本文關(guān)鍵詞：鈣蛋白酶Capn1促進(jìn)肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma, ICC)是一種具有膽管上皮特性的的肝內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤,肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌作為發(fā)病率第二的原發(fā)性肝癌(Primary liver cancer, PLC),約占10-15%,僅次于肝細(xì)胞性肝癌。近二十年來肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)有明顯升高,特別是東南亞地區(qū)。目前手術(shù)切除仍是肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌首選且最有效的治療方法,但是,即使能夠手術(shù)切除腫瘤的患者,由于術(shù)后早期復(fù)發(fā)、腫瘤生長迅速及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等原因,預(yù)后也很差,患者3年和5年生存率只有30%和18%。因此,探悉肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移過程中的分子機(jī)制,篩查新的關(guān)鍵分子,對(duì)提高肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者的預(yù)后判斷準(zhǔn)確性及開發(fā)新的治療靶點(diǎn)有著重要的臨床現(xiàn)實(shí)意義。鈣蛋白酶(Capn)是一類有著相似催化結(jié)構(gòu)域的性質(zhì)保守的半胱氨酸蛋白酶,催化眾多特殊的基質(zhì)調(diào)控蛋白水解。鈣蛋白酶參與體內(nèi)一系列細(xì)胞基本生理過程,包括細(xì)胞骨架重建,胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),細(xì)胞的增殖及凋亡等。已知鈣蛋白酶系統(tǒng)在超過12種哺乳動(dòng)物體內(nèi)存在。相關(guān)研究證實(shí)鈣蛋白酶在乳腺癌,子宮內(nèi)膜癌和胰腺癌等一系列腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程起著重要的調(diào)控作用。鈣蛋白酶家族包含十余種亞基,Capn1和Capn2的組織表達(dá)最為廣泛,因而最受關(guān)注。Capn1和Capn2根據(jù)體外激活所需的鈣離子濃度命名,和調(diào)節(jié)亞基Capn4 (28kDa)結(jié)合成異構(gòu)二聚體形式發(fā)揮其生理功能,其中Capn1只需要微摩爾級(jí)的鈣離子濃度就可以被激活而發(fā)揮作用。近期研究表明,鈣蛋白酶表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān),研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)鞘瘤、腦膜瘤和腎細(xì)胞癌腫瘤組織中Capn1表達(dá)均明顯升高,同時(shí),在子宮內(nèi)膜癌組織中檢測到鈣蛋白酶抑制蛋白表達(dá)降低。到目前為止,Capn1在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達(dá)改變及其作用未見報(bào)道。本研究通過檢測140肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者癌組織和對(duì)應(yīng)正常肝臟組織中Capn1、E-cadherin及Snail的表達(dá),并且利用組織芯片技術(shù)分析驗(yàn)證了Cap n1表達(dá)異常與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后間的相關(guān)性,探討Capn1是否為肝內(nèi)膽管癌患者的預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。通過SiRNA干擾技術(shù)下調(diào)肝內(nèi)膽管腫瘤細(xì)胞系中Capn1的表達(dá),觀察肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移潛能的改變,闡明其對(duì)肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響,進(jìn)而,通過研究Capn1對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-cadherin和Snai1表達(dá)的影響,對(duì)Capn1調(diào)控肝內(nèi)膽管癌的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制進(jìn)行了初步的探討。第一部分Capn1及EMT指標(biāo)在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性的研究目的：研究Capn1及E-cadherin、Snail在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織和對(duì)應(yīng)的癌旁肝臟組織中的表達(dá)情況,探討Capn1與EMT標(biāo)志物細(xì)胞黏附分子上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)和間質(zhì)相關(guān)蛋白S nail在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性。方法：應(yīng)用免疫組化方法檢測140例肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者病理組織中Capn1、Snail和E-cadhrein的表達(dá)：應(yīng)用western blot方法檢測四組肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織Capn1的表達(dá)：應(yīng)用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：western bolt及免疫組化學(xué)結(jié)果均顯示在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中,Capn1表達(dá)高于癌旁組織,兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；早期復(fù)發(fā)病人Capn1表達(dá)較未復(fù)發(fā)組患者明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);免疫組化結(jié)果顯示Snai1在癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織,而E-cadheri n在癌組織中的表達(dá)低于癌旁組織。