本文關(guān)鍵詞：長鏈非編碼RNA在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平及對其生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：背景及目的多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是人類漿細(xì)胞病中最常見的一種類型,約占所有血液系統(tǒng)腫瘤的10%,好發(fā)于中老年人,但病因尚不清楚。其是由于惡性漿細(xì)胞在骨髓內(nèi)增殖、浸潤并導(dǎo)致大量單克隆免疫球蛋白在體內(nèi)不同部位分泌與沉積,從而引起了腎功能不全、高黏滯綜合征、骨質(zhì)破壞、貧血、高鈣血癥、淀粉樣變性等一系列臨床表現(xiàn)。雖然近10年來,隨著新藥的不斷研發(fā)與干細(xì)胞移植術(shù)的開展,MM患者的總體生存時間和生活質(zhì)量都得到了極大的提高,但MM至今仍然是一種難以治愈的疾病。MM是一種高度異質(zhì)性疾病,患者的首發(fā)癥狀、臨床表現(xiàn)及生存時間等都具有明顯的差異性,因此個體化治療方式的選擇及對其進(jìn)行分期分層等預(yù)后評估具有極大的臨床意義。因此尋找新的判斷預(yù)后及治療的方法成為當(dāng)今MM研究重點和熱點,尋找對MM有效的判斷預(yù)后的標(biāo)志物及新的治療靶點具有重要的臨床意義,新的特征性靶分子可能為尋找MM的治療及預(yù)后評估的新途徑提供可能。研究表明表觀遺傳與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系密切,表觀遺傳受非編碼RNA(ncRNA)調(diào)控,隨著對ncRNA的認(rèn)識的深入,人們越來越關(guān)注屬于ncRNA范疇內(nèi)的長鏈非編碼RNA所具有的重要調(diào)控功能。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類長度超過200nt的RNA分子,不具備編碼蛋白的能力或者只能編碼很短的多肽,可通過與DNA、RNA、蛋白質(zhì)等分子的互相作用,在多個水平發(fā)揮極為重要的調(diào)控功能。大量研究證明lncRNA廣泛參與調(diào)控人類生長發(fā)育和細(xì)胞的增殖、凋亡、周期等正常的生理活動,也與心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病及癌癥等的發(fā)生具有相關(guān)性。尤其發(fā)現(xiàn)lncRNA與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及患者的預(yù)后及治療效果評價之間關(guān)系密切,因此研究lncRNA在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其相應(yīng)的機(jī)制非常重要,本課題組前期通過最新的生物學(xué)信息方法,整合大通量數(shù)據(jù)庫,篩選出了可能與多發(fā)性骨髓瘤患者預(yù)后相關(guān)的lncRNA,分別是CRNDE、PMS2P3和LOC400657,但lncRNA CRNDE、PMS2P3和LOC400657在MM中尚無相關(guān)報道。方法本研究選取的MM骨髓樣本均來自于在我院接受PAD方案治療的MM患者。我們將120例MM患者的骨髓瘤細(xì)胞作為實驗組,將10例正常人骨髓漿細(xì)胞作為正常健康對照組,應(yīng)用qRT-PCR方法檢測目的lncRNACRNDE、PMS2P3和LOC400657的表達(dá)水平并應(yīng)用Kolmogorov-Smirnov進(jìn)行正態(tài)性檢驗。以檢測的目的lncRNA的原始表達(dá)量的中位數(shù)為界值,即將120例MM患者骨髓瘤細(xì)胞中目的基因的表達(dá)水平由高到低排列,以目的lncRNA的中位表達(dá)量作為界值,將MM患者劃分為高、低目的lncRNA表達(dá)水平組,每組60例患者,并結(jié)合患者的臨床病理資料,分析兩組間的年齡、血鈣、性別、血紅蛋白、肌酐、血小板、乳酸脫氫酶、β2微球蛋白和染色體檢查等相關(guān)指標(biāo)的差異;并結(jié)合接受硼替佐米+表柔比星+地塞米松(pad)化療后2療程和4療程的患者的療效進(jìn)行分析;通過隨訪患者的疾病無進(jìn)展生存時間(pfs)和總體生存時間(os),探究目的lncrna的高低表達(dá)水平與mm患者預(yù)后的相關(guān)性。我們應(yīng)用干擾sirna下調(diào)骨髓瘤細(xì)胞系rpmi-8226、u266中crnde的表達(dá)水平,通過細(xì)胞增殖、凋亡、周期等細(xì)胞功能實驗研究crnde對于mm細(xì)胞生物功能的影響。結(jié)果(1)正態(tài)性分布檢驗分析發(fā)現(xiàn)目的基因的表達(dá)量不成正態(tài)分布(k-s檢驗,p0.05),對目的基因的表達(dá)量進(jìn)行對數(shù)處理后呈正態(tài)分布(k-s檢驗,p0.05)。