本文關(guān)鍵詞：KLF17在食管鱗癌中的蛋白表達(dá)及其對Eca109細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響

  更多相關(guān)文章： KLF17 食管鱗癌 Eca109細(xì)胞

【摘要】：目的研究Kruppel樣轉(zhuǎn)錄及其調(diào)控家族的成員KLF17蛋白在不同和食管鱗癌組織中的表達(dá)及與其患者臨床病理特征間的關(guān)系；慢病毒介導(dǎo)過表達(dá)KLF17對Eca109細(xì)胞遷移、侵襲的能力的影響及作用的機(jī)制。為KLF17在食管鱗癌的臨床運(yùn)用中打下一定基礎(chǔ)。方法蛋白免疫組化驗證KLF17在44例食管鱗癌及37例癌旁正常食管上皮中的表達(dá)；構(gòu)建KLF17慢病毒過表達(dá)載體,慢病毒以不同的感染復(fù)數(shù)(MOI)感染Eca109細(xì)胞,根據(jù)綠色熒光蛋白的表達(dá)量選取最適合的MOI值；實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real—time PCR)檢測KLF17mRNA的表達(dá)、免疫蛋白印跡(western blotting)法檢測KLF17、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表達(dá)；過表達(dá)KLF17的Eca109細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變通過細(xì)胞劃痕實驗及體外transwell實驗證明。結(jié)果KLF17在食管鱗癌中的蛋白表達(dá)明顯低于食管正常上皮中的表達(dá)(P0.05)；KLF17蛋白表達(dá)與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān)(P0.05)；MOI值為50轉(zhuǎn)染Eca109細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率可達(dá)95%以上；QRT-PCR及western blotting結(jié)果顯示Ad-KLF17組KLF17及上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)明顯高于Ad-GFP組及CON組,而間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin表達(dá)明顯低于Ad-GFP組及CON組；劃痕實驗結(jié)果顯示Ad-KLF17組細(xì)胞48h遷移距離為(137.2±8.24)um,明顯短于Ad-GFP組(228.6±22.48)um和CON組(221.4±25.92)um(P0.05)；體外transwell實驗結(jié)果顯示Ad-KLF17組細(xì)胞24小時穿過小孔數(shù)量為(27±3.2)個,明顯少于Ad-GFP組(54.2±4.3)個及CON組(58±4.5)個(P0.05)。結(jié)論食管鱗癌在發(fā)生發(fā)展中可能會伴隨KLF17的表達(dá)改變起重要作用,在食管鱗癌組織中KLF17蛋白質(zhì)水平的表達(dá)癌旁正常組織相比明顯降低,其與臨床病理資料關(guān)聯(lián)密切,過表達(dá)基因KLF17能抑制Eca109細(xì)胞遷移及侵襲能力,機(jī)制可能與其抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：KLF17 食管鱗癌 Eca109細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-23
• 1.1 材料13-15
• 1.1.1 臨床病理資料13
• 1.1.2 細(xì)胞與慢病毒13
• 1.1.3 主要試劑13-14
• 1.1.4 主要儀器14
• 1.1.5 主要溶液配制14-15
• 1.2 方法15-23
• 1.2.1 食管鱗癌標(biāo)本的收集與臨床病理資料歸類16
• 1.2.2 食管鱗癌Eca109細(xì)胞的培養(yǎng)16-17
• 1.2.3 實時熒光定量PCR檢測17-19
• 1.2.4 蛋白免疫印跡實驗(western-blotting)19-21
• 1.2.5 過表達(dá)KLF17慢病毒的轉(zhuǎn)染與實驗分組21
• 1.2.6 組織免疫組化實驗21-22
• 1.2.7 細(xì)胞劃痕實驗22
• 1.2.8 體外Transwell實驗22-23
• 1.2.9 統(tǒng)計學(xué)分類處理23
• 2 結(jié)果23-26
• 2.1 KLF17蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系23-25
• 2.2 過表達(dá)KLF17基因慢病毒對Eca109細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率25
• 2.3 慢病毒對Eca109細(xì)胞中KLF17mRNA、蛋白表達(dá)的影響25
• 2.4 過表達(dá)KLF17能抑制Eca109細(xì)胞的遷移能力25
• 2.5 KLF17抑制Eca109細(xì)胞的侵襲能力25-26
• 2.6 KLF17對Eca109細(xì)胞中EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響26
• 3 討論26-30
• 4 附圖30-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 文獻(xiàn)綜述38-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 致謝46-47
• 學(xué)位期間發(fā)裹的學(xué)術(shù)論文目錄47

