本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細胞CGI-58在結(jié)腸癌惡性進展中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤相關(guān)巨噬細胞 結(jié)腸癌 CGI-58

【摘要】：結(jié)直腸癌是一種常見的消化道惡腫瘤,其發(fā)病率在其他惡性腫瘤中排名第三[1]。像其他實體瘤一樣,腫瘤的發(fā)生發(fā)展與多種炎性細胞的介導相關(guān),其中也包括了巨噬細胞[2,3]。新近報道稱,浸潤在腫瘤組織中的巨噬細胞稱為腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAMs)[4,5]。腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAMs)活化介導的炎性微環(huán)境在腫瘤惡性進展過程中起重要作用。炎性因子促進腫瘤的發(fā)展在以往的研究中較多,然而新近研究表明間質(zhì)細胞的代謝重編程在調(diào)節(jié)腫瘤生物學中起著至關(guān)重要的作用[6-8]。CGI-58,又名ABHD5,是一種新發(fā)現(xiàn)的促進脂肪分解的輔酶,廣泛表達于人體各個組織器官中。我們在免疫組化和巨噬細胞-結(jié)腸癌細胞共培養(yǎng)體系的實驗中發(fā)現(xiàn),CGI-58的表達在腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAMs)中是明顯升高的。我們運用本實驗室巨噬細胞-結(jié)腸癌細胞共培養(yǎng)體系,特異性敲低巨噬細胞CGI-58和過表達巨噬細胞CGI-58,并運用體內(nèi)和體外實驗證明了巨噬細胞CGI-58在結(jié)腸癌細胞增殖、凋亡和侵襲能力的影響,揭示了巨噬細胞CGI-58對結(jié)腸癌惡性進展的影響。同時我們進一步用Western blot和Real-time PCR法來探討其可能的機制,發(fā)現(xiàn)巨噬細胞在CGI-58缺失的情況下,可抑制FOXO1的磷酸化,進而增強其轉(zhuǎn)錄活性,促進IL-1β的表達。我們的研究以腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAMs)脂質(zhì)代謝異常為切入點,率先解析腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAMs)CGI-58在慢性炎癥和結(jié)腸癌惡性進展的中的作用,研究結(jié)果對于從腫瘤微環(huán)境角度尋找結(jié)腸癌的有效防治策略有重要指導意義。目的:研究腫瘤相關(guān)巨噬細胞在CGI-58在結(jié)腸癌惡性進展中所起的作用。方法:1.CGI-58在腫瘤相關(guān)巨噬細胞中的表達為了研究結(jié)腸癌中的脂代謝重編程與腫瘤相關(guān)巨噬細胞的關(guān)系,我們運用免疫組化的方法來檢測人類結(jié)腸癌及癌旁組織和小鼠結(jié)腸癌及癌旁組織,并根據(jù)Remmele和stegner提出的免疫反應評分(Immunoreactive Score簡稱IRS)來評價免疫組化染色的情況,觀察CGI-58在腫瘤相關(guān)巨噬細胞的表達情況。在細胞水平上,我們運用小鼠結(jié)腸癌細胞系CT26和MC38的條件上清液來處理巨噬細胞RAW2647,并用正常培養(yǎng)基處理的raw2647來做對照,用westernblot和realtimepcr法來檢測不同處理條件下cgi-58的表達情況。2.腫瘤相關(guān)巨噬細胞cgi-58促進結(jié)腸癌細胞的惡性進展為了進一步研究腫瘤相關(guān)巨噬細胞cgi-58在結(jié)腸癌進展中的作用,我們采用慢病毒介導的基因穩(wěn)定敲低或升高raw264.7中的cgi-58表達,westernblot分析實驗結(jié)果及使用藥物進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株的篩選,以獲得穩(wěn)定的細胞克隆株。在體外實驗中,分別用收取巨噬細胞條件培養(yǎng)基、巨噬細胞cgi-58敲低組條件培養(yǎng)基和巨噬細胞cgi-58過表達組條件培養(yǎng)基來處理小鼠結(jié)腸癌細胞ct26,并分別運用cck-8、細胞周期、細胞凋亡annexinvfitc、克隆形成實驗來檢測腫瘤相關(guān)巨噬細胞cgi-58是否影響結(jié)腸癌的進展。體內(nèi)實驗中,我們將babl/c小鼠用ct26細胞系接種上皮下瘤,并分別用巨噬細胞條件培養(yǎng)基和巨噬細胞cgi-58敲低組條件培養(yǎng)基、巨噬細胞條件培養(yǎng)基和巨噬細胞條件培養(yǎng)基巨噬細胞cgi-58高表達組條件培養(yǎng)基來皮下注射瘤周,并觀察腫瘤的大小。3.巨噬細胞cgi-58促進結(jié)腸癌細胞惡性增殖的機制初探。我們將巨噬細胞cgi-58高表達組、巨噬細胞cgi-58缺失組、正常巨噬細胞組及加入foxo1的抑制as1842856劑處理的巨噬細胞組,利用westernblot和realtimepcr法來檢測巨噬細胞cgi-58對il-1β和foxo1的表達調(diào)控。結(jié)論:1.在免疫組化實驗中,cgi-58的表達量在腫瘤相關(guān)巨噬細胞atms中明顯地高于癌旁巨噬細胞。用小鼠結(jié)腸癌細胞系ct26、mc38條件培養(yǎng)基處理的巨噬細胞與正常培養(yǎng)基處理的巨噬細胞比較,其cgi-58的表達水平更高。我們得出結(jié)論cgi-58的表達在腫瘤相關(guān)巨噬細胞tams中升高的,cgi-58可能在脂質(zhì)聚集較多的tams起到了分解作用。2.巨噬細胞cgi-58敲低條件培養(yǎng)基處理小鼠結(jié)腸癌細胞ct26,較巨噬細胞條件培養(yǎng)基,其腫瘤細胞增殖明顯降低、細胞周期的g1期增加、克隆形成率較低,而巨噬細胞cgi-58高表達組結(jié)果相反。在皮下瘤瘤模型中,我們統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)用巨噬細胞cgi-58敲低組條件培養(yǎng)基處理的皮下瘤體積較對照巨噬細胞條件培養(yǎng)基處理組小,小鼠的存活率更高。我們可以得出結(jié)論,腫瘤相關(guān)巨噬細胞cgi-58缺失的情況下可以抑制結(jié)腸癌的惡性進展。3.巨噬細胞cgi-58敲低組較之對照組,il-1β表達明顯上調(diào),foxo1的磷酸化水平降低,提示FOXO1轉(zhuǎn)錄激活;而先前研究表明,FOXO1可調(diào)控IL-1β的轉(zhuǎn)錄表達,因此我們推測CGI-58缺失可能通過激活FOXO1蛋白轉(zhuǎn)錄活性而促進IL-1β的mRNA水平。而在腫瘤相關(guān)巨噬細胞中,CGI-58表達升高,我們猜測:CGI-58/FOXO1通路可介導M2型巨噬細胞形成,發(fā)揮促瘤效應。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤相關(guān)巨噬細胞 結(jié)腸癌 CGI-58
