本文關鍵詞：含有WW結構域的氧化還原酶的基因在骨肉瘤化療中的作用

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【摘要】：研究背景WWOX(WW domain-containing oxidoreductase,WWOX)基因是2000年Bednarek等人[1]應用基因分離技術發(fā)現的位于人類普通的染色體脆性位點FRA16D(16q23.3-q24.1)[2],共含有9個外顯子,基因片段長度為1245bp,大致編碼414個氨基酸,相對分子量為46000,WWOX蛋白含有兩個N端的WW結構域(59-88及18-47)和一個C端的脫氫還原酶(SDR,121-330)位點,因此得名為包含氧化還原酶的WW域[3]。目前文獻中報道的已知的參與WWOX轉錄的mRNA共有8種,分別為:FOR 1、FOR2、FOR3、FOR4、WWOXdelta5-8、WWOXisoform8、WWOXdelta 6-8及全長[4]。大量體動物實驗證明裸鼠體內WWOX基因的缺失會誘發(fā)肺癌[5]、肝癌等實體腫瘤的發(fā)生以及對紫外線、砷等致癌刺激的敏感性明顯增加。最近的研究結果顯示,WWOX基因在骨肉瘤[6]、肺癌、卵巢癌[7]、乳腺癌[8]、消化道腫瘤、前列腺癌[9]等實體腫瘤中檢測到其雜合性缺失及染色體重排,這就導致WWOX基因無法發(fā)揮正常功能。相關文獻報道在多種腫瘤細胞,如肺癌及乳腺癌細胞中發(fā)現5-8及6-8的連接錯誤及其他關于轉錄的異常,這些異常也就造成了WWOX基因外顯子的缺失,從而影響其功能的發(fā)揮。而相當多研究表明WWOX基因與DNA的修復有著密切的關系,所以WWOX基因一旦發(fā)生基因缺失,DNA修復受阻,癌變的可能性就明顯增加。大量國內外研究表明WWOX基因與P53、P73、E2F-1、AP-2γ及RUNX2等[10-13]這些與細胞增殖凋亡、細胞周期、細胞分化、血管生成等密切相關的因子作用而發(fā)揮功能,這些都提示了WWOX基因作為抑癌基因的可能。隨著關于WWOX基因作用機制研究的深入,Kyle Kurek等[14]人的實驗發(fā)現WWOX基因的表達在肺癌化療前后有明顯的差異性,這也說明WWOX基因可能在腫瘤的化療中發(fā)揮一定的作用。骨肉瘤是目前最常見的惡性骨腫瘤[15],發(fā)病年齡以兒童及青少年為主,好發(fā)部位為膝關節(jié)及肩關節(jié)周圍,有著病情進展快,復發(fā)及轉移率高,預后差等特點[16]。相關研究證明骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多因素共同作用的結果。隨著1976年Rosen等人[17]提出的新輔助化療(Neoadjuvant chemotherapy)[18]的治療方案的普及,不僅僅有近80%骨肉瘤患者能夠得到保肢治療,更使患者的5年生存率由以往單純手術的20%提升到60%[19],大大提高了患者的生存質量。化療是目前骨肉瘤治療中最主要的非手術治療方式[20]。骨肉瘤化療中常用的化療藥物有:順鉑、多西他賽、甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺等,且臨床上通常采用兩種或兩種以上化療藥物聯(lián)合使用[21]。但臨床上骨肉瘤的化療中往往存在化療不敏感性以及腫瘤耐藥性等問題[22],導致治療效果不理想,骨肉瘤化療治療后轉移及復發(fā)的幾率仍然較高。目前針對骨肉瘤的化療臨床上常采用多種化療藥物聯(lián)合使用的方案,但效果仍然欠佳。關于骨肉瘤化療耐藥性的研究在國內外廣泛的開展,Zhao等人[23]研究發(fā)現骨肉瘤細胞轉染一種新發(fā)現的基因類型Smac[24]后,對化療藥物依托泊苷的敏感性增強;寧磊[25]的研究發(fā)現低濃度茶多酚可以增加順鉑的化療作用。目的探討外源性含有WW結構域的氧化還原酶的基因(WWOX基因)轉染骨肉瘤細胞系MG63后對化療藥物的增敏作用和化療后WWOX基因的表達情況。方法用慢病毒轉染法將WWOX重組真核表達質粒及空載質粒轉染至MG-63細胞,分別建立穩(wěn)定表達WWOX基因的MG63-WWOX過表達細胞系(WWOX-OE)及空載質粒細胞系(CON),然后CCK8法檢測各組細胞的增殖,Annexin-V和PI雙染法檢測各組細胞的凋亡;RT-PCR和Western blot法檢測各組WWOX基因的m RNA和蛋白水平的表達。結果WWOX-OE組與CON組在加入化療藥物(順鉑+多西他賽)處理后,結果顯示WWOX-OE組與CON組相比增殖明顯受抑制p=0.01590.05,凋亡明顯增多,差異性明顯,p=0.01590.05。RT-PCR和Western blot法結果顯示化療藥處理后的WWOX-OE組與CON組WWOX的表達均明顯增高,差異性明顯,p=0.00790.05。且RT-PCR結果顯示化療藥處理后的WWOX-OE組較CON組WWOX的表達量更高,差異性明顯,p=0.00790.05。結論在骨肉瘤細胞MG63中,升高WWOX基因的表達可以增加化療的敏感性,這也為研究骨肉瘤化療不敏感及耐藥開辟了新的思路。
【關鍵詞】：含有WW結構域的氧化還原酶的基因 骨肉瘤 化療
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文縮寫詞對照表11-13
• 前言13-15
• 材料與方法15-24
• 結果24-26
• 附圖26-31
• 討論31-35
• 結論35-36
• 參考文獻36-40
• 綜述 WWOX基因、骨肉瘤及化療的研究進展40-52
• 參考文獻48-52
• 個人簡歷及研究生期間發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

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9 朱U，

本文編號：943189