本文關(guān)鍵詞：低劑量索拉非尼激活M2型巨噬細胞導致肝癌耐藥的機制及干預(yù)

  更多相關(guān)文章： 索拉非尼 M2型巨噬細胞 肝細胞肝癌 耐藥 Bay11-7082

【摘要】：目的索拉非尼作為一種多靶點的酪氨酸激酶抑制劑,是目前唯一被FDA批準用于晚期肝癌治療的分子靶向藥物。它可以通過阻斷血小板衍生生長因子受體(PDGFR)、血管內(nèi)皮細胞生長因子受體(VEGFR)以及Ras/Raf/MEK/ERK等信號通路抑制腫瘤生長,促進腫瘤細胞的凋亡,為晚期肝癌患者帶來生存獲益。然而,越來越多的研究顯示索拉非尼出現(xiàn)了耐藥的現(xiàn)象,其中腫瘤微環(huán)境在索拉非尼耐藥中的作用逐漸受到大家的重視。我們課題組的前期研究證實肝癌患者癌旁巨噬細胞的高表達與患者的預(yù)后成負相關(guān);而通過唑來膦酸或脂質(zhì)體去除小鼠肝癌原位模型內(nèi)的巨噬細胞后可以明顯增強索拉非尼的治療效果。因此我們考慮腫瘤微環(huán)境中的巨噬細胞可能參與了索拉非尼的耐藥�，F(xiàn)階段研究認為巨噬細胞主要表現(xiàn)為兩種亞型,即M1型和M2型,其中M2型又被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細胞,與腫瘤發(fā)展密切相關(guān)。我們課題組前部分的研究證實低劑量的索拉非尼可以促進巨噬細胞向M2型巨噬細胞極化,而一些臨床研究指出索拉非尼的血漿濃度往往低于治療標準量。所以,我們推測低劑量索拉非尼誘導的M2型巨噬細胞極化可能參與到了索拉非尼耐藥的過程。本論文即通過實驗探討低劑量索拉非尼極化的M2型巨噬細胞與索拉非尼耐藥的相關(guān)機制,并通過特異的藥物或試劑來干預(yù)M2型巨噬細胞極化進而改善索拉非尼的耐藥。方法1.收集HCC患者術(shù)后標本,通過免疫組化的方法檢測M2型巨噬細胞標志物CD163的表達情況,并對M2型巨噬細胞的表達與患者預(yù)后及索拉非尼耐藥進行預(yù)測分析。2.用低劑量索拉非尼刺激小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞誘導其向M2型極化,然后與小鼠肝癌細胞Hepa1-6共培養(yǎng)或以其上清液培養(yǎng)小鼠肝癌細胞Hepa1-6細胞24h,然后通過Transwell侵襲和遷移實驗觀察小鼠肝癌細胞Hepa1-6的侵襲能力的變化。3.低劑量索拉非尼與NF-k B通路抑制劑Bay(Bay11-7082)聯(lián)合刺激小鼠巨噬細胞RAW264.7,分別提取巨噬細胞核蛋白和RNA然后檢測P50入核情況以及小鼠M2巨噬細胞Maker IL-10和Arg-1在基因轉(zhuǎn)錄水平的變化。4.低劑量索拉非尼聯(lián)合Bay作用于小鼠巨噬細胞RAW264.7后,再次重復Transwell趨化,侵襲和遷移實驗,觀察低劑量索拉非尼聯(lián)合Bay共同刺激后的巨噬細胞對小鼠肝癌細胞Hepa1-6侵襲遷移能力的影響。結(jié)果1.肝癌術(shù)后標本中瘤周CD163低表達組與CD163高表達組的中位DFS為分別為16.5個月和7.5個月(x2=12.1,P=0.001);CD163低表達組與CD163高表達組的中位OS分別為31個月和14個月(x2=24.318,P0.001)。CD163低表達組患者未服用索拉非尼和服用索拉非尼的中位DFS分別為13個月和17個月(x2=2.026,P=0.155);CD163高表達組患者未服用索拉非尼和服用索拉非尼的中位DFS分別為8.6個月和6個月(x2=1.914,P=0.167)。2.相對于索拉非尼0umol/L組和空白對照組,索拉非尼2.5umol/L組刺激后的巨噬細胞可以明顯增強小鼠肝癌細胞Hepa1-6的侵襲遷移能力。