本文關鍵詞：Gab2對結直腸癌細胞增殖、侵襲轉移的影響及其潛在機制研究

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【摘要】：目的:檢測Gab2在結直腸癌組織中的表達情況,分析其與臨床病理參數(shù)的相關性;在基因和蛋白水平上檢測不同結直腸癌細胞株中Gab2的表達情況,用攜帶Gab2基因過表達及基因沉默慢病毒載體感染結直腸癌細胞株,獲取Gab2過表達和基因沉默穩(wěn)定感染細胞株;通過體內外實驗探討Gab2在結直腸癌細胞增殖、侵襲及轉移等生物學特性中發(fā)揮的作用;檢測Gab2下游關鍵信號蛋白磷酸化水平的表達情況,研究Gab2可能參與調控結直腸癌細胞增殖、侵襲轉移的信號通路。方法:一、結直腸癌組織中Gab2表達與臨床病理參數(shù)的關系收集手術切除的109例結直腸癌標本(包括27例配對冰凍組織和82例石蠟包被組織),q RT-PCR及Western blot分別檢測冰凍組織中Gab2 m RNA和蛋白的表達情況;免疫組化檢測82例石蠟包被組織中Gab2蛋白表達情況,并統(tǒng)計分析Gab2表達與病人臨床資料間相關性。二、Gab2在結直腸癌細胞中的表達與細胞增殖、遷移和侵襲的關系1.Gab2在不同結直腸癌細胞株中的差異表達研究:運用q RT-PCR和Western blot檢測不同結直腸癌細胞株中Gab2的表達情況,從基因水平和蛋白水平篩選出低表達和高表達Gab2的結直腸癌細胞株。2.慢病毒載體感染結直腸癌細胞株及驗證實驗:將Gab2過表達及其相對應的空載對照慢病毒載體分別感染SW480,并設為LV-Gab2和LV-Control兩組,Gab2基因沉默及其相對應的空載對照慢病毒載體分別感染SW620,并設為LV-sh Gab2和sh RNA-Control兩組;感染72h后,運用q RT-PCR和Western blot分別檢測感染后細胞中Gab2 m RNA和蛋白的表達。3.Gab2調節(jié)結直腸癌細胞增殖、遷移及侵襲能力的研究:用CCK-8和克隆形成試驗分別檢測各感染細胞增殖活性、克隆形成能力,Transwell遷移和侵襲實驗分別檢測細胞遷移、侵襲能力的變化,體外觀察Gab2在結直腸癌細胞增殖、遷移及侵襲中的作用。三、體內驗證Gab2對結直腸癌細胞增殖和轉移能力的影響1.裸鼠成瘤實驗:24只BALB/c裸鼠(5-6周齡)隨機分成四組,每組6只,背部皮下接種上述四組感染細胞后,觀察Gab2表達對腫瘤細胞裸鼠成瘤的影響,包括成瘤瘤體體積和重量的差異,從而在體內進一步驗證Gab2對結直腸癌細胞生長增殖能力的影響。2.體內轉移形成實驗:24只BALB/c裸鼠(5-6周齡)隨機分成四組,每組6只,尾靜脈注射上述感染細胞后,觀察Gab2表達對腫瘤細胞轉移的影響,包括小鼠肝肺轉移比率及轉移臟器中腫瘤結節(jié)的數(shù)量,從而在體內進一步驗證Gab2對結直腸癌細胞轉移能力的影響。四、Gab2參與結直腸癌細胞增殖、侵襲轉移的信號傳導通路研究慢病毒載體感染結直腸癌細胞株后,首先倒置顯微鏡下觀察Gab2表達對細胞形態(tài)學變化的影響;q RT-PCR、Western blot及細胞免疫熒光檢測上述感染細胞中E-cadherin、Vimentin m RNA和蛋白的表達情況,并運用Western blot檢測各組細胞中轉移相關因子MMP-7、MMP-9蛋白的表達情況,探討Gab2是否調控EMT程序,進而影響結直腸癌細胞遷移和侵襲能力;隨后Western blot檢測下游關鍵信號分子ERKl/2和AKT在Gab2上調及干擾前后蛋白磷酸化水平的變化,初步探討ERK及AKT信號通路是否參與了Gab2對結直腸癌細胞的增殖、侵襲及轉移的調控作用;最后使用化學拮抗劑阻斷相關信號通路,明確Gab2參與調控結直腸癌細胞的增殖、侵襲及轉移的信號傳導通路。結果:一、與配對癌旁正常組織相比,結直腸癌組織中Gab2 mRNA(P=0.014)和蛋白(P=0.003)的表達水平均顯著上調;免疫組化結果顯示,Gab2蛋白在癌組織中的表達明顯高于癌旁正常組織(P0.05),且與淋巴結轉移、遠處浸潤及臨床分期密切相關。