本文關(guān)鍵詞：基于量子點熒光探針的腫瘤標志物GP73和腺苷的分析方法研究

  更多相關(guān)文章： QDs GP73蛋白 蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖微珠 熒光猝滅 腺苷 離子交換信號放大

【摘要】：量子點(quantum dots,QDs)又稱半導(dǎo)體納米晶,與傳統(tǒng)熒光染料相比有很多獨特的優(yōu)良性質(zhì),如熒光量子產(chǎn)率高、吸收光譜寬、發(fā)射光譜窄而對稱、斯托克斯位移大、耐光漂白等。作為一種新型的納米熒光探針,QDs在生物組織成像、免疫分析等方面顯示了廣闊的應(yīng)用前景。但是在生物分子檢測中,QDs與不同的物質(zhì)會發(fā)生非特異性吸附,其熒光信號容易被樣品中的各種雜質(zhì)干擾,從而影響靶物質(zhì)的檢測。而生物樣品的背景熒光干擾也會降低QDs檢測的靈敏性。因此,如何提高QDs熒光探針檢測生物分子的特異性和靈敏度,仍是需要研究的問題。本論文利用QDs分別發(fā)展了一種新型熒光免疫探針和離子交換熒光信號放大方法,并分別將其應(yīng)用于腫瘤標志物高爾基體糖蛋白73(golgi protein-73,GP73)和腺苷的生物分析中,以提高QDs熒光探針的特異性和靈敏度。1.GP73作為一種新型肝癌診斷的標志物,在正常人肝組織中很少表達,而在慢性肝臟疾病中,患者血清GP73含量升高,特別是在早期肝細胞性肝癌表現(xiàn)得尤為顯著。大量研究發(fā)現(xiàn),對于早期肝癌的診斷,GP73的敏感性要優(yōu)于肝癌的另一血清標志物甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)。臨床上檢測GP73的方法只有酶聯(lián)免疫吸附試驗,但是該方法操作復(fù)雜,費時較長。因此建立快速、簡便地檢測血清中GP73的方法非常重要。本文以GP73為目標分析物,利用Mn修飾Cd Te/Cd S QDs標記GP73抗體,然后與蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖微珠結(jié)合形成新型的免疫熒光探針,用于特異性地檢測血清樣品中的GP73�；贕P73對QDs-GP73抗體-蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖微珠免疫探針的熒光猝滅作用,我們建立了一種簡單、快速、低成本測定GP73的方法。在最優(yōu)條件下,當GP73濃度在20-150 ng m L-1范圍內(nèi),上述免疫熒光探針與GP73濃度呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.9935,檢測限(3?/K)為10 ng m L-1。2.QDs納米粒子由于其獨特的金屬組成成分,被廣泛地應(yīng)用于各種信號放大免疫技術(shù)中。在本研究中,我們利用QDs納米粒子發(fā)展了一種新型的離子交換熒光信號放大體系。首先利用適配體片段1(target binding aptamer 1,TBF1)結(jié)合的Fe3O4磁性納米粒子作為分離工具,適配體片段2(target binding aptamer 2,TBF2)結(jié)合的Cd Te QDs作為檢測探針,在靶物質(zhì)的存在下,形成Fe3O4-TBF1-target-QDs-TBF2三明治結(jié)構(gòu)體系。磁性分離后,加入一定量過量的Ag+作為離子交換溶液,由于三明治結(jié)構(gòu)中的QDs含有Cd2+,Ag Te相比于Cd Te更具有熱力學(xué)穩(wěn)定性,因此在常溫下Ag+就能夠快速地將Cd2+置換出來,將QDs完全破壞。再經(jīng)磁性分離后,上清液中剩余的Ag+可以定量地反映出三明治結(jié)構(gòu)中結(jié)合的QDs的濃度,從而得到靶物質(zhì)的濃度。而上清液中剩余的Ag+濃度可以通過Cd Te QDs進行檢測,因此具有很高的靈敏性和準確性。該方法不需要使用其它昂貴的熒光檢測探針,操作簡單,快速且靈敏度高。我們將該方法應(yīng)用于腫瘤標志物腺苷的檢測,并取得了良好的結(jié)果。