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 CGI-58在腫瘤相關(guān)巨噬細胞中的表達升高13-24
• 2.1 材料與方法13-21
• 2.2 結(jié)果21-23
• 2.3 討論23-24
• 第三章 腫瘤相關(guān)巨噬細胞CGI-58升高促進結(jié)腸癌細胞的惡性增殖24-34
• 3.1 材料與方法24-27
• 3.2 結(jié)果27-32
• 3.3 討論32-34
• 第四章 巨噬細胞CGI-58促進結(jié)腸癌細胞惡性增殖的機制初探34-39
• 4.1 材料與方法34
• 4.2 結(jié)果34-37
• 4.3 討論37-39
• 全文結(jié)論39-40
• 參考文獻40-44
• 文獻綜述 腫瘤相關(guān)巨噬細胞在結(jié)直腸癌中的作用44-51
• 參考文獻49-51
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況51-52
• 致謝52

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;豚鼠巨噬細胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細胞毒作用[J];國外醫(yī)學參考資料(衛(wèi)生學分冊);1976年04期

2 鄧俠進;;巨噬細胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學院學報;1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細胞的影響[J];煤礦醫(yī)學;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學院學報;1990年02期

5 謝志堅;巨噬細胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學綜述;2001年06期

6 饒艷;運動及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學;2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細胞的影響[J];浙江醫(yī)學教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細胞系[J];醫(yī)學綜述;2004年03期

9 韋錦學;顧軍;;巨噬細胞的激活誘導死亡[J];生命科學;2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細胞促進腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結(jié)巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質(zhì)氧化介導的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學術(shù)會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學術(shù)會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學術(shù)會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學學術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉毎?THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學會第五次學術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預研究[D];武漢大學;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學;2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機制[D];山東大學;2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調(diào)節(jié)的機制研究[D];山東大學;2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調(diào)控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學;2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導ESAT-6誘導巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 韓露;TRB3介導的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導巨噬細胞極化效應對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉(zhuǎn)導的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復旦大學;2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞CCL5分泌的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用及機制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：923232