二、從基因和蛋白水平均表明,與低侵襲性細胞株HT29、SW480或人正常腸上皮細胞FHC相比,Gab2在高侵襲性細胞株SW620及LOVO中顯著上調;與對照組相比,LV-Gab2組細胞Gab2蛋白和m RNA的表達顯著上調(P0.05),LV-sh Gab2組細胞Gab2蛋白和m RNA的表達明顯下調(P0.05),表明成功建立Gab2基因過表達及沉默穩(wěn)定感染細胞株;Gab2基因上調可顯著增強SW480細胞的增殖、克隆形成、遷移及侵襲能力(P0.05);相反,Gab2基因沉默可明顯抑制SW620細胞的增殖、克隆形成、遷移及侵襲能力(P0.05)。三、裸鼠皮下接種成瘤實驗發(fā)現(xiàn),Gab2基因上調可顯著促進腫瘤形成,瘤體積和體重呈明顯上調(P0.05);而Gab2基因沉默可明顯抑制腫瘤形成,瘤體積和體重呈顯著下調(P0.05)。裸鼠尾靜脈注射實驗發(fā)現(xiàn),Gab2基因過表達后,小鼠肝肺轉移比率及肝肺腫瘤結節(jié)數(shù)目顯著上調(P0.05);而Gab2基因沉默后,小鼠肝肺轉移比率及肝肺腫瘤結節(jié)數(shù)目明顯下降(P0.05)。四、Gab2基因過表達后,SW480細胞由上皮細胞形態(tài)轉變?yōu)殚g質細胞形態(tài),EMT上皮標記蛋白E-cadherin蛋白及m RNA表達水平顯著下降(P0.05),而間質標記蛋白Vimentin蛋白及m RNA表達明顯增加(P0.05),同時轉移相關因子MMP-7和MMP-9蛋白表達水平顯著上調(P0.05);Gab2基因沉默后,SW620細胞由間質細胞形態(tài)轉變?yōu)樯掀ぜ毎螒B(tài),E-cadherin蛋白及m RNA表達水平顯著上調(P0.05),而Vimentin蛋白及m RNA表達明顯下降(P0.05),同時轉移相關因子MMP-7和MMP-9蛋白表達水平顯著下調(P0.05);Gab2基因過表達后,phospho-ERKl/2表達水平明顯增加(P0.05),phospho-AKT表達水平并未發(fā)生明顯變化(P0.05);而Gab2基因沉默后,phospho-ERKl/2表達水平顯著下降(P0.05),phospho-AKT表達水平并未發(fā)生顯著變化(P0.05);LV-Gab2細胞使用U0126后,phospho-ERKl/2、Vimentin、MMP-7和MMP-9表達水平明顯下降(P0.05),而E-cadherin表達水平部分恢復(P0.05),同時細胞的增殖、遷移及侵襲能力顯著減弱(P0.05)。結論:一、Gab2在結直腸癌組織及細胞株中表達上調。二、Gab2在體內外都可以顯著促進結直腸癌細胞的增殖、侵襲及轉移能力。三、Gab2可能通過調控EMT程序來增強結直腸癌細胞的侵襲和轉移能力。四、Gab2主要通過MEK/ERK1/2信號通路參與結直腸癌細胞增殖、侵襲轉移的調控。
【關鍵詞】：結直腸癌 Gab2 增殖 轉移 信號通路
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要8-11
• Abstract11-16
• 前言16-19
• 第一部分 Gab2在結直腸癌組織中的表達與臨床資料相關性19-30
• 引言19
• 1 材料與方法19-25
• 2 結果25-28
• 3 討論28-30
• 第二部分 Gab2對結直腸癌細胞增殖、遷移及侵襲轉移的作用和影響30-51
• 引言30
• 1 材料與方法30-37
• 2 結果37-48
• 3 討論48-51
• 第三部分 Gab2調控結直腸癌細胞增殖、侵襲轉移的分子作用機制51-66
• 引言51
• 1 材料與方法51-54
• 2 結果54-64
• 3 討論64-66
• 結論66-68
• 參考文獻68-73
• 綜述73-85
• 參考文獻80-85
• 致謝85-87
• 作者簡介87-88