【關(guān)鍵詞】：QDs GP73蛋白 蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖微珠 熒光猝滅 腺苷 離子交換信號放大
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.43
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一章 基于量子點的熒光免疫分析方法測定腫瘤標志物GP739-35
• 1 前言9-12
• 2 試劑與儀器12-14
• 2.1 試劑12-13
• 2.2 儀器13-14
• 3 實驗部分14-19
• 3.1 Mn-Cd Te/Cd S QDs的制備14
• 3.2 實驗中熒光光譜和熒光量子產(chǎn)率的測定14-15
• 3.3 考察Mn-Cd Te/Cd S QDs在p H7.4 的磷酸緩沖溶液的穩(wěn)定性15
• 3.4 QDs-GP73抗體結(jié)合物的制備15
• 3.5 瓊脂糖凝膠電泳15-16
• 3.6 QDs與GP73抗體結(jié)合條件的優(yōu)化16-17
• 3.7 QDs-GP73抗體-瓊脂糖微珠熒光探針的制備17
• 3.8 SDS-PAGE電泳17
• 3.9 QDs-GP73抗體-瓊脂糖微珠熒光探針檢測條件優(yōu)化17-18
• 3.10 干擾實驗18
• 3.11 分析方法的驗證18-19
• 4 結(jié)果與討論19-31
• 4.1 實驗原理19-20
• 4.2 Cd Te、Cd Te/Cd S和Mn修飾的Cd Te/Cd S的光譜比較20-21
• 4.3 量子點與抗體共價結(jié)合的驗證21-22
• 4.4 QDs與抗體結(jié)合條件的優(yōu)化22-24
• 4.5 QDs-GP73抗體與蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖微珠結(jié)合的表征24-26
• 4.6 QDs-抗體與瓊脂糖微珠結(jié)合條件的優(yōu)化26-28
• 4.8 選擇性實驗28-29
• 4.9 干擾實驗29-30
• 4.10 分析方法的驗證30-31
• 5 小結(jié)31-32
• 參考文獻32-35
• 第二章 基于適配體結(jié)合的Cd Te QDs離子交換：一種新型的熒光信號放大體系用于腺苷的檢測35-58
• 1 前言35-37
• 2 試劑與儀器37-39
• 2.1 試劑37-38
• 2.2 儀器38-39
• 3 實驗部分39-43
• 3.1 Cd Te QDs的水相制備39
• 3.2 Fe_3O_4磁性納米粒子的制備39
• 3.3 Fe_3O_4與腺苷適配體ABA1的結(jié)合39
• 3.4 Cd Te QDs與腺苷適配體ABA2的結(jié)合39-40
• 3.5 瓊脂糖凝膠電泳40
• 3.6 三明治結(jié)構(gòu)反應(yīng)條件的優(yōu)化40-41
• 3.7 考察緩沖溶液對體系的影響41-42
• 3.8 考察Fe_3O_4磁性納米粒子對于離子交換反應(yīng)的影響42
• 3.9 離子交換信號放大反應(yīng)體系的條件優(yōu)化42
• 3.10 分析方法的驗證42-43
• 4 結(jié)果與討論43-54
• 4.1 實驗機理43-45
• 4.2 Cd Te QDs的光譜特征45
• 4.3 羧基修飾Fe_3O_4的紅外表征45-46
• 4.4 Fe3O4與ABA1結(jié)合的表征46
• 4.5 Cd Te QDs與ABA2結(jié)合的表征46-47
• 4.6 考察三明治結(jié)構(gòu)的最佳反應(yīng)條件47-50
• 4.7 考察緩沖溶液p H值對離子交換反應(yīng)的影響50-51
• 4.8 Fe3O4磁性納米粒子對于離子交換反應(yīng)的影響51-52
• 4.9 考察離子交換信號放大體系的最佳反應(yīng)條件52-53
• 4.10 標準曲線53-54
• 5 小結(jié)54-55
• 參考文獻55-58
• 綜述58-69
• 參考文獻65-69
• 碩士期間發(fā)表文章69-70
• 致謝70

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