本文關(guān)鍵詞：腎癌中PDGF-B的表達(dá)抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移

  更多相關(guān)文章： 血小板衍生生長(zhǎng)因子-B 周細(xì)胞 血管生成 腫瘤 靶向治療 腎細(xì)胞癌

【摘要】：目的:血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)-B的表達(dá)能促進(jìn)血管壁附近的周細(xì)胞募集,從而增加其結(jié)構(gòu)上的穩(wěn)定性。周細(xì)胞募集所致覆蓋率增加可能導(dǎo)致抗血管新生藥物產(chǎn)生耐藥,因而,聯(lián)合針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞與周細(xì)胞聯(lián)合靶向治療已經(jīng)提出。但是,周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞是調(diào)節(jié)血管生成、穩(wěn)定與重塑的中心環(huán)節(jié),兩者之間的相互作用是非常復(fù)雜的。在我們研究中,重點(diǎn)評(píng)估了由PDGF-B介導(dǎo)的周細(xì)胞募集這一作用對(duì)腎細(xì)胞癌(RCC)腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展的影響。方法:1.將含有PDGF-B基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到ACHN細(xì)胞系(人類腎癌細(xì)胞系之一),用Western-blotting來驗(yàn)證PDGF-B在ACHN細(xì)胞系的過表達(dá)。2.MTT實(shí)驗(yàn)來對(duì)轉(zhuǎn)染PDGF-B的ACHN細(xì)胞OD值進(jìn)行測(cè)量,從而分析腫瘤細(xì)胞ACHN增殖情況。3.用Western-blotting來測(cè)量VSMCs(壁細(xì)胞)和HUVECs(內(nèi)皮細(xì)胞)細(xì)胞的磷酸化PDGFR-β(p-PDGFR-β)表達(dá)水平。4.相關(guān)實(shí)驗(yàn)來分析ACHN細(xì)胞分泌PDGF-B對(duì)VSMCs(周細(xì)胞)和HUVECs(內(nèi)皮細(xì)胞)功能的影響。FCM方法分析PDGF-B對(duì)VSMCs和HUVECs兩種細(xì)胞周期分布的不同影響;Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PDGF-B對(duì)VSMCs和HUVECs兩細(xì)胞的遷移能力影響;管腔形成實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)PDGF-B對(duì)VSMCs和HUVECs管腔形成能力影響。5.將PDGF-B轉(zhuǎn)染的和空轉(zhuǎn)染的ACHN細(xì)胞注射到小鼠的左側(cè)腹股溝,通過每3天測(cè)量腫瘤直徑來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組腫瘤大小的比較。6.使用免疫組織化學(xué)(抗Ki-67)和組織形態(tài)學(xué)(HE染色)評(píng)估小鼠移植瘤的腫瘤細(xì)胞增殖和進(jìn)展(浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移)。7.Microarray探討Van Andel研究所中腎透明細(xì)胞癌患者PDGF-B表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響。結(jié)果:1.Western-blotting結(jié)果顯示,經(jīng)過PDGF-B基因轉(zhuǎn)染的ACHN細(xì)胞PDGF-B表達(dá)明顯上調(diào)。2.MTT測(cè)定表明PDGF-B轉(zhuǎn)染的ACHN與空轉(zhuǎn)染的ACHN細(xì)胞的OD值之間沒有顯著差異(P0.05)。3.與PDGF-B過表達(dá)培養(yǎng)基共培養(yǎng)后,VSMCs中可檢測(cè)出p-PDGFR-β表達(dá)的上調(diào)。4.FCM分析表明,PDGF-B過表達(dá)組中,VSMCs往往更多傾向于S和G2/M期。PDGF-B過表達(dá)組中,VSMCs的遷移能力顯著(P0.001)大于另外兩組(加入空轉(zhuǎn)染ACHN細(xì)胞培養(yǎng)基;加入PDGF-B抑制劑的ACHN培養(yǎng)基)。且只有在PDGF-B過表達(dá)的培養(yǎng)基中VSMCs方具有管腔形成能力。5.PDGF-B轉(zhuǎn)染的腎癌細(xì)胞ACHN的移植瘤的腫瘤平均體積小于對(duì)照組(P=0.028)。6.免疫組化表明:PDGF-B過表達(dá)組的小鼠腫瘤細(xì)胞的Ki-67陽性表達(dá)細(xì)胞明顯少于對(duì)照組(P=0.019)。PDGF-B過表達(dá)的腫瘤,只有一只小鼠存在腫瘤周圍的軟組織浸潤(rùn)。