發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 22:27

  本文關(guān)鍵詞：CAL-101聯(lián)合BTZ殺傷套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的機(jī)制探討

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【摘要】：目的:探索新藥PI3K-p110σ抑制劑CAL-101聯(lián)合硼替佐米(Bortezomib,BTZ)對人套細(xì)胞淋巴瘤(mantle celllymphoma,MCL)細(xì)胞株增殖和凋亡的影響,并研究聯(lián)合作用的可能機(jī)制,以期為新藥CAL-101在套細(xì)胞淋巴瘤的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法:1.用不同濃度的CAL-101(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、100μmol/L)和BTZ(0.02、0.04、0.08、0.16、0.32μmol/L)分別處理套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株HBL-2、Jeko-1和Z138細(xì)胞24、48、72小時(shí),用四甲基偶氮唑(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法計(jì)算出細(xì)胞增值抑制率;2.應(yīng)用SPSS13.0軟件分別計(jì)算兩藥的IC50值;3.設(shè)計(jì)協(xié)同實(shí)驗(yàn):將細(xì)胞分為對照組(未加任何藥物)、CAL-101組(加入20%、40%、60%、80%和100%CAL-101的IC50值)、BTZ組(20%、40%、60%、80%和100%BTZ的IC50)和CAL-101+BTZ組(CAL-101和BTZ的濃度同單藥組),分別處理三種套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株HBL-2、Jeko-1和Z138細(xì)胞48小時(shí);4.應(yīng)用協(xié)同分析軟件CalcuSyn software(Biosoft,Ferguson,MO,美國)軟件分析協(xié)同指數(shù)(CI);5.Western Blot檢測蛋白PI3K-p110σ在3種細(xì)胞株的表達(dá)情況;6.Western Blot檢測不同濃度的CAL-101處理3種細(xì)胞株后AKT、ERK、p-AKT、p-ERK的變化;7.用anexinV-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測這4組的細(xì)胞凋亡率;8.并用TransaM NF-κB p65轉(zhuǎn)錄因子試劑盒檢測這4組的NF-κB p65的活性;9.Western Blot檢測p-AKT及Caspase-3蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1.單藥CAL-101可抑制Z138、HBL-2和Jeko-1細(xì)胞增殖:10μmol/L、20μmol/l、40μmol/l、80μmol/l、100μmol/l的cal-101作用于z138細(xì)胞48小時(shí)的抑制率分別為:(17±1.2)%、(27±3.6)%、(41±3.6)%、(55±0.2)%、(62±3.5)%,作用于hbl-2的48小時(shí)抑制率為:(20±0.4)%、(35±0.2)%、(43±0.3)%、(53±0.6)%、(59±0.2)%,作用于jeko-1的48小時(shí)抑制率為(15±1.4)%、(27±2.7)%、(38±3.8)%、(47±0.7)%、(59±0.1)%;2.單藥cal-101處理z138、hbl-2和jeko-1的48小時(shí)的ic50分別:56.957±0.6364、62.99±0.57003、77.82±0.65339,btz單藥作用于z138、hbl-2和jeko-1細(xì)胞48h的ic50分別為:(0.7±0.8)μmol/l、(1.4±0.3)μmol/l和(1.5±0.4)μmol/l;3.協(xié)同實(shí)驗(yàn):cal-101組(加入18、36、54、72和90μmol/lcal-101)、btz組(加入0.06、0.12、0.18、0.24和0.30μmol/lbtz)和cal-101+btz組(cal-101和btz的濃度同單藥組)處理3種mcl細(xì)胞株。80%ic50值處理z138細(xì)胞48小時(shí)后,此三組的增殖抑制率分別為:(38.5±1.4)%、(35.6±5.1)%、(58.1±6.1)%;對hbl-2細(xì)胞的增殖抑制率分別為(42.3±1.2)%、(35.7±1.6)%、(67.3±3.3)%;對jeko-1細(xì)胞的增殖抑制率分別為(33.2±1.2)%、(36.0±1.1)%、(56.5±2.9)%;4.calcusynsoftware軟件分析結(jié)果為cal-101聯(lián)合btz兩藥有協(xié)同抑制增值作用(ci1);5.westernblot檢測發(fā)現(xiàn)hbl-2、jeko-1、z138細(xì)胞均表達(dá)pi3k-p110σ;6.不同濃度的cal-101處理z138、hbl-2、jeko-1細(xì)胞后p-akt、p-erk蛋白表達(dá)量隨藥物濃度的增加而降低,akt、erk無明顯變化;7.cal-101聯(lián)合btz的可協(xié)同促進(jìn)mcl細(xì)胞的凋亡:經(jīng)藥物處理48h后,對照組、cal-101組、btz組和cal-101+btz組對z138細(xì)胞的凋亡率為:(2.6±1.8)%、(40.0±3.0)%、(34.0±1.0)%和(67.4±1.0)%,經(jīng)藥物處理96h后,此四組對hbl-2細(xì)胞的凋亡率分別為(7.4±0.6)%、(30.7±5.7)%、(12.0±1.0)%和(85.0±4.0)%,(p0.01);8.cal-101聯(lián)合btz能進(jìn)一步抑制nf-κb的活性:z138細(xì)胞經(jīng)對照組、cal-101組、btz組和cal-101+btz組處理后nf-κb蛋白的表達(dá)量分別為1.0、(43.3±1.2)%、(43.2±1.2)%、(22.2±0.6)%;hbl-2細(xì)胞經(jīng)四組處理后nf-κb蛋白的表達(dá)量分別為1.0、(35.7±0.4)%、(36.8±1.0)%、(23.1±1.3)%;jeko-1細(xì)胞經(jīng)四組處理后nf-κb蛋白的表達(dá)量分別為1.0、(46.1±1.0)%、(54.2±0.5)%、(22.5±0.5)%(P0.05);9.Western Blot證實(shí):CAL-101聯(lián)合BTZ可顯著抑制AKT磷酸化(P0.05);CAL-101聯(lián)合BTZ可使凋亡蛋白Casepase-3裂解片段表達(dá)水平升高(P0.05)。結(jié)論:PI3K/AKT和ERK信號通路在MCL腫瘤細(xì)胞中被異常激活,從而使腫瘤細(xì)胞獲得無限增殖、侵襲和耐藥的能力。因此抑制PI3K/AKT和ERK信號通路中的關(guān)鍵蛋白分子的活性,關(guān)閉或減弱此信號通路的傳導(dǎo),最終可抑制腫瘤細(xì)胞的無限增殖、侵襲和耐藥的能力。本研究證實(shí)CAL-101對套細(xì)胞淋巴瘤有毒性作用,當(dāng)聯(lián)合BTZ時(shí)細(xì)胞毒性作用增強(qiáng),可能是CAL-101可通過抑制PI3K/AKT信號通路的活化,增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞對BTZ的敏感性,另一方面,PI3K/AKT、NF-κB信號通路關(guān)閉或消弱后,裂解的Caspase-3表達(dá)量上調(diào),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制增殖。當(dāng)然,這種聯(lián)合作用還有待于今后臨床實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步證實(shí)。
【關(guān)鍵詞】：套細(xì)胞淋巴瘤 CAL-101 硼替佐米 協(xié)同 增殖 凋亡
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語/符號說明12-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、CAL-101單藥或聯(lián)合BTZ對套淋巴瘤細(xì)胞增殖影響17-23
• 1.1 材料、試劑與儀器17-19
• 1.1.1 細(xì)胞系17
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑17
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 1.1.4 主要試劑配置18-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 1.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代與凍存19
• 1.2.2 細(xì)胞抑制率測定19-21
• 1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21
• 1.3 結(jié)果21-23
• 1.3.1 CAL-101單藥或聯(lián)合BTZ對Z138、HBL-2 和Jeko-1 細(xì)胞增殖的影響21-23
• 二、CAL-101聯(lián)合BTZ細(xì)胞毒作用的機(jī)制探討23-33
• 2.1 材料、試劑與儀器23-24
• 2.1.1 細(xì)胞系23
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑23
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器23-24
• 2.1.4 主要試劑配制24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-28
• 2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代與凍存25
• 2.2.2 Western blot法檢測細(xì)胞中PI3K/Akt和ERK通路蛋白的表達(dá)25-27
• 2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡27
• 2.2.4 酶聯(lián)免疫吸附法測細(xì)胞中核因子κB（NF-kB）27-28
• 2.2.5 Western blot法檢測細(xì)胞中p-Akt和caspase-3 蛋白的表達(dá)28
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法28
• 2.3 結(jié)果28-33
• 2.3.1 CAL-101聯(lián)合BTZ的可協(xié)同促進(jìn)MCL細(xì)胞的凋亡28-30
• 2.3.2 CAL-101抑制PI3K/AKT和ERK信號通路的活化30
• 2.3.3 CAL-101聯(lián)合BTZ可顯著抑制AKT磷酸化30-31
• 2.3.4 CAL-101聯(lián)合BTZ可明顯抑制NF-κB的活性31-32
• 2.3.5 CAL-101聯(lián)合BTZ可促進(jìn)凋亡蛋白caspase-3 的表達(dá)32-33
• 討論33-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 綜述52-69
• 綜述參考文獻(xiàn)60-69
• 致謝69

