本文關(guān)鍵詞：AG490對甲狀腺髓樣癌TT細胞放射敏感性的研究

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【摘要】：目的甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid carcinoma, MTC)是起源于甲狀腺濾泡旁分泌細胞的惡性腫瘤。甲狀腺濾泡旁分泌細胞不能吸收碘,而且對射線不敏感,因此放療效果不佳。本文通過對AG490干預(yù)下,甲狀腺髓樣癌TT細胞體外培養(yǎng)的情況進行研究,探討AG490在阻斷JAK-STAT信號通路及增加放射敏感性中的作用,為臨床上進一步治療甲狀腺髓樣癌提供豐富的的理論基礎(chǔ)。方法1.MTT法檢測甲狀腺髓樣癌TT細胞在遞增濃度：0、25、50、100μmol/L AG490干預(yù)下第1、2、3、4、5 d不同時間點的吸光度值,以判斷細胞增殖情況。2.流式細胞檢測技術(shù)檢測甲狀腺髓樣癌TT細胞在遞增濃度0.25, 50,100μmol/L AG490干預(yù)48h后細胞的凋亡情況。3. Western blot法檢測甲狀腺髓樣癌TT細胞在不同濃度AG490干預(yù)24h后,JAK2、p-STAT3、Bcl-2和Bax蛋白的表達情況。4.以50 μmol/L濃度AG490的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)甲狀腺髓樣癌TT細胞作為實驗組,以不含AG490的普通培養(yǎng)基作為對照組對細胞進行培養(yǎng)。細胞貼壁后,采用0、2、4、6、8、10 Gy的遞增單吸收劑量進行照射,24h后顯微鏡下計數(shù),計算克隆接種率(planting efficiency, PE)、存活分數(shù)(survival fraction, SF),并采用GraphPad Prism 5軟件擬合細胞存活曲線。根據(jù)細胞存活曲線計算相關(guān)放射生物學(xué)參數(shù)射線為2 Gy時的存活分數(shù)(SF2)、平均致死劑量(DO)、準閾劑量(Dq)、外推數(shù)(N)、DO時放射增敏比(SER DO)和Dq時放射增敏比(SERDq)等參數(shù)。5.對甲狀腺髓樣癌TT細胞采取0、25、50、100 μmol/L的AG490進行干預(yù),并采取4Gy劑量進行照射,通過western blot實驗和Quantity one軟件測定每組細胞JAK2和p-Stat3含量。結(jié)果增殖率檢測：與0 μmol/L相比,25μLmol/L、50μmol/L和100 μmol/L組均可見TT細胞受到一定程度的抑制,隨著濃度的增加、時間的延長,AG490對甲狀腺髓樣癌TT細胞的抑制作用逐漸增大。凋亡率檢測顯示：0μmol/L、25 μmol/L、50μmol/L和100μmol/L濃度組細胞凋亡率分別為4.86±0.79%、15.24±1.00%、33.11±2.40%、64.47±2.29%。凋亡率隨著AG490藥物濃度的增加而逐漸增加。蛋白含量檢測：與0μmol/L比較,JAK2、p-Stat3和Bcl-2蛋白表達量隨著濃度的增高逐漸降低,Bax表達增高。經(jīng)Poisson關(guān)聯(lián)性分析JAK2和p-Stat3呈正相關(guān),r=0.67; JAK2和Bcl-2呈正相關(guān),r=0.79; p-Stat3和Bcl-2呈正相關(guān),r=0.70; JAK、p-Stat3、Bcl-2和Bax均呈負相關(guān),r=-0.44、-0.42、-0.40。放射敏感性實驗結(jié)果顯示：對照組和實驗組細胞存活分數(shù)(s urvival fraction, SF)均隨著照射劑量的增加而降低,且藥物組降低較前者更顯著。6種放射生物學(xué)參數(shù)之間比較,實驗組較對照組差別有統(tǒng)計學(xué)意義。在給予4Gy劑量照射后,0、25、50和100μmol-L濃度組JAK2分別為0.94±0.09、0.78±0.02、0.31±0.01、0.15±0.03, p-Stat3分別為0.94±0.83、0.85±0.0.13、0.43±0.03、0.23±0.02。與未照射組相比,兩種蛋白表達均下降,且當AG490濃度≥50μmol/L時差異具有顯著性P0.05)。結(jié)論隨著AG490濃度的增加、作用時間的延長,對體外培養(yǎng)的甲狀腺髓樣癌TT細胞抑制作用逐漸增加,細胞凋亡率逐漸增加,進一步說明細胞增殖受到抑制。在給予單劑量照射后發(fā)現(xiàn)細胞生存率隨劑量增加逐漸降低,含藥組更明顯,且放射生物學(xué)參數(shù)也相應(yīng)變化。蛋白檢測表明JAK2、p-Stat3、Bcl-2蛋白的表達隨著藥物濃度的增加逐漸降低,而Bax逐漸升高。表明AG490可以提高TT細胞的放療敏感性,并可以下調(diào)細胞增殖信號通路蛋白JAK2、p-Stat3和Bcl-2的表達,上調(diào)凋亡蛋白Bax的表達。
【關(guān)鍵詞】：AG490 甲狀腺髓樣癌 放射敏感性
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R736.1
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-17
• 1 材料和方法17-26
• 2 結(jié)果26-32
• 3 討論32-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻36-40
• 文獻綜述40-49
• 參考文獻46-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章50

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