堿是中藥吳茱萸主要生物活性成分之一,已有報道吳茱萸堿有血管舒張,抗炎及鎮(zhèn)痛等作用。另外吳茱萸堿體外能明顯抑制人前列腺癌細胞LNCaP、 PC-3、人黑色素瘤細胞A375-S2、人白血病細胞U937、人宮頸癌Hela細胞的生長。然而吳茱萸堿對卵巢癌細胞的作用和作用機制均不明確。 實驗目的 研究吳茱萸堿對人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞HO-8910PM增殖、周期、凋亡和轉(zhuǎn)移的影響,并初步探討其作用機制。 實驗方法 1.用MTT法檢測吳茱萸堿在不同時間點對人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞HO-8910PM體外增殖的影響； 2.用流式細胞術(shù)(FCM)檢測經(jīng)吳茱萸堿處理后HO-8910PM細胞的細胞周期變化； 3.用AnnexinV/PI雙染法檢測吳茱萸堿誘導細胞凋亡的發(fā)生； 4.應用Transwell體外侵襲和遷移模型檢測吳茱萸堿對細胞遷移和侵襲的抑制作用; 5.用western blot方法分析周期、凋亡及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的變化。 實驗結(jié)果 1.吳茱萸堿可以明顯抑制卵巢癌細胞的增殖,且呈時間依賴性和濃度依賴性。與空白對照組比較,0.625μM～10μM吳茱萸堿作用24h后,HO-8910PM細胞的生長抑制并不明顯。但在作用48h、72h和96h后,增殖抑制率非常顯著,其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性和時間依賴性,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.吳茱萸堿將卵巢癌細胞阻滯于G2/M期。流式細胞分析術(shù)結(jié)果顯示,吳茱萸堿作用于HO-8910PM細胞24h后,各濃度組(OμM,1.25μM,2.5μM和5μM)各周期內(nèi)的細胞數(shù)量發(fā)生明顯變化,隨著藥物濃度的增加,G0/G1期細胞明顯減少而G2/M期細胞逐漸增加,其差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Western Blot實驗顯示吳茱萸堿作用24h后,CyclinB1蛋白表達水平明顯上升。 3.吳茱萸堿可以通過外源性死亡受體凋亡通路和內(nèi)源性線粒體凋亡通路誘導卵巢癌細胞凋亡。流式細胞分析術(shù)結(jié)果顯示,吳茱萸堿各濃度組(1.25μM,2.5μM和5μM)作用于HO-8910PM細胞48h后,凋亡細胞顯著增加,且具有藥物濃度依賴性。Western Blot實驗顯示吳茱萸堿作用24h后,HO-8910PM細胞中Cleaved Caspase-3、8、9及bax表達量明顯上升,而Bcl-2表達量明顯下降。 4.吳茱萸堿能抑制卵巢癌細胞侵襲和遷移能力。體外遷移能力檢測結(jié)果顯示,吳茱萸堿作用于HO-8910PM細胞12h后,各濃度組(0.625μM,1.25μM和2.51μM)細胞遷移至下室的細胞數(shù)量較對照組明顯減少(P0.05),并呈劑量依賴性。體外侵襲能力檢測結(jié)果顯示,吳茱萸堿作用于HO-8910PM細胞24h后,各濃度組(0.625μM,1.25μM和2.5μM)穿膜細胞數(shù)較對照組有明顯減少(P0.05),并呈劑量依賴性。Western Blot實驗顯示吳茱萸堿顯著抑制了HO-8910PM細胞總FAK和p-FAK表達(P0.05),同時吳茱萸堿可抑制MMP-2表達(P0.05),但對MMP-9無顯著影響(P0.05)。 5.吳茱萸堿可能通過PI3K/Akt和MAPKs信號通路影響卵巢癌細胞的增殖,生長和轉(zhuǎn)移。Western Blot實驗顯示吳茱萸堿顯著抑制HO-8910PM細胞PI3K, p-PI3K, Akt,p-Akt, ERK1/2MAPK, p38MAPK蛋白表達。 結(jié)論 吳茱萸堿能通過誘導細胞G2/M期阻滯和細胞凋亡而抑制卵巢癌細胞的增殖,同時吳茱萸堿還能抑制細胞的遷移和侵襲,這些作用可能與PI3K/Akt、 ERK1/2MAPK和p38MAPK有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：吳茱萸堿 HO-8910PM 周期 凋亡 遷移 侵襲 PI3K/Akt
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文縮略詞11-14
• 引言14-16
• 1. 材料16-20
• 2. 實驗方法20-27
• 3. 統(tǒng)計學分析27-28
• 4. 實驗結(jié)果28-43
• 5. 討論43-49
• 6. 結(jié)論49-50
• 參考文獻50-54
• 綜述54-65
• 參考文獻60-65
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：976570