本文關(guān)鍵詞：表柔比星序貫NK細(xì)胞體外殺傷乳腺癌細(xì)胞的研究

  更多相關(guān)文章： 乳腺癌 表柔比星 NK細(xì)胞 免疫治療 協(xié)同作用

【摘要】：目的： 探討乳腺癌細(xì)胞應(yīng)用表柔比星（Epirubicin，EPI）前后NK細(xì)胞對(duì)其殺傷活性的變化，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探索。 方法： 選用ER、PR、HER-2表達(dá)情況不同的三種乳腺癌細(xì)胞系，即ER+、PR+、HER-2 乳腺癌細(xì)胞系MCF-7，ER 、PR 、HER-2+++乳腺癌細(xì)胞系SKBR-3和ER 、PR 、HER-2 乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231。應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度的EPI作用于乳腺癌細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖抑制作用；應(yīng)用鈣黃綠素-AM釋放法檢測(cè)EPI（5.0μg/ml）序貫NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞殺傷的變化；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EPI作用前后乳腺癌細(xì)胞表面NKG2D活化性配體(ULBP1、ULBP2和MICA)表達(dá)情況的變化；EPI序貫NK細(xì)胞作用于乳腺癌細(xì)胞時(shí)，ELISA法檢測(cè)NK細(xì)胞分泌IFN-γ、TNF-的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NK細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素、顆粒酶B表達(dá)變化情況。 結(jié)果： EPI對(duì)乳腺癌細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖均呈現(xiàn)顯著抑制作用，并隨藥物劑量增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制率增加；NK細(xì)胞在體外對(duì)乳腺癌細(xì)胞亦存在殺傷作用，并隨效靶比的增加殺傷率增加。選取5.0μg/ml EPI預(yù)處理12小時(shí)后，NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用明顯高于EPI未處理組及單獨(dú)給藥組，EPI序貫NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷具有協(xié)同效應(yīng)；經(jīng)過(guò)EPI處理后，乳腺癌細(xì)胞表面NKG2D活化性配體（ULBP1、ULBP2、MICA）表達(dá)均顯著增高，NKG2D配體增高可增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷作用。EPI序貫NK細(xì)胞分泌IFN-γ、TNF-增多，進(jìn)一步增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷作用。EPI序貫NK細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)水平降低，，需進(jìn)一步進(jìn)行研究。 結(jié)論： 1、EPI序貫NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷具有協(xié)同作用。 2.其協(xié)同作用機(jī)制可能與以下兩方面相關(guān)：(1)乳腺癌細(xì)胞表面NKG2D活化性配體表達(dá)上調(diào)；(2) NK分泌IFN-γ、TNF-增多。 3、EPI序貫NK細(xì)胞治療方法適用于大多數(shù)類型的乳腺癌細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 表柔比星 NK細(xì)胞 免疫治療 協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞11-12
• 第1章 緒論12-14
• 第2章 綜述14-21
• 2.1 NK 細(xì)胞的概述14-15
• 2.2 NK 細(xì)胞受體15-16
• 2.3 NK 細(xì)胞的抗腫瘤機(jī)制16-17
• 2.4 NK 細(xì)胞治療腫瘤的基礎(chǔ)研究17
• 2.5 NK 細(xì)胞治療腫瘤的臨床策略17-20
• 2.5.1 自體 NK 細(xì)胞治療17-18
• 2.5.2 單克隆抗體介導(dǎo)的 NK 細(xì)胞殺傷腫瘤18-19
• 2.5.3 同種異體 NK 細(xì)胞過(guò)繼性免疫治療19
• 2.5.4 NK 細(xì)胞的基因修飾19-20
• 2.6 結(jié)論20-21
• 第3章 材料與方法21-30
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料21-23
• 3.1.1 細(xì)胞系21
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑21
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑配制說(shuō)明21-22
• 3.1.4 流式抗體22-23
• 3.1.5 主要儀器23
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法23-29
• 3.2.1 人乳腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)23-24
• 3.2.2 NK 細(xì)胞的體外誘導(dǎo)擴(kuò)增培養(yǎng)24
• 3.2.3 NK 細(xì)胞表面免疫表型、活化性受體和抑制性受體的鑒定24
• 3.2.4 臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞和 NK 細(xì)胞存活率24
• 3.2.5 EPI 對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用：MTT 法24-25
• 3.2.6 EPI 對(duì) NK 細(xì)胞增殖的抑制作用：MTT 法25
• 3.2.7 EPI 序貫 NK 細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)：鈣黃綠素-AM 釋放法25-27
• 3.2.8 檢測(cè) EPI 作用后乳腺癌細(xì)胞表面活化性受體 NKG2D 的配體表達(dá)的變化：流式細(xì)胞術(shù)27
• 3.2.9 檢測(cè) NK 細(xì)胞分泌 IFN-γ、TNF- 的變化：ELISA 法27-28
• 3.2.10 檢測(cè) NK 細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶 B 表達(dá)的變化：流式細(xì)胞術(shù)28-29
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 第4章 結(jié)果30-41
• 4.1 NK 細(xì)胞乳腺癌供者臨床資料30-31
• 4.2 NK 細(xì)胞表面免疫表型及活化性受體的鑒定31
• 4.3 EPI 對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用31-32
• 4.4 EPI 對(duì) NK 細(xì)胞增殖的抑制作用32-33
• 4.5 EPI 序貫 NK 細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)33-34
• 4.6 EPI 作用后乳腺癌細(xì)胞表面 NK 細(xì)胞活化性受體 NKG2D 配體表達(dá)的變化34-37
• 4.7 NK 細(xì)胞分泌 IFN-γ、TNF- 濃度的變化37
• 4.8 NK 細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶 B 表達(dá)的變化37-41
• 第5章 討論41-45
• 第6章 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果51-52
• 致謝52

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4 王s

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