本文關鍵詞：常山酮聯(lián)合放射治療對小鼠移植瘤免疫微環(huán)境影響及機制研究

  更多相關文章： 常山酮 放射治療 轉化生長因子-β 調節(jié)性T細胞 免疫微環(huán)境

【摘要】：目的:探討常山酮聯(lián)合放射治療對小鼠移植瘤免疫微環(huán)境影響,并探索其可能的機制。方法:將40只健康雌性C57BL/6J小鼠右后肢皮下接種Lewis細胞,建立Lewis肺癌移植瘤模型,接種后第6天(腫瘤長徑達0.5厘米大小時)進行實驗。挑選35只腫瘤負荷較相近小鼠隨機分為空白對照組、常山酮組、放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組,放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組,每組7只。對照組不做處理;常山酮組于接種后第6天至第15天予常山酮腹腔給藥,每只鼠2ug/0.1ml/d;放射治療組于接種后第8天、9天給予移植瘤6MV-X線照射,放射治療劑量為10Gy×2;放射治療聯(lián)合常山酮組給藥處理同常山酮組,放射治療的時間及劑量同放射治療組;放射治療聯(lián)合抑制劑組于接種后第6天至第15天予TGF-β抑制劑(SB431542終濃度1u M)腹腔給藥,每只小鼠0.1ml/d,放射治療處理同放射治療組。自治療開始每隔l天用游標卡尺測量瘤徑。接種后第15天(照射結束后第6天)各組隨機處死3只小鼠,取脾臟制備單細胞懸液后行FACS檢測脾臟淋巴細胞中CD4+CD25+Fox P3+調節(jié)性T細胞Treg細胞含量;剝離小鼠腫瘤組織,一部分制備單細胞懸液行FACS檢測腫瘤組織浸潤淋巴細胞中Treg細胞含量,剩余部分福爾馬林固定及凍存并通過免疫組織化學、Elisa、Western Blot等技術研究不同處理組移植瘤TGF-β信號傳導通路的變化;剩余小鼠觀察移植瘤生長抑制情況,并計算生存期。結果:流式結果顯示:空白對照組、常山酮組腫瘤浸潤淋巴細胞中Treg含量無明顯差異(P=0.989),放射治療組腫瘤浸潤淋巴細胞中Treg含量較對照組明顯升高(P0.001),聯(lián)合應用常山酮或TGF-β抑制劑組腫瘤組織浸潤淋巴細胞中Treg含量較放射治療組明顯下降(P值均0.05)。空白對照組、常山酮組脾臟Treg含量無明顯差異(P=0.742),單純放射治療組脾臟Treg含量較空白對照組明顯升高(P=0.021),放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組脾臟Treg含量較放射治療組明顯下降(P值均0.05);Elisa結果:空白對照組和常山酮組腫瘤組織中TGF-β水平無統(tǒng)計學差異(P=0.271),放射治療組TGF-β水平較對照組明顯升高(P=0.001),而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β水平較單純放射治療組均明顯降低(P值均0.05)。免疫組織化學結果:空白對照組和常山酮組腫瘤組織中TGF-β1低表達,放射治療組TGF-β1呈陽性表達,放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β1低表達。Western Blot結果顯示,各處理組Smad2蛋白表達無明顯差異,空白對照組與常山酮組p-Smad 2蛋白表達水平無明顯差異,放射治療組p-Smad 2蛋白表達較對照組升高,放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組p-Smad 2的表達較單純放射治療組降低;各組Smad 6蛋白表達水平亦有差異,常山酮組和空白對照組Smad 6蛋白表達無明顯差異,放射治療組Smad 6蛋白表達較對照組下降,而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組Smad 6的表達較單純放射治療組均升高。治療前各組小鼠腫瘤體積無統(tǒng)計學差異(P=0.377),治療后各時間點空白對照組及常山酮組小鼠腫瘤體積均無明顯差異(P值均0.05),放射治療結束后第5天,放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組移植瘤體積開始小于對照組(P值分別為0.008、0.023、0.007),放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積無統(tǒng)計學差異(P值均0.5),放射治療結束后第9天,放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積開始小于放射治療組(P值分別為0.049、0.025),治療后各時間點放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積均無明顯差異(P值均0.05)�？瞻讓φ战M及常山酮組小鼠生存期無統(tǒng)計學差異(P=0.784),OS分別為28天和34天,放射治療組、放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組生存期均顯著長于空白對照組(P值均0.05),OS分別為41天、53天、54天;放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組小鼠生存期未達到統(tǒng)計學差異(P=0.837),但均明顯長于放射治療組(P值均0.05)。結論:常山酮可以改善電離輻射所致的腫瘤免疫抑制狀態(tài)并增強放射治療療效,其可能作用機制是通過抑制腫瘤細胞內TGF-β信號傳導通路來實現(xiàn)的。
【關鍵詞】：常山酮 放射治療 轉化生長因子-β 調節(jié)性T細胞 免疫微環(huán)境
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 對象和方法14-26
• 1.1 材料與儀器14-16
• 1.1.1 實驗細胞與動物14
• 1.1.2 試劑14-15
• 1.1.3 耗材15
• 1.1.4 照射裝備及參數(shù)15
• 1.1.5 儀器設備15-16
• 1.2 實驗方法16-26
• 1.2.1 試劑的配制16
• 1.2.2 細胞培養(yǎng)16-18
• 1.2.3 動物的飼養(yǎng)管理18
• 1.2.4 移植瘤模型的建立18
• 1.2.5 小鼠分組及治療法18
• 1.2.6 小鼠腫瘤組織浸潤淋巴細胞及脾臟淋巴細胞中Treg含量測定18-20
• 1.2.7 Elisa法檢測小鼠腫瘤組織中TGF-β1 水平20-21
• 1.2.8 非生物素免疫組化二步法檢測腫瘤組織TGF-βl表達情況21-22
• 1.2.9 Western Blot法測定smad蛋白水平22-25
• 1.2.10 統(tǒng)計學方法25-26
• 結果26-32
• 2.1 各組小鼠腫瘤組織及脾臟淋巴細胞中Treg細胞含量26-28
• 2.2 各組小鼠移植瘤TGF-β1 水平28-30
• 2.2.1 Elisa法檢測小鼠移植瘤TGF-β1 水平28-29
• 2.2.2 免疫組織化學法檢測小鼠移植瘤TGF-β1 水平29-30
• 2.3 不同處理組TGF-β/smad通路蛋白表達變化30
• 2.4 各組小鼠腫瘤生長抑制情況及生存30-32
• 討論32-37
• 3.1 放射治療引起腫瘤免疫微環(huán)境中Treg細胞增多32-33
• 3.2 放射治療激活TGF-β 信號通路33-34
• 3.3 TGF-β 促進Tregs的增殖和分化，促進腫瘤的免疫逃避34-35
• 3.4 常山酮抑制放射治療導致的TGF-β 通路激活及腫瘤免疫微環(huán)境中Treg細胞增多35-37
• 結論37-38
• 參考文獻38-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 綜述45-60
• 綜述參考文獻53-60
• 致謝60

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本文編號：929831