本文關(guān)鍵詞：含有WW結(jié)構(gòu)域的氧化還原酶的基因在骨肉瘤化療中的作用

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【摘要】：研究背景WWOX(WW domain-containing oxidoreductase,WWOX)基因是2000年Bednarek等人[1]應(yīng)用基因分離技術(shù)發(fā)現(xiàn)的位于人類普通的染色體脆性位點(diǎn)FRA16D(16q23.3-q24.1)[2],共含有9個(gè)外顯子,基因片段長(zhǎng)度為1245bp,大致編碼414個(gè)氨基酸,相對(duì)分子量為46000,WWOX蛋白含有兩個(gè)N端的WW結(jié)構(gòu)域(59-88及18-47)和一個(gè)C端的脫氫還原酶(SDR,121-330)位點(diǎn),因此得名為包含氧化還原酶的WW域[3]。目前文獻(xiàn)中報(bào)道的已知的參與WWOX轉(zhuǎn)錄的mRNA共有8種,分別為:FOR 1、FOR2、FOR3、FOR4、WWOXdelta5-8、WWOXisoform8、WWOXdelta 6-8及全長(zhǎng)[4]。大量體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明裸鼠體內(nèi)WWOX基因的缺失會(huì)誘發(fā)肺癌[5]、肝癌等實(shí)體腫瘤的發(fā)生以及對(duì)紫外線、砷等致癌刺激的敏感性明顯增加。最近的研究結(jié)果顯示,WWOX基因在骨肉瘤[6]、肺癌、卵巢癌[7]、乳腺癌[8]、消化道腫瘤、前列腺癌[9]等實(shí)體腫瘤中檢測(cè)到其雜合性缺失及染色體重排,這就導(dǎo)致WWOX基因無(wú)法發(fā)揮正常功能。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道在多種腫瘤細(xì)胞,如肺癌及乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)5-8及6-8的連接錯(cuò)誤及其他關(guān)于轉(zhuǎn)錄的異常,這些異常也就造成了WWOX基因外顯子的缺失,從而影響其功能的發(fā)揮。而相當(dāng)多研究表明WWOX基因與DNA的修復(fù)有著密切的關(guān)系,所以WWOX基因一旦發(fā)生基因缺失,DNA修復(fù)受阻,癌變的可能性就明顯增加。大量國(guó)內(nèi)外研究表明WWOX基因與P53、P73、E2F-1、AP-2γ及RUNX2等[10-13]這些與細(xì)胞增殖凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、血管生成等密切相關(guān)的因子作用而發(fā)揮功能,這些都提示了WWOX基因作為抑癌基因的可能。隨著關(guān)于WWOX基因作用機(jī)制研究的深入,Kyle Kurek等[14]人的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)WWOX基因的表達(dá)在肺癌化療前后有明顯的差異性,這也說(shuō)明WWOX基因可能在腫瘤的化療中發(fā)揮一定的作用。骨肉瘤是目前最常見(jiàn)的惡性骨腫瘤[15],發(fā)病年齡以兒童及青少年為主,好發(fā)部位為膝關(guān)節(jié)及肩關(guān)節(jié)周圍,有著病情進(jìn)展快,復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移率高,預(yù)后差等特點(diǎn)[16]。相關(guān)研究證明骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素共同作用的結(jié)果。隨著1976年Rosen等人[17]提出的新輔助化療(Neoadjuvant chemotherapy)[18]的治療方案的普及,不僅僅有近80%骨肉瘤患者能夠得到保肢治療,更使患者的5年生存率由以往單純手術(shù)的20%提升到60%[19],大大提高了患者的生存質(zhì)量�；熓悄壳肮侨饬鲋委熤凶钪饕姆鞘中g(shù)治療方式[20]。骨肉瘤化療中常用的化療藥物有:順鉑、多西他賽、甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺等,且臨床上通常采用兩種或兩種以上化療藥物聯(lián)合使用[21]。但臨床上骨肉瘤的化療中往往存在化療不敏感性以及腫瘤耐藥性等問(wèn)題[22],導(dǎo)致治療效果不理想,骨肉瘤化療治療后轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的幾率仍然較高。目前針對(duì)骨肉瘤的化療臨床上常采用多種化療藥物聯(lián)合使用的方案,但效果仍然欠佳。關(guān)于骨肉瘤化療耐藥性的研究在國(guó)內(nèi)外廣泛的開(kāi)展,Zhao等人[23]研究發(fā)現(xiàn)骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染一種新發(fā)現(xiàn)的基因類型Smac[24]后,對(duì)化療藥物依托泊苷的敏感性增強(qiáng);寧磊[25]的研究發(fā)現(xiàn)低濃度茶多酚可以增加順鉑的化療作用。目的探討外源性含有WW結(jié)構(gòu)域的氧化還原酶的基因(WWOX基因)轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞系MG63后對(duì)化療藥物的增敏作用和化療后WWOX基因的表達(dá)情況。方法用慢病毒轉(zhuǎn)染法將WWOX重組真核表達(dá)質(zhì)粒及空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至MG-63細(xì)胞,分別建立穩(wěn)定表達(dá)WWOX基因的MG63-WWOX過(guò)表達(dá)細(xì)胞系(WWOX-OE)及空載質(zhì)粒細(xì)胞系(CON),然后CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖,Annexin-V和PI雙染法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡;RT-PCR和Western blot法檢測(cè)各組WWOX基因的m RNA和蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果WWOX-OE組與CON組在加入化療藥物(順鉑+多西他賽)處理后,結(jié)果顯示W(wǎng)WOX-OE組與CON組相比增殖明顯受抑制p=0.01590.05,凋亡明顯增多,差異性明顯,p=0.01590.05。RT-PCR和Western blot法結(jié)果顯示化療藥處理后的WWOX-OE組與CON組WWOX的表達(dá)均明顯增高,差異性明顯,p=0.00790.05。且RT-PCR結(jié)果顯示化療藥處理后的WWOX-OE組較CON組WWOX的表達(dá)量更高,差異性明顯,p=0.00790.05。結(jié)論在骨肉瘤細(xì)胞MG63中,升高WWOX基因的表達(dá)可以增加化療的敏感性,這也為研究骨肉瘤化療不敏感及耐藥開(kāi)辟了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：含有WW結(jié)構(gòu)域的氧化還原酶的基因 骨肉瘤 化療
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R738.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文縮寫詞對(duì)照表11-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-24
• 結(jié)果24-26
• 附圖26-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 綜述 WWOX基因、骨肉瘤及化療的研究進(jìn)展40-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及研究生期間發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

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本文編號(hào)：943189