本文關(guān)鍵詞：TM4SF1在人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231中的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞增殖和遷移能力的影響

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【摘要】：背景乳腺癌是全世界女性最常見的惡性腫瘤,大約占患癌女性的18%。最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)指出,全世界約有120萬女性被確診為乳腺癌。與發(fā)達(dá)國家相比,我國屬于乳腺癌的低發(fā)區(qū),但近年來的發(fā)病率增長趨勢明顯,目前約有47萬乳腺癌患者。由于早期診斷和治療方式的改善,越來越多的婦女得以存活,每年死于乳腺癌的絕對(duì)人數(shù)在逐年下降,其5年生存率約為50%-60%。然而,國內(nèi)外相關(guān)研究報(bào)道,侵襲和轉(zhuǎn)移仍然是臨床工作中乳腺癌治療的主要挑戰(zhàn),并是導(dǎo)致治療失敗和患者死亡的主要原因,且現(xiàn)階段,乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制還不完全清楚,加之現(xiàn)有分子靶向藥物使用的局限性和耐藥的出現(xiàn),因此,急切需要我們深入探索乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制和發(fā)現(xiàn)新的靶基因用于乳腺癌的治療。TM4SF1(Transmembrane-4-L-six-family-member-1)是四次跨膜蛋白L6超家族成員之一,其在肺癌,胰腺癌,前列腺癌,結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)異常高表達(dá),而在正常組織及正常血管內(nèi)皮細(xì)胞呈相對(duì)低表達(dá),該基因與腫瘤細(xì)胞的增殖,粘附,遷移,侵襲和腫瘤血管生成等密切相關(guān)。近年來,TM4SF1作為多種惡性腫瘤治療的新靶點(diǎn)被廣泛研究。目的1.對(duì)比研究TM4SF1在人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231中的表達(dá)情況,初步探討該基因與細(xì)胞惡性程度的相關(guān)性;2.采用si RNA靶向抑制TM4SF1基因后,分析兩種細(xì)胞的增殖、遷移能力的變化。方法采用Real-time PCR(Q-PCR)檢測人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231中TM4SF1 m RNA相對(duì)表達(dá)情況,并以人正常乳腺細(xì)胞系MCF-10A中TM4SF1m RNA的表達(dá)作為參照;應(yīng)用TM4SF1-si RNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MCF-7、MDA-MB-231兩種細(xì)胞株,采用Western blot方法分析轉(zhuǎn)染效果和TM4SF1蛋白表達(dá)情況;CCK-8法和劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測沉默TM4SF1前后2種細(xì)胞株增殖能力和遷移能力的變化。結(jié)果1.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的效率:特異性轉(zhuǎn)染TM4SF1-si RNA后,沉默組TM4SF1m RNA相對(duì)表達(dá)量較si NC組和空白對(duì)照組明顯下降,表明該基因成功被抑制(P0.01)。2.三種細(xì)胞株TM4SF1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量:正常乳腺癌細(xì)胞株MCF-10A TM4SF1 m RNA相對(duì)表達(dá)量為(0.016±0.004),乳腺癌細(xì)胞MCF-7 TM4SF1 m RNA相對(duì)表達(dá)量為(1.159±0.218),MDA-MB-231 TM4SF1 m RNA相對(duì)表達(dá)量為(1.396±0.199),MCF-7和MDA-MB-231的TM4SF1 m RNA相對(duì)表達(dá)量均高于MCF-10A的表達(dá)量(F=150.447,P0.01);高度惡性的三陰性乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231 TM4SF1m RNA相對(duì)表達(dá)量高于低度惡性的雌激素受體陽性細(xì)胞株MCF-7的表達(dá)量(P0.05)。3.Western blot結(jié)果:沉默組TM4SF1蛋白條帶明顯暗于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組,表明兩種乳腺癌細(xì)胞株已成功被轉(zhuǎn)染。4.CCK-8結(jié)果:MCF-7細(xì)胞沉默TM4SF1基因0h后,si NC組和si TM4SF1組的增殖力分別為:(0.113±0.015)、(0.112±0.010);24h后,上述實(shí)驗(yàn)組的增殖力分別為:(1.074±0.081)、(1.028±0.042);48h后,上述實(shí)驗(yàn)組的增殖力分別為:(1.114±0.061)、(1.021±0.055);72h后,上述實(shí)驗(yàn)組的增殖力分別為:(1.070±0.101)、(0.909±0.075)。MDA-MB-231細(xì)胞沉默TM4SF1基因0h后,si NC組和si TM4SF1組的增殖力分別為:(0.110±0.010)、(0.112±0.009);24h后,上述實(shí)驗(yàn)組的增殖力分別為:(1.296±0.072)、(1.199±0.055);48h后,上述實(shí)驗(yàn)組的增殖力分別為:(1.335±0.054)、(1.247±0.071);72h后,上述實(shí)驗(yàn)組的增殖力分別為:(1.261±0.047)、(1.123±0.097)。以上各段時(shí)間的si NC組和si TM4SF1組采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),結(jié)果均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果:沉默TM4SF1基因24h后,MCF-7 si NC組遷移率為(42.359±3.639)%,si TM4SF1組為(23.412±6.397)%,兩兩比較結(jié)果:t=4.459,P=0.011;MDA-MB-231 si NC組遷移率為(51.799±5.429)%,Si TM4SF1組為(30.549±5.978)%,兩兩比較結(jié)果:t=4.558,P=0.010。結(jié)論1.TM4SF1在乳腺癌細(xì)胞中較正常乳腺細(xì)胞呈現(xiàn)相對(duì)高表達(dá);2.TM4SF1基因增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的遷移能力,而與細(xì)胞的增殖能力相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3.TM4SF1可能與細(xì)胞的惡性程度正相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：TM4SF1 乳腺癌 轉(zhuǎn)染 細(xì)胞增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮略詞索引12-14
• 前言14-18
• 材料與方法18-27
• 結(jié)果27-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 綜述 乳腺癌分子靶向治療最新進(jìn)展37-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 個(gè)人簡歷及在研究生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文54-55
• 致謝55

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