本文關(guān)鍵詞：PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究

  更多相關(guān)文章： PLD4 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 結(jié)腸癌 抗腫瘤

【摘要】：目的PLD4是一種新蛋白,屬于PLD家族中的一員。PLD4由于缺乏PX和PH域,所以并沒有PLD酶活性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明雖然PLD4在體內(nèi)廣泛表達(dá),但在免疫密切相關(guān)的組織中,肝臟、脾臟、腦組織、淋巴結(jié)的PLD4表達(dá)水平相對(duì)較高。研究發(fā)現(xiàn)小鼠大腦皮質(zhì)的原始小膠質(zhì)細(xì)胞存在PLD4表達(dá),LPS刺激后小膠質(zhì)細(xì)胞中PLD4表達(dá)顯著提高,并發(fā)現(xiàn)PLD4可促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞活化。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在識(shí)別和殺傷結(jié)腸癌過程中具有重要作用。雖然小膠質(zhì)細(xì)胞和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞具有免疫學(xué)共性,但PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中的表達(dá)及具體功能尚未有相關(guān)研究。故本研究擬探討PLD4在結(jié)腸癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中的表達(dá)及功能。方法(1)結(jié)腸癌組織中檢測(cè)PLD4表達(dá)采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)110例結(jié)腸癌患者組織標(biāo)本中PLD4表達(dá)情況。并在同一組織連續(xù)石蠟切片中,采用CD68標(biāo)記結(jié)腸癌組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞,并研究PLD4陽(yáng)性表達(dá)與CD68陽(yáng)性巨噬細(xì)胞間聯(lián)系。采用Western blot檢測(cè)12例結(jié)腸癌患者癌組織及癌旁組織中PLD4蛋白表達(dá)水平。(2)THP-1腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞模型的建立采用THP-1細(xì)胞作為巨噬細(xì)胞模型,首先THP-1細(xì)胞加入PMA誘導(dǎo)成為巨噬細(xì)胞,隨后加入LPS聯(lián)合IFN-γ誘導(dǎo)成為M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞,加入IL-4誘導(dǎo)成為M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。采用分子表面標(biāo)志CD86及CD16鑒定M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞;采用ELISA檢測(cè)在巨噬細(xì)胞,M1型巨噬細(xì)胞及M2型巨噬細(xì)胞中促炎癥因子IL-1,IL-8,IL-6及TNF-α表達(dá)水平。(3)THP-1巨噬細(xì)胞中存在PLD4表達(dá)采用Western blot檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞模型中PLD4蛋白表達(dá)水平。采用RT-PCR檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞模型中PLD4分子表達(dá)水平。(4)PLD4在M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中的功能研究采用si RNA干擾PLD4在巨噬細(xì)胞中的表達(dá),Western blot檢測(cè)si RNA干擾后M1型巨噬細(xì)胞模型中PLD4蛋白抑制水平。QRT-PCR檢測(cè)si RNA干擾后M1型巨噬細(xì)胞模型中PLD4分子抑制水平。采用ELISA檢測(cè)在si RNA干擾后M1型巨噬細(xì)胞促炎癥因子IL-1,IL-6及TNF-α表達(dá)水平,以研究巨噬細(xì)胞活化功能。(5)PLD4干擾后的M1型巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞影響分別收集PLD4干擾組與對(duì)照組條件培養(yǎng)基與HT-29、HCT116、SW620結(jié)腸癌細(xì)胞共培養(yǎng),采用CCK8細(xì)胞增殖試劑盒,細(xì)胞凋亡試劑盒及細(xì)胞周期試劑盒檢測(cè)條件培養(yǎng)基對(duì)三種結(jié)腸癌細(xì)胞株的細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期的影響。結(jié)果(1)PLD4在結(jié)腸癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞表達(dá)免疫組化發(fā)現(xiàn)PLD4呈環(huán)狀表達(dá)于結(jié)腸癌組織的間質(zhì)細(xì)胞及淋巴結(jié)細(xì)胞胞質(zhì)中。在同一組織連續(xù)切片中發(fā)現(xiàn)部分CD68標(biāo)記的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞存在PLD4陽(yáng)性表達(dá)。分析110例結(jié)腸癌石蠟組織切片發(fā)現(xiàn)PLD4的陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)腸癌臨床分期相關(guān)(P0.01),與性別、年齡、病理分期及轉(zhuǎn)移不相關(guān)。在12例結(jié)腸癌手術(shù)標(biāo)本中,Western blot結(jié)果提示雖然結(jié)腸癌及癌旁組織中均存在PLD4表達(dá),但PLD4在腫瘤組織中表達(dá)水平高于癌旁。(2)PLD4存在于M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞THP-1細(xì)胞作為細(xì)胞模型誘導(dǎo)成為巨噬細(xì)胞、M1巨噬細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)M1巨噬細(xì)胞高表達(dá)MHC-Ⅱ類分子CD16及CD86。同時(shí)EILISA結(jié)果表明M1巨噬細(xì)胞相對(duì)于M2及巨噬細(xì)胞表達(dá)更高水平IL-1,IL-8,IL-6及TNF-α等促炎因子。Western blot蛋白水平及RT-PCR分子水平分別發(fā)現(xiàn)PLD4表達(dá)于M1腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞;(3)PLD4參與M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的活化si RNA干擾巨噬細(xì)胞中PLD4表達(dá)后,Western blot及QRT-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)si RNA干擾后M1型巨噬細(xì)胞模型中PLD4表達(dá)明顯受到抑制。同時(shí)檢測(cè)si RNA干擾后檢測(cè)M1型巨噬細(xì)胞促炎癥因子IL-1,IL-6及TNF-α表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)以上促炎因子水平明顯降低。