3.NF-kB信號通路抑制劑Bay與低劑量的索拉非尼聯(lián)合刺激巨噬細胞后通過Western Blotting檢測發(fā)現(xiàn)P50入核明顯減少,通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)M2型巨噬細胞Maker IL-10和Arg-1在基因轉(zhuǎn)錄水平的表達明顯下調(diào)。4.相對于索拉非尼2.5umol/L組,索拉非尼2.5umol/L聯(lián)合Bay組處理后的巨噬細胞對于Hepa1-6細胞侵襲遷移的影響明顯減弱。結(jié)論1.肝癌患者術(shù)后標本中瘤周M2型巨噬細胞高表達與患者預(yù)后呈負相關(guān);瘤周M2型巨噬細胞高表達的患者對于術(shù)后輔助索拉非尼的治療效果相對較差。2.低劑量索拉非尼極化的M2型巨噬細胞可以明顯增強小鼠肝癌細胞Hepa1-6的侵襲遷移能力。3.低劑量索拉非尼誘導巨噬細胞向M2型轉(zhuǎn)變,而極化的M2型巨噬細胞可以增強肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,進而影響索拉非尼的治療效果,這與索拉非尼耐藥的產(chǎn)生密切相關(guān)。4.NF-k B信號通路抑制劑Bay11-7082可以抑制P50入核而影響M2型巨噬細胞的極化,抑制肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移,干預(yù)索拉非尼的耐藥。
【關(guān)鍵詞】：索拉非尼 M2型巨噬細胞 肝細胞肝癌 耐藥 Bay11-7082
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、M2型巨噬細胞的表達與索拉非尼耐藥性的預(yù)測分析15-29
• 1.1 對象和方法15-18
• 1.1.1 臨床資料及標本的收集15
• 1.1.2 試劑和儀器15-16
• 1.1.3 實驗方法16-18
• 1.1.4 結(jié)果判定18
• 1.1.5 統(tǒng)計分析18
• 1.2 結(jié)果18-26
• 1.2.1 患者的基本臨床資料特征18-20
• 1.2.2 CD163免疫組化結(jié)果分析20-21
• 1.2.3 CD163低表達組與CD163高表達組間的臨床資料特征比較21-23
• 1.2.4 CD163低表達組與CD163高表達組間的生存預(yù)后分析23-26
• 1.3 討論26-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 二、低劑量索拉非尼激活M2型巨噬細胞導致肝癌耐藥的機制及干預(yù)29-54
• 2.1 對象和方法29-44
• 2.1.1 細胞和主要試劑29-30
• 2.1.2 主要的儀器設(shè)備30-31
• 2.1.3 實驗所需引物31
• 2.1.4 溶液的配制31-34
• 2.1.5 實驗方法34-44
• 2.2 結(jié)果44-51
• 2.2.1 低劑量索拉非尼極化的M2型巨噬細胞對小鼠肝癌細胞Hepa1-6 生物學行為的影響44-47
• 2.2.2 低劑量索拉非尼極化M2型巨噬細胞的干預(yù)47-49
• 2.2.3 Bay聯(lián)合索拉非尼作用于巨噬細胞后對小鼠肝癌細胞系Hepa1-6 生物學行為的影響49-51
• 2.3 討論51-52
• 2.4 小結(jié)52-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-60
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明60-61
• 綜述 索拉非尼在肝癌治療中耐藥機制的研究進展61-73
• 綜述參考文獻67-73
• 致謝73-74
• 個人簡歷74

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本文編號：957920