我們發(fā)現(xiàn)三個目的lncrnacrnde、pms2p3和loc400657在mm患者的骨髓瘤細(xì)胞中均呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá):相較于正常對照,lgcrnde的相對表達(dá)量為實驗組2.432±0.029vs.正常對照組0.144±0.029(p0.01);lgpms2p3的相對表達(dá)量為實驗組2.135±0.033vs.正常對照組0.169±0.038(p0.01);lgloc400657的相對表達(dá)量為實驗組2.410±0.033vs.正常對照-0.027±0.057(p0.01)。(2)結(jié)合mm患者的臨床病理指標(biāo)分析結(jié)果顯示,高表達(dá)crnde的患者相較于低表達(dá)crnde的患者,在iss分期(p=0.027)、血小板(p=0.032)、p53缺失(p=0.032)、13q14.3缺失(p=0.009)及1q21擴(kuò)增(0.026)方面存在差異;高表達(dá)pms2p3的患者相較于低表達(dá)pms2p3的患者,乳酸脫氫酶(p=0.043)、p53缺失(p=0.032)及13q14.3缺失(p=0.003)方面存在差異;高表達(dá)loc400657的患者相較于低表達(dá)loc400657的患者,β2-mg(p=0.036)及13q14.3缺失(p=0.025)方面存在差異。(3)療效分析結(jié)果顯示crnde、pms2p3和loc400657在mm患者的骨髓瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平與患者接受2個療程及4個療效pad治療方案的療效無顯著相關(guān)性。(4)預(yù)后因素分析顯示mm患者的骨髓瘤細(xì)胞中高表達(dá)crnde的患者,其pfs(p=0.035)、os(p=0.030)相較于低表達(dá)crnde的mm患者要差。多因素分析并未發(fā)現(xiàn)crnde在骨髓瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平能夠作為判斷mm患者os的獨立預(yù)后因素(p=0.140)。(5)細(xì)胞功能實驗結(jié)果表明,下調(diào)crnde在骨髓瘤細(xì)胞中的表達(dá),能夠顯著抑制細(xì)胞的增殖,使細(xì)胞凋亡增加,并能夠?qū)е耮0/g1細(xì)胞周期阻滯。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn),相較于正常人群,crnde、pms2p3和loc400657在mm患者骨髓瘤細(xì)胞中顯著上調(diào)表達(dá)。骨髓瘤細(xì)胞中高表達(dá)crnde的mm患者的pfs及os更短,但多因素分析未發(fā)現(xiàn)crnde高表達(dá)可作為預(yù)測mm預(yù)后的獨立危險因素,為crnde、pms2p3和loc400657應(yīng)用于mm的進(jìn)一步深入研究提供理論依據(jù),為尋找mm潛在的特征性靶向分子提供思路。下調(diào)骨髓瘤細(xì)胞系rpmi-8226、u266細(xì)胞中crnde的表達(dá)后可抑制骨髓瘤細(xì)胞增殖并促進(jìn)骨髓瘤細(xì)胞凋亡,使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,提示CRNDE可能通過影響細(xì)胞增殖與凋亡促進(jìn)MM的發(fā)生、發(fā)展。這些新的研究發(fā)現(xiàn)將為今后深入研究MM分子機(jī)制及治療新靶點提供新思路。
【關(guān)鍵詞】：lncRNA CRNDE PMS2P3 LOC400657 多發(fā)性骨髓瘤
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.3
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 中英文略縮詞表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 三個LncRNA在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平及與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析14-41
• 一、資料和方法15-21
• 二、實驗結(jié)果21-34
• 三、討論34-36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 第二部分 LncRNACRNDE對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞功能的影響41-55
• 一、材料與方法41-46
• 二、實驗結(jié)果46-51
• 三、討論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 綜述55-67
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 致謝67

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本文編號：928013