而對(duì)照組有更多轉(zhuǎn)移或浸潤(rùn)現(xiàn)象發(fā)生。7.Microarray分析表明:PDGF-B高表達(dá)組患者預(yù)后明顯優(yōu)于低PDGF-B組(P0.001)。結(jié)論:1.體外實(shí)驗(yàn)中,腫瘤細(xì)胞PDGF-B過表達(dá)增加周細(xì)胞上PDGFR-β表達(dá)水平,通過PDGF-B/PDGFR-β信號(hào)通路增加周細(xì)胞增殖、遷移和管形成能力。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明PDGF-B過表達(dá)可以抑制腫瘤生長(zhǎng)以及腫瘤細(xì)胞增殖。由腫瘤細(xì)胞分泌PDGF-B可能通過增加周細(xì)胞募集從而促使腫瘤血管正�；鴾p少腫瘤轉(zhuǎn)移和局部浸潤(rùn)的發(fā)生。3.我們對(duì)腎癌患者的Microarray研究分析表明,PDGF-B高表達(dá)組患者預(yù)后明顯優(yōu)于低PDGF-B組。因此針對(duì)周細(xì)胞的靶向治療在腫瘤治療中存在爭(zhēng)議,需要進(jìn)一步深入研究周細(xì)胞在腎癌中的復(fù)雜作用。
【關(guān)鍵詞】：血小板衍生生長(zhǎng)因子-B 周細(xì)胞 血管生成 腫瘤 靶向治療 腎細(xì)胞癌
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 1 對(duì)象和方法15-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象15-18
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系及細(xì)胞15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑15-17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-25
• 1.2.1 體外實(shí)驗(yàn)18-23
• 1.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)23-24
• 1.2.3 Microarray檢測(cè)PDGF-B表達(dá)與預(yù)后關(guān)系的研究24-25
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法25
• 2 結(jié)果25-35
• 2.1 體外實(shí)驗(yàn)25-31
• 2.1.1 腎癌細(xì)胞中PDGF-B的基礎(chǔ)表達(dá)量25
• 2.1.2 PDGF-B轉(zhuǎn)染ACHN后PDGF-B的過表達(dá)檢測(cè)25-26
• 2.1.3 PDGF-B轉(zhuǎn)染的ACHN細(xì)胞的MTT增殖實(shí)驗(yàn)26-27
• 2.1.4 內(nèi)皮細(xì)胞與周細(xì)胞共培養(yǎng)后p-PDGFR-β 表達(dá)量檢測(cè)27
• 2.1.5 PDGF-B對(duì)周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞周期影響27-29
• 2.1.6 過表達(dá)PDGF-B腎癌細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)血管周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響29-30
• 2.1.7 過表達(dá)PDGF-B腎癌細(xì)胞對(duì)血管對(duì)周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成能力的影響30-31
• 2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)31-33
• 2.2.1 PDGF-B對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響31-32
• 2.2.2 免疫組化檢測(cè)PDGF-B對(duì)小鼠移植瘤腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響32
• 2.2.3 HE染色檢測(cè)PDGF-B對(duì)腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的影響32-33
• 2.3 Microarray研究腎癌患者PDGF-B的表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響33-35
• 3 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 綜述 周細(xì)胞在腫瘤血管生成中的作用45-61
• 綜述參考文獻(xiàn)56-61
• 致謝61

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