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊建斌,王庸晉,董偉華,孔天翰,楊紅艷,宋紅霞,劉桂亭;東亞鉗蝎毒抗癌多肽對Eca109 細(xì)胞和HeLa 細(xì)胞的毒性作用[J];中國病理生理雜志;1999年12期

2 張玉軍,齊鳳英,劉淑霞,左連富,郭建文,劉江惠;戊地昔布對人食管癌Eca109細(xì)胞系的抑制作用及其調(diào)控[J];中國腫瘤臨床;2005年09期

3 安玉會,孫含笑,祝慶番,徐霞,鄭惠良,楊瑩;蘆筍口服液和飲料對食管癌ECa109細(xì)胞抑制作用的初步觀察[J];癌癥;1989年04期

4 劉玲玲;劉浩;王迪生;邢亞群;李子廣;孫國平;;褪黑素聯(lián)合順鉑對人食管癌Eca109細(xì)胞株的增殖抑制作用研究[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年12期

5 張玉軍;劉淑霞;齊鳳英;左連富;郭建文;;戊地昔布誘導(dǎo)人食管癌Eca109細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[J];中國藥理學(xué)通報;2006年05期

6 韓忠敏;董衛(wèi)華;;白藜蘆醇對食管癌Eca109細(xì)胞的抑制作用研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年04期

7 趙生霞;黃燕燕;慕曉玲;;食管癌Eca109單克隆細(xì)胞株的干細(xì)胞特性研究[J];石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2013年02期

8 馬麗萍;趙培榮;田愛琴;張書紅;;夏枯草對Eca109細(xì)胞的影響[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2006年03期

9 侯俊民,束永前,趙志泉;紫杉醇對人食管癌Eca109細(xì)胞株生長的影響[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年03期

10 李永軍;孫曉慧;時東彥;劉志華;;白藜蘆醇抑制食管癌Eca109細(xì)胞增殖的初步研究[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2008年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 景紹武;低氧對食管癌Eca109細(xì)胞體內(nèi)外侵襲轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫曉慧;白藜蘆醇誘導(dǎo)人食管Eca109細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因表達(dá)的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

2 趙生霞;食管癌Eca109單克隆細(xì)胞株的干細(xì)胞特性研究[D];石河子大學(xué);2013年

3 廖應(yīng)英;槲皮素對人食管癌Eca109細(xì)胞增殖與凋亡的影響及其機(jī)制探討[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 王聰懿;KLF17在食管鱗癌中的蛋白表達(dá)及其對Eca109細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

5 陳江勇;過表達(dá)Beclin 1對食管癌Eca109細(xì)胞株裸鼠成瘤的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

6 景紹武;三氧化二砷與放射線聯(lián)合對食管癌細(xì)胞株-Eca109的增敏機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

7 王靜;新城疫病毒誘導(dǎo)人食管癌ECA109細(xì)胞凋亡及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究[D];河北北方學(xué)院;2011年

8 張紅;P162通過抑制CHK1/2表達(dá)來增加食管癌細(xì)胞株Eca109放射敏感性的研究[D];武漢科技大學(xué);2013年

9 馮若;應(yīng)激活化的P38MAPK在DTT與順鉑誘導(dǎo)食管癌Eca109細(xì)胞凋亡中的作用[D];鄭州大學(xué);2003年

10 朱應(yīng)超;CHFR基因CpG島甲基化對Eca109細(xì)胞增殖凋亡的影響[D];山東大學(xué);2011年

，

本文編號：963587