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 姚遠(yuǎn);易平勇;劉晰宇;周芳;孫中義;歐陽周;賀軍僑;黃利軍;;自體外周血造血干細(xì)胞移植聯(lián)合大劑量化療治療套細(xì)胞淋巴瘤的臨床觀察[J];腫瘤藥學(xué);2014年01期

2 曾郁;易祥華;梁軍;吳運(yùn)瑾;肖立;丁懿;;多形性母細(xì)胞型套細(xì)胞淋巴瘤1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2013年12期

3 劉耀;張曦;;套細(xì)胞淋巴瘤的治療現(xiàn)狀及進(jìn)展[J];臨床薈萃;2014年10期

4 曹利紅;金潔;;套細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后分層[J];中國實(shí)用內(nèi)科雜志;2015年02期

5 熊竹娟;周祥;吳萍;周進(jìn);魏雯;敬小梅;任苑蓉;李力;張智慧;;21例套細(xì)胞淋巴瘤臨床治療及預(yù)后分析[J];腫瘤預(yù)防與治療;2015年04期

6 劉雪花;龔玉萍;;套細(xì)胞淋巴瘤的研究進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年20期

7 李四強(qiáng);侯忠赤;宮超;;Hyper-CVAD/MA化療方案臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2014年03期

8 王芳;張新偉;張翼澾;魏楓;任秀寶;;FDCs-miR-548m-CDK6軸在套細(xì)胞淋巴瘤集落形成中的研究[J];中國腫瘤臨床;2014年18期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 金雪立;B淋巴細(xì)胞激活因子BAFF及其特異性受體BAFF-R在非霍奇金B(yǎng)細(xì)胞淋巴瘤中的作用、作用機(jī)制和臨床意義的研究[D];浙江大學(xué);2015年

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本文編號：926077