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3 汪一虹;在確定的法國人群中年齡<45歲結直腸癌病人與≥45歲結直腸癌病人的比較[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2002年01期

4 李會晨;結直腸癌解剖位置的連續(xù)性右向遷移[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2003年03期

5 李志霞;結直腸癌復發(fā)及轉移的綜合治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年06期

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7 保紅平,方登華,高瑞崗,李奎,張雪松,劉天錫;青年人結直腸癌臨床病理分析[J];中國普外基礎與臨床雜志;2004年01期

8 章江;;監(jiān)測結直腸癌非常必要[J];國外醫(yī)學情報;2004年04期

9 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細胞粘附分子變異體在結直腸癌中的表達及預后[J];中國公共衛(wèi)生;2005年07期

10 Nozawa T. ,Enomoto T. ,Koshida Y. ,M. Kuranami,王志宇;人結直腸癌黏膜下血小板源性內皮細胞生長因子特異性增強表達[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(胃腸病學分冊);2005年06期

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1 鄭樹;;結直腸癌預后與轉移相關因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學術會議全國大腸癌轉移與復發(fā)的診治研討會學術論文集[C];2005年

2 鄒一峰;吳小劍;蘭平;;結直腸癌免疫治療新進展[A];第十一次全國中西醫(yī)結合大腸肛門病學術會議論文匯編[C];2006年

3 郁寶銘;;結直腸癌治療的進展及其新理念[A];2006年浙江省肛腸外科學術年會論文匯編[C];2006年

4 王錫山;;結直腸癌治療的困惑之我見[A];第九屆全國腫瘤轉移學術大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學會腫瘤學年會報告集[C];2011年

5 秦建平;;未病思想中的結直腸癌預防[A];貴州省中西醫(yī)結合學會肛腸學會第五屆學術交流會暨新技術新進展學習班論文匯編[C];2012年

6 高文慶;陳會林;童蕾;陸松春;;老年梗阻性結直腸癌診療體會(附42例報告)[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學會2011年學術年會論文集[C];2011年

7 王啟遠;周長江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內皮生長因子與結直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

8 巴一;;結直腸癌靶向治療進展[A];第三屆中國腫瘤內科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 何超;朱洪波;;結直腸癌的生物治療[A];2009年浙江省腫瘤外科學術年會暨腫瘤外科規(guī)范化診治學習班論文匯編[C];2009年

10 萬德森;;進一步提高結直腸癌療效的思考[A];2009年浙江省腫瘤學術年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

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1 中華醫(yī)學會腫瘤學分會主任委員 顧晉;分期不精確 致結直腸癌過度治療[N];健康報;2012年

2 本報記者 賈巖;跨線治療成結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

3 本報記者 賈巖;跨線治療構筑結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

4 本報記者 林琳;結直腸癌：可以治愈的癌癥[N];醫(yī)藥經濟報;2013年

5 記者 張妍　通訊員 熊靜帆 朱品磊;深圳結直腸癌發(fā)病高于全國[N];深圳商報;2013年

6 本報記者 孫剛;預防結直腸癌：請管住嘴[N];解放日報;2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報;2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實習生 陰浩;專家呼吁：結直腸癌應多學科規(guī)范化診療[N];科技日報;2014年

9 ;降低結直腸癌復發(fā)有新療法[N];人民日報;2003年

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1 顏斐斐;術后結直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學;2009年

2 李斌;結直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學;2009年

3 葉建杰;慈溪市結直腸癌危險因素病例對照研究[D];浙江大學;2008年

4 趙波;結直腸癌危險因素及臨床流行病學特征的調查與分析[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

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10 崔娟娟;p53和nm23在結直腸癌中的表達及其臨床意義[D];河北聯(lián)合大學;2014年

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