本文關(guān)鍵詞：基于Aurora-A抑制調(diào)控人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖與血管新生的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：驗(yàn)證抑制Aurora-A表達(dá)后能否抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖與促血管新生的能力,并初步探討相關(guān)作用機(jī)制。方法：以人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,將特異siRNA轉(zhuǎn)染入細(xì)胞來(lái)抑制Aurora-A的表達(dá)。以轉(zhuǎn)染對(duì)照siRNA的細(xì)胞為對(duì)照組,用Western Blot法驗(yàn)證低表達(dá)Aurora-A的實(shí)驗(yàn)組建立是否成功。以正常MDA-MB-231細(xì)胞作為對(duì)照組,應(yīng)用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞小管生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)促血管管腔形成能力,Elisa法檢測(cè)分泌至細(xì)胞外的VEGF蛋白水平,q-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)VEGFmRNA表達(dá)水平。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,以SPSS20軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P0.05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1、使用特異的siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,WB的灰度分析結(jié)果顯示,相較于正常MDA-MB-231細(xì)胞組,轉(zhuǎn)染特異Aurora-A siRNA的細(xì)胞中Aurora-A及p-Aurora-A的蛋白表達(dá)水平分別被下調(diào)32%、72%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值均0.05)。2、以正常MDA-MB-231細(xì)胞為對(duì)照組,沉默Aurora-A后24h對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制率為17.9±2.7%。Transwell實(shí)驗(yàn)顯示沉默Aurora-A后突破基質(zhì)膠進(jìn)入Transwell下室的細(xì)胞數(shù)量為85.8±10.6,明顯少于對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)量119.2±10.9,減少28.0±14.1%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖、侵襲的能力減弱。3、以正常MDA-MB-231細(xì)胞為對(duì)照組,HUVEC小管生成實(shí)驗(yàn)顯示沉默Aurora-A后形成的管腔形態(tài)不完整,HUVEC細(xì)胞排列不規(guī)則。管腔數(shù)目計(jì)數(shù)結(jié)果顯示沉默Aurora-A后形成的管腔數(shù)目為6.4±1.3,明顯少于對(duì)照組的15.2±1.3,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231細(xì)胞的促血管生成能力減弱。4、用q-PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞VEGF的mRNA表達(dá)發(fā)現(xiàn),沉默Aurora-A后,VEGF mRNA的表達(dá)量明顯下降,為對(duì)照組的14.3±0.9%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。用Elisa法檢測(cè)兩組細(xì)胞分泌至胞外VEGF的蛋白量,結(jié)果顯示對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白濃度為911.1±7. Opg/ml,沉默Aurora-A組細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白濃度為555.9±18.4 pg/ml,下降至對(duì)照組的61.0%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。表明沉默Aurora-A后MDA-MB-231細(xì)胞的VEGF轉(zhuǎn)錄及蛋白分泌均受到明顯抑制。結(jié)論：1、成功利用Aurora-A siRNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞,使Aurora-A蛋白表達(dá)量下降。2、抑制Aurora-A的表達(dá)后,能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖、侵襲。3、抑制Aurora-A的表達(dá)后,能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞促血管新生的功能,其機(jī)制可能為直接或間接抑制VEGF的mRNA轉(zhuǎn)錄與蛋白分泌,從而抑制VEGF/VEGFR信號(hào)通路。抑制Aurora-A有潛力成為有效治療乳腺癌的靶點(diǎn),值得今后進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 Aurora-A SiRNA 血管新生
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 中英文縮略詞表10-12
• 前言12-17
• 文獻(xiàn)綜述17-22
• 第一部分 材料與方法22-35
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-41
• 第三部分 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 作者簡(jiǎn)介52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 陳萬(wàn)青;鄭榮壽;曾紅梅;鄒小農(nóng);張思維;赫捷;;2011年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J];中國(guó)腫瘤;2015年01期

2 陳曉慶;叢麗;;脂肪因子與乳腺癌關(guān)系研究進(jìn)展[J];腫瘤研究與臨床;2013年03期

3 陳聰琴;范艷華;呂文文;趙慶春;;抗腫瘤新靶點(diǎn)——極光激酶及其小分子抑制劑研究進(jìn)展[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2013年01期

4 張軍;周曉紅;;腫瘤治療靶向藥物Aurora激酶抑制劑[J];天津藥學(xué);2012年01期

5 田富國(guó);羅飛;趙浩亮;;Aurora激酶A在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的相關(guān)性[J];中國(guó)藥物與臨床;2011年S1期

6 鐘亞莉;童彤;詹啟敏;楊觀瑞;唐芙愛(ài);;Aurora A在食管鱗癌組織中的表達(dá)及意義[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2009年02期

7 李國(guó)權(quán),宮琳琳,鄒麗娟,邵淑娟;Aurora-A激酶與惡性腫瘤研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));2004年02期

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本文編號(hào)：945244