結(jié)論：Capn1、Snail在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中表達(dá)上調(diào),而E-cadherin在肝內(nèi)膽管細(xì)胞腫瘤中表達(dá)下調(diào)；Capn1與Snail、E-cadherin之間具有顯著相關(guān)性(p0.05)；早期復(fù)發(fā)患者腫瘤組織中Capn1表達(dá)升高。第二部分Capn1與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系及其與EMT診斷預(yù)后的價(jià)值目的：通過免疫組化方法檢測Capn1、E-cadherin及Snail在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中的表達(dá),探討Capnl與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系及其與E-cadherin Snail的預(yù)后意義。方法：應(yīng)用免疫組化方法檢測140例肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌病理組織中Capn1、E-cadherin及Snail的表達(dá),探索Capn1與臨床病理特征的關(guān)系及其與E-cadherin、Snail預(yù)后診斷價(jià)值。結(jié)果：Capn1高表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者的血清CA19-9表達(dá)及腫瘤數(shù)目相關(guān)(p0.05)。Capn1、Snail高表達(dá)組術(shù)后總體生存率明顯低于Capnl低表達(dá)組(p0.05),累計(jì)復(fù)發(fā)率明顯高于Capn1低表達(dá)組(p0.05)；E-cadherin高表達(dá)組術(shù)后總體生存率高于Capnl低表達(dá)組而復(fù)發(fā)率低于Capn1低表達(dá)組。單因素及多因素分析顯示Capn1、E-cadherin及Snail 表達(dá)是患者總體生存率和累計(jì)復(fù)發(fā)率的獨(dú)立預(yù)后因子。結(jié)論：Capn1在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織及早期復(fù)發(fā)患者的腫瘤組織表達(dá)中升高,與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的CA19-91表達(dá)及腫瘤TNM分期相關(guān)(p0.05)。腫瘤組織Capnl、Snail高表達(dá)及E-cadherin低表達(dá)患者其總體生存率更低,且術(shù)后早期復(fù)發(fā)幾率更高。Capn1、E-cadherin及Snail在腫瘤組織中的表達(dá)差異具有預(yù)后診斷價(jià)值。第三部分Capn1表達(dá)對(duì)肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移潛能的影響及其分子機(jī)制目的：探討Capn1表達(dá)改變與肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移潛能的關(guān)系,并探索Capnl調(diào)控肝內(nèi)膽管癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制。方法：應(yīng)用RNA干擾下調(diào)Capn1在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞株中的表達(dá),并且驗(yàn)證干擾效率。應(yīng)用劃痕試驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力變化,transwell試驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力變化,MTT試驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力的變化。利用western blot技術(shù)進(jìn)一步探究Capn1表達(dá)調(diào)控肝內(nèi)膽管癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)鍵分子改變。結(jié)果：RNA干擾下調(diào)肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞株QBC939口RBE中Capn1表達(dá),發(fā)現(xiàn)干擾組細(xì)胞遷移與侵襲能力、增殖能力較對(duì)照組明顯減弱(p0.05),Capn1的表達(dá)改變與間質(zhì)相關(guān)蛋白Snai1呈正相關(guān)而與上皮相關(guān)蛋白E-cadherin呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論：Capn1高表達(dá)與肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞的侵襲遷移、增殖能力正相關(guān),并且Capn1的表達(dá)改變及Snai1表達(dá)呈正相關(guān),與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：鈣蛋白酶 Capn1 肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌 預(yù)后 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.8
【目錄】：

• 中文摘要2-5
• 英文摘要5-9
• 英文縮略語9-10
• 前言10-11
• 第一部分 Capn1及EMT指標(biāo)在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性的研究11-24
• 材料方法11-17
• 結(jié)果17-20
• 討論20-22
• 參考文獻(xiàn)22-24
• 第二部分 Capn1與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系及其與EMT診斷預(yù)后的價(jià)值24-33
• 材料方法24-26
• 結(jié)果26-30
• 討論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 第三部分 Capn1表達(dá)改變對(duì)肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移潛能的影響及其分子機(jī)制33-44
• 材料方法33-39
• 結(jié)果39-42
• 討論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-44
• 文獻(xiàn)綜述44-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄53-54

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本文編號(hào)：946947