(4)PLD4介導(dǎo)M1型巨噬細(xì)胞發(fā)揮抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖作用采用干擾PLD4表達(dá)組及對(duì)照組M1型巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基分別培養(yǎng)HT-29、HCT116、SW620細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)PLD4被抑制時(shí)M1型巨噬細(xì)胞無法正�；罨�,導(dǎo)致M1巨噬細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞殺傷作用減弱。結(jié)論(1)本研究證實(shí)結(jié)腸癌組織腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞存在PLD4表達(dá);(2)PLD4參與體外M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞正�；罨�;(3)PLD4通過介導(dǎo)M1型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞活化在體外發(fā)揮抑制結(jié)腸癌細(xì)胞作用。
【關(guān)鍵詞】：PLD4 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 結(jié)腸癌 抗腫瘤
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-14
• 第1章 前言14-19
• 1.1 結(jié)腸癌與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞14-15
• 1.2 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞15-16
• 1.3 巨噬細(xì)胞與小膠質(zhì)細(xì)胞16-17
• 1.4 PLD4 主要功能17-19
• 第2章 材料19-24
• 2.1 相關(guān)儀器19
• 2.2 結(jié)腸癌組織、實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞、試劑及配方19-24
• 2.2.1 結(jié)腸癌組織標(biāo)本19
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞株19-20
• 2.2.3 即用型試劑20
• 2.2.4 常用試劑耗材20
• 2.2.5 主要試劑配方20-24
• 第3章 方法24-41
• 3.1 結(jié)腸癌組織PLD4 免疫組化染色24-25
• 3.2 結(jié)腸癌組織標(biāo)本PLD4 Western bloting25-27
• 3.3 細(xì)胞培養(yǎng)27-29
• 3.4 THP-1 誘導(dǎo)成為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞29
• 3.5 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的鑒定29-30
• 3.6 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白提取及PLD4 Western bloting30-31
• 3.7 M1 型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞反轉(zhuǎn)錄-PCR31-33
• 3.8 ELISA檢測(cè)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子分泌33-34
• 3.9 M1 型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞PLD4 siRNA干擾34-35
• 3.10 M1 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞實(shí)時(shí)定量-PCR35-37
• 3.11 條件培養(yǎng)基的制備37-38
• 3.12 條件培養(yǎng)基中培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞38
• 3.13 結(jié)腸癌細(xì)胞增殖檢測(cè)38-39
• 3.14 結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡檢測(cè)39
• 3.15 結(jié)腸癌細(xì)胞周期檢測(cè)39-40
• 3.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法40-41
• 第4章 結(jié)果41-56
• 4.1 結(jié)腸癌組織中存在PLD4 表達(dá)41-45
• 4.2 體外THP-1 誘導(dǎo)成為巨噬細(xì)胞45-47
• 4.3 PLD4 主要表達(dá)于M1 型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞47-48
• 4.4 PLD4 參與M1 型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞活化48-50
• 4.5 PLD4 介導(dǎo)M1 型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞體外抑制結(jié)腸癌增殖50-56
• 第5章 討論56-61
• 全文總結(jié)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-68
• 文獻(xiàn)綜述68-79
• 參考文獻(xiàn)75-79
• 附錄：中英文名詞縮略79-81
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果81-82
• 致謝82

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡(jiǎn)單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)內(nèi)分泌對(duì)巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國(guó)明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對(duì)于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國(guó)胃癌學(xué)術(shù)會(huì)議暨第二屆陽(yáng)光長(zhǎng)城腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國(guó)食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對(duì)心臟收縮功能的抑制作用及其對(duì)巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對(duì)巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動(dòng)脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 曹爽;高糖對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細(xì)胞荷瘤小鼠抑制巨噬細(xì)胞CCL5分泌的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李美玲;雙酚A對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號(hào)：970433