發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 11:25

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞CGI-58在結(jié)腸癌惡性進(jìn)展中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 結(jié)腸癌 CGI-58

【摘要】：結(jié)直腸癌是一種常見的消化道惡腫瘤,其發(fā)病率在其他惡性腫瘤中排名第三[1]。像其他實(shí)體瘤一樣,腫瘤的發(fā)生發(fā)展與多種炎性細(xì)胞的介導(dǎo)相關(guān),其中也包括了巨噬細(xì)胞[2,3]。新近報(bào)道稱,浸潤在腫瘤組織中的巨噬細(xì)胞稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)[4,5]。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)活化介導(dǎo)的炎性微環(huán)境在腫瘤惡性進(jìn)展過程中起重要作用。炎性因子促進(jìn)腫瘤的發(fā)展在以往的研究中較多,然而新近研究表明間質(zhì)細(xì)胞的代謝重編程在調(diào)節(jié)腫瘤生物學(xué)中起著至關(guān)重要的作用[6-8]。CGI-58,又名ABHD5,是一種新發(fā)現(xiàn)的促進(jìn)脂肪分解的輔酶,廣泛表達(dá)于人體各個(gè)組織器官中。我們在免疫組化和巨噬細(xì)胞-結(jié)腸癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),CGI-58的表達(dá)在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)中是明顯升高的。我們運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)室巨噬細(xì)胞-結(jié)腸癌細(xì)胞共培養(yǎng)體系,特異性敲低巨噬細(xì)胞CGI-58和過表達(dá)巨噬細(xì)胞CGI-58,并運(yùn)用體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證明了巨噬細(xì)胞CGI-58在結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲能力的影響,揭示了巨噬細(xì)胞CGI-58對結(jié)腸癌惡性進(jìn)展的影響。同時(shí)我們進(jìn)一步用Western blot和Real-time PCR法來探討其可能的機(jī)制,發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞在CGI-58缺失的情況下,可抑制FOXO1的磷酸化,進(jìn)而增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性,促進(jìn)IL-1β的表達(dá)。我們的研究以腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)脂質(zhì)代謝異常為切入點(diǎn),率先解析腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)CGI-58在慢性炎癥和結(jié)腸癌惡性進(jìn)展的中的作用,研究結(jié)果對于從腫瘤微環(huán)境角度尋找結(jié)腸癌的有效防治策略有重要指導(dǎo)意義。目的:研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在CGI-58在結(jié)腸癌惡性進(jìn)展中所起的作用。方法:1.CGI-58在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中的表達(dá)為了研究結(jié)腸癌中的脂代謝重編程與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的關(guān)系,我們運(yùn)用免疫組化的方法來檢測人類結(jié)腸癌及癌旁組織和小鼠結(jié)腸癌及癌旁組織,并根據(jù)Remmele和stegner提出的免疫反應(yīng)評分(Immunoreactive Score簡稱IRS)來評價(jià)免疫組化染色的情況,觀察CGI-58在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的表達(dá)情況。在細(xì)胞水平上,我們運(yùn)用小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系CT26和MC38的條件上清液來處理巨噬細(xì)胞RAW2647,并用正常培養(yǎng)基處理的raw2647來做對照,用westernblot和realtimepcr法來檢測不同處理?xiàng)l件下cgi-58的表達(dá)情況。2.腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞cgi-58促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的惡性進(jìn)展為了進(jìn)一步研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞cgi-58在結(jié)腸癌進(jìn)展中的作用,我們采用慢病毒介導(dǎo)的基因穩(wěn)定敲低或升高raw264.7中的cgi-58表達(dá),westernblot分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果及使用藥物進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選,以獲得穩(wěn)定的細(xì)胞克隆株。在體外實(shí)驗(yàn)中,分別用收取巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基、巨噬細(xì)胞cgi-58敲低組條件培養(yǎng)基和巨噬細(xì)胞cgi-58過表達(dá)組條件培養(yǎng)基來處理小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞ct26,并分別運(yùn)用cck-8、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡annexinvfitc、克隆形成實(shí)驗(yàn)來檢測腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞cgi-58是否影響結(jié)腸癌的進(jìn)展。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們將babl/c小鼠用ct26細(xì)胞系接種上皮下瘤,并分別用巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基和巨噬細(xì)胞cgi-58敲低組條件培養(yǎng)基、巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基和巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基巨噬細(xì)胞cgi-58高表達(dá)組條件培養(yǎng)基來皮下注射瘤周,并觀察腫瘤的大小。3.巨噬細(xì)胞cgi-58促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞惡性增殖的機(jī)制初探。我們將巨噬細(xì)胞cgi-58高表達(dá)組、巨噬細(xì)胞cgi-58缺失組、正常巨噬細(xì)胞組及加入foxo1的抑制as1842856劑處理的巨噬細(xì)胞組,利用westernblot和realtimepcr法來檢測巨噬細(xì)胞cgi-58對il-1β和foxo1的表達(dá)調(diào)控。結(jié)論:1.在免疫組化實(shí)驗(yàn)中,cgi-58的表達(dá)量在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞atms中明顯地高于癌旁巨噬細(xì)胞。用小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系ct26、mc38條件培養(yǎng)基處理的巨噬細(xì)胞與正常培養(yǎng)基處理的巨噬細(xì)胞比較,其cgi-58的表達(dá)水平更高。我們得出結(jié)論cgi-58的表達(dá)在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞tams中升高的,cgi-58可能在脂質(zhì)聚集較多的tams起到了分解作用。2.巨噬細(xì)胞cgi-58敲低條件培養(yǎng)基處理小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞ct26,較巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基,其腫瘤細(xì)胞增殖明顯降低、細(xì)胞周期的g1期增加、克隆形成率較低,而巨噬細(xì)胞cgi-58高表達(dá)組結(jié)果相反。在皮下瘤瘤模型中,我們統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)用巨噬細(xì)胞cgi-58敲低組條件培養(yǎng)基處理的皮下瘤體積較對照巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基處理組小,小鼠的存活率更高。我們可以得出結(jié)論,腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞cgi-58缺失的情況下可以抑制結(jié)腸癌的惡性進(jìn)展。3.巨噬細(xì)胞cgi-58敲低組較之對照組,il-1β表達(dá)明顯上調(diào),foxo1的磷酸化水平降低,提示FOXO1轉(zhuǎn)錄激活;而先前研究表明,FOXO1可調(diào)控IL-1β的轉(zhuǎn)錄表達(dá),因此我們推測CGI-58缺失可能通過激活FOXO1蛋白轉(zhuǎn)錄活性而促進(jìn)IL-1β的mRNA水平。而在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中,CGI-58表達(dá)升高,我們猜測:CGI-58/FOXO1通路可介導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞形成,發(fā)揮促瘤效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 結(jié)腸癌 CGI-58
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 CGI-58在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中的表達(dá)升高13-24
• 2.1 材料與方法13-21
• 2.2 結(jié)果21-23
• 2.3 討論23-24
• 第三章 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞CGI-58升高促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的惡性增殖24-34
• 3.1 材料與方法24-27
• 3.2 結(jié)果27-32
• 3.3 討論32-34
• 第四章 巨噬細(xì)胞CGI-58促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞惡性增殖的機(jī)制初探34-39
• 4.1 材料與方法34
• 4.2 結(jié)果34-37
• 4.3 討論37-39
• 全文結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 文獻(xiàn)綜述 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在結(jié)直腸癌中的作用44-51
• 參考文獻(xiàn)49-51
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文情況51-52
• 致謝52

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本文編號：923232