本文關(guān)鍵詞：LCN-2對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖及遷移的影響

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【摘要】：卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一,病死率極高,嚴(yán)重威脅著廣大婦女的身心健康。由于缺乏有效的篩查手段,多數(shù)患者確診時已處于晚期。在卵巢癌有明顯癥狀時血清CA125、CA199等可作為監(jiān)測病情的腫瘤抗原標(biāo)記物,其敏感性較高,但特異性較差。為此,我們建立卵巢癌細(xì)胞模型尋找特異性腫瘤抗原標(biāo)記物,并檢測其在卵巢癌中的表達(dá)情況、以及對卵巢癌細(xì)胞增殖及遷移的影響,為今后進(jìn)一步探討卵巢癌發(fā)病機制提供實驗依據(jù),以期為卵巢癌的防治提供新的思路和靶點。目的:脂質(zhì)運載蛋白-2(lipocalin-2,LCN-2)屬于脂質(zhì)運載蛋白家族的第2號成員,LCN-2的上調(diào)與肝癌,乳腺癌,卵巢癌等多種人類腫瘤相關(guān)。然而,LCN-2在腫瘤細(xì)胞中的生物學(xué)作用還不是很清楚。本研究通過觀察LCN-2在四種卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,并使用穩(wěn)定過表達(dá)LCN-2的方法檢測其對卵巢癌細(xì)胞增殖及遷移的影響,為進(jìn)一步研究LCN-2在卵巢癌細(xì)胞中的作用機制提供前期實驗依據(jù)。方法:應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)在mRNA水平上檢測四種卵巢癌細(xì)胞系(CAOV3,ES2,OVCAR3,SKOV3)中LCN-2的表達(dá)情況;應(yīng)用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染法觀察過表達(dá)LCN-2對卵巢癌SKOV3細(xì)胞生長的影響;應(yīng)用MTT細(xì)胞增殖實驗檢測過表達(dá)LCN-2對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的影響;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實驗檢測過表達(dá)LCN-2對卵巢癌SKOV3細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果:1RT-qPCR結(jié)果顯示:在mRNA水平上LCN-2的表達(dá)在四種卵巢癌細(xì)胞系中由高到低的趨勢是:在CAOV3和OVCAR3呈高表達(dá),在SKOV3表達(dá)較弱,在ES2表達(dá)最弱,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2成功構(gòu)建LCN-2穩(wěn)定過表達(dá)的SKOV3細(xì)胞克隆。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體或目的質(zhì)粒的SKOV3細(xì)胞系后,用1200μg/mlG418進(jìn)行篩選,約四周后細(xì)胞克隆形成。RT-qPCR和Westernblot方法檢測結(jié)果顯示,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LCN-2基因的SKOV3細(xì)胞中LCN-2蛋白表達(dá)量均顯著高于未轉(zhuǎn)染組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)SKOV3細(xì)胞克隆和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LCN-2后的SKOV3細(xì)胞克隆形態(tài)無明顯變化。3MTT細(xì)胞增殖實驗繪制細(xì)胞生長曲線,結(jié)果顯示:過表達(dá)LCN-2與對照組比較,對卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4劃痕實驗結(jié)果顯示:過表達(dá)LCN-2與對照組相比,明顯促進(jìn)了卵巢癌SKOV3細(xì)胞的遷移,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1成功構(gòu)建了pcDNA/mycHis-LCN-2表達(dá)載體。2LCN-2在不同的卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)有差異。3構(gòu)建LCN-2穩(wěn)定過表達(dá)的細(xì)胞克隆。4過表達(dá)LCN-2對卵巢癌SKOV3細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用。5過表達(dá)LCN-2對卵巢癌SKOV3細(xì)胞的遷移具有促進(jìn)作用。
【關(guān)鍵詞】：LCN-2 卵巢癌細(xì)胞 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移 SKOV3細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-23
• 結(jié)果23-26
• 附圖26-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述 脂質(zhì)運載蛋白-2 的研究進(jìn)展38-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 致謝47-48
• 個人簡歷48